编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物制造技术

本发明专利技术涉及制药技术领域，尤其是涉及编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物。经过小鼠生存实验验证表明，采用本发明专利技术提供的编码ALDH2多肽的mRNA分子制备得到的mRNA药物，能够提高白酒灌胃小鼠的生存率，并且生存率随着药物剂量的提高而提高。同时Western Blot检测、ALDH2多肽活性检测、乙醇代谢产物含量检测和肝脏病理切片检测的多种检测结果表明，该mRNA药物能够在小鼠体内成功表达ALDH2多肽，显著提高ALDH2多肽活性，并在肝脏发挥促进乙醛代谢的作用，从而提高白酒灌胃小鼠生存率。从而提高白酒灌胃小鼠生存率。从而提高白酒灌胃小鼠生存率。

【技术实现步骤摘要】
编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物


[0001]本专利技术涉及制药
，尤其是涉及编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物。

技术介绍

[0002]人类ALDH2(乙醛脱氢酶2，aldehyde dehydrogenase
‑
2)是一种517个氨基酸的多肽，由位于染色体12q24的核基因编码。与ALDH家族的大多数成员一样，ALDH2是一种四聚体酶，在所有组织中普遍表达，但在肝脏中含量最高，并且在需要高线粒体氧化磷酸化的器官(如心脏和大脑)中也有大量表达。ALDH2因其在乙醇代谢中的关键作用而广为人知，且ALDH2可能是人体内唯一对乙醛代谢有显着贡献的ALDH酶。人体的乙醇解毒途径主要发生在肝脏中，由两个酶促步骤进行。第一步由乙醇脱氢酶(ADH)催化，第二步主要由ALDH2催化。
[0003]ALDH2*2等位基因是人类最广泛的ALDH2变体，它存在于多达三分之一的东亚人和8％世界人口中。杂合子个体(ALDH2*1/*2)的ALDH2酶活性不到野生型的50％，而ALDH2*2/*2纯合子的ALDH2酶活性不到野生型的 1
‑
4％。ALDH2*2携带者的ALDH2酶活性较低，表现为饮酒后特征性的面部潮红、头痛、恶心、头晕和心悸。
[0004]研究表明乙醛在与摄入乙醇相关的中毒中具有明确的作用。摄入的乙醇会迅速代谢为乙醛(通过乙醇脱氢酶)，然后通过线粒体酶ALDH2代谢为乙酸盐。在ALDH2缺乏的受试者中，即使在适量的乙醇之后，血液中的乙醛浓度也会显着升高。急性暴露于乙醛会导致许多与乙醇中毒相关的不愉快影响，包括恶心、心悸、呕吐、头晕和头痛。过度饮酒的ALDH2*1/*2受试者患食道癌和其他上呼吸消化道癌症的风险很大，这可能是乙醛的DNA破坏作用的结果。但是现有针对乙醇(酒精)摄入后，并没有有效促进体内乙醇或乙醛分解的方式，如纳络酮、利尿剂等，前者是阿片类药物过量的解毒剂，也能解除酒精的中枢抑制、缩短昏迷时间，只能让人变清醒；后者是通过加强乙醇及其代谢产物乙醛和酮体经尿液排泄，都无法加速乙醛的“解毒”过程，更无法保护肝脏被乙醇及其代谢产物损伤。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于，提供一种编码ALDH2多肽的核酸分子，包括mRNA分子，采用该mRNA分子制备得到的 mRNA药物，以期能够加速乙醛代谢过程，弥补目前酒精代谢引发疾病治疗药物的空白。
[0007]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供编码ALDH2多肽的核酸分子，包括(a)～(c)任一种：
[0009](a)具有SEQ ID No.15～18任一条所示的编码ALDH2多肽的核苷酸序列的mRNA分子；
[0010](b)在(a)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有编
码ALDH2多肽功能且与原核苷酸序列具有相同GC碱基对百分比含量的由(a)衍生的mRNA分子；
[0011](c)在严格条件下与(a)或(b)限定的mRNA分子杂交，且ALDH2多肽的核酸分子。
[0012]第二方面，本专利技术提供构建体，所述构建体包括前述实施方式所述的核酸分子，所述构建体的核苷酸序列还包括 UTR序列、5
’
帽子和poly(A)序列。
[0013]优选地，所述5
’
帽子包括7
‑
甲基
‑
鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
腺苷、鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
腺苷、7
‑
甲基
‑
鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
鸟苷、鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
鸟苷和m7G(5
’
)(2
’‑
OMeA)pG中的一种或几种；优选为m7G(5
’
)(2
’‑
OMeA) pG。
[0014]优选地，所述poly(A)序列中碱基A的数量为60～120，进一步优选为100。
[0015]优选地，所述UTR序列包括5
’
UTR序列和3
’
UTR序列。
[0016]进一步优选地，所述5
’
UTR序列具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.13所示的核苷酸序列。
[0017]进一步优选地，所述3
’
UTR序列具有SEQ ID No.3或SEQ ID No.14所示的核苷酸序列。
[0018]第三方面，本专利技术提供前述实施方式所核酸分子或前述实施方式所述构建体在制备mRNA药物中的应用。
[0019]在可选的实施方式中，所述mRNA药物的用途包括(
ⅰ
)或(
ⅱ
)：
[0020](
ⅰ
)补充ALDH2酶；
[0021](
ⅱ
)预防和/或治疗酒精代谢性疾病。
[0022]优选地，所述酒精代谢性疾病包括酒精引发的肝损伤或酒精性肝炎。
[0023]第四方面，本专利技术提供mRNA药物，所述mRNA药物包括前述实施方式所述的核酸分子或前述实施方式所述的构建体。
[0024]在可选的实施方式中，所述mRNA药物还包括包裹前述实施方式所述核酸分子或前述实施方式所述构建体的脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒组成包括Dlin
‑
MC3
‑
DMA、DSCP、胆固醇和PEG
‑
DMG。
[0025]在可选的实施方式中，所述脂质纳米颗粒按照摩尔份数计包括，20～50份的Dlin
‑
MC3
‑
DMA、5～20份的DSCP、 20～50份的胆固醇和1～5份的PEG
‑
DMG。
[0026]在可选的实施方式中，所述脂质纳米颗粒按照摩尔份数计包括50份的Dlin
‑
MC3
‑
DMA、10份的DSCP、38.5份的胆固醇和1.5份PEG
‑
DMG。
[0027]在可选的实施方式中，所述制备方法包括：
[0028](A)将编码ALDH2多肽的RNA溶解于缓冲液，将浓度调整为0.05mg/mL～0.5mg/mL，得到水相；
[0029](B)将Dlin
‑
MC3
‑
DMA、DOPG、胆固醇和PEG
‑
DMG溶解于无水乙醇，将有机相中的脂质成分的浓度调整至 5mg/mL～7mg/mL，得到有机相；
[0030](C)将步骤(A)的水相和步骤(B)的有机相按照1：3的体积比混合，除去乙醇后浓缩至体系中的mR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.编码ALDH2多肽的核酸分子，其特征在于，包括(a)～(c)任一种：(a)具有SEQ ID No.15～18任一条所示的编码ALDH2多肽的核苷酸序列的mRNA分子；(b)在(a)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有编码ALDH2多肽功能且与原核苷酸序列具有相同GC碱基对百分比含量的由(a)衍生的mRNA分子；(c)在严格条件下与(a)或(b)限定的mRNA分子杂交，且ALDH2多肽的核酸分子。2.构建体，其特征在于，所述构建体包括权利要求1所述的核酸分子，所述构建体的核苷酸序列还包括UTR序列、5
’
帽子和poly(A)序列；优选地，所述5
’
帽子包括7
‑
甲基
‑
鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
腺苷、鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
腺苷、7
‑
甲基
‑
鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
鸟苷、鸟苷
‑5’‑
三磷酸
‑5’‑
鸟苷和m7G(5
’
)(2
’‑
OMeA)pG中的一种或几种；优选为m7G(5
’
)(2
’‑
OMeA)pG；优选地，所述poly(A)序列中碱基A的数量为60～120，进一步优选为100；优选地，所述UTR序列包括5
’
UTR序列和3
’
UTR序列；进一步优选地，所述5
’
UTR序列具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.13所示的核苷酸序列；进一步优选地，所述3
’
UTR序列具有SEQ ID No.3或SEQ ID No.14所示的核苷酸序列。3.权利要求1所述核酸分子或权利要求2所述构建体在制备mRNA药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述mRNA药物的用途包括(
ⅰ
)或(
ⅱ
)：(
ⅰ
)补充ALDH2酶；(
ⅱ
)预防和/或治疗酒精代谢性疾病；优选地，所述酒精代谢性疾病包括酒精引发的肝损伤或酒精性肝炎。5.mRNA药物，其特征在于，所述mRNA药物包括权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭育才，张振东，方子辉，刘隽，刘琪，罗丽平，雷奕欣，李爽，
申请(专利权)人：珠海丽凡达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：