一种大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种大口黑鲈虹彩病毒的疫苗及其制备方法和应用。本发明专利技术的大口黑鲈虹彩病毒的疫苗是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码的蛋白。其是构建质粒pET21a

【技术实现步骤摘要】
一种大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗及其制备方法和应用

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[0001]本专利技术属于分子生物学及免疫学领域，具体涉及到一种具有免疫保护性的大口黑鲈虹彩病毒重组蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍
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[0002]大口黑鲈是一种经济价值高的淡水鱼类,近年来大口黑鲈养殖规模扩大,中国年产量已经超过50万吨，产值超过100亿元。但随着养殖环境日益恶化，各种病害特别是病毒性疾病频繁爆发，造成了重大的经济损失。大口黑鲈虹彩病毒(Large mouth bass virus,LMBV)是大口黑鲈的重要致病病原，它造成大口黑鲈的死亡率高。这种病毒极易感染大口黑鲈，且流行广泛，致使苗期大口黑鲈成活率低，成鱼养殖在高温期容易爆发该虹彩病毒病，造成严重经济损失。因此，如何防治虹彩病毒病已成为当今大口黑鲈养殖业急需解决的重要问题。
[0003]众所周知，疫苗作为化学药品和抗生素的替代品，是治疗疾病、特别是病毒病的最好选择。疫苗接种是防治病毒曼延的有效手段，包括灭活疫苗、DNA核酸疫苗、减毒疫苗和重组蛋白亚单位疫苗等。针对大口黑鲈虹彩病毒LMBV，已经有研究本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗，其特征在于，所述的大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的蛋白。2.根据权利要求1所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的蛋白与佐剂混合形成大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗。3.根据权利要求2所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的佐剂为Montanide
TM
ISA 763A VG佐剂。4.根据权利要求3所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的佐剂与疫苗蛋白rMCP混合体积比为1：1。5.一种大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列转入到表达载体中，再将此表达载体转入宿主菌中，表达SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的蛋白，然后纯化收集此蛋白，即得大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的表达载体为质粒pET
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32a。7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)。8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的大口黑鲈虹彩病毒的亚单位疫苗是通过以下方法制备的：1)质粒pET
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21a
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LMBV的构建：将质粒pET
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21a用BamH I和Xho I酶切，回收约5.4kb片段；以大口黑鲈虹彩病毒LMBV基因组DNA为模板，用引物LMBV
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F和LMBV
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R进行PCR扩增，产物纯化后用BamHI/XhoI酶切，回收约1.4kb片段，将其与上述5.4kb片段连接，连接液转化大肠杆菌DH5α后在含氨苄青霉素的LB固体培养基上培养，并筛选转化子提取质粒，即为质粒pET21a
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LMBV；所述引物LMBV

【专利技术属性】
技术研发人员：周胜，张泽妙，秦启伟，黄友华，魏京广，黄晓红，宁运尚，梁增健，
申请(专利权)人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室，
类型：发明
国别省市：