一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，属于禽病学分子学诊断技术领域，该一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，步骤一、雏鸭的颈上部紧靠头的位置采集血氧待用，解剖一日龄种鸭，获取内脏和组织，泄殖腔棉拭子采样，步骤二、首先利用内脏和组织对沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌进行分离鉴定，同时检测垂直传播病毒。病料采集方法包括：采集血液、卵黄囊、肝脏、泄殖腔棉拭子等，对种鸭垂传病原的样品采集，通过对采集的样品进行PCR检测，可检测雏鸭是否感染常见垂直传播病原，本发明专利技术简单方便、特异性强，通过对雏鸭的常见垂直传播病原的检测，有利于种鸭早期的疾病防控和净化。有利于种鸭早期的疾病防控和净化。有利于种鸭早期的疾病防控和净化。

【技术实现步骤摘要】
一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法


[0001]本专利技术涉及禽病学分子学诊断
，具体为一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法。

技术介绍

[0002]种鸭垂直传播疾病是指种鸭所带有的某种疾病其病原体可经卵黄、种蛋、蛋表等直接传播给后代孵化鸭苗，垂直传播病原均可以水平传播，造成鸭苗早期感染发病，引发鸭苗早期的大面漆感染，造成鸭苗生长出现问题，甚至发病死亡，给养鸭业造成巨大的经济损失。
[0003]鸭苗一般常见的垂传细菌性疾病有沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌，垂传病毒病包括禽流感病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、鸭细小病毒、鸭肝炎病毒。
[0004]种鸭垂直传播病的控制，最重要的就是在于早期的检测、预防，因此针对早期鸭苗垂传疾病进行检测非常重要，鸭苗早期样品采集是鸭苗质量检测的重要环节，关系到检测的准确率与时效性，现有的检测方法，没有办法做到早期的检测、预防，只能在发生大规模感染时，确定病因，协助进行治疗。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供的专利技术目的在于提供一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法。该一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，为了改善现有鸭苗早期的检测手段，针对带病种鸭进行早期控制，而提供一种一日龄种鸭常见垂直传播病原的病料采集及检测方法，本专利技术的雏鸭的病料采集及检测方法，病料采集方法包括：采集血液、卵黄囊、肝脏、泄殖腔棉拭子等，对种鸭垂传病原的样品采集，通过对采集的样品进行PCR检测，可检测雏鸭是否感染常见垂直传播病原，本专利技术简单方便、特异性强，通过对雏鸭的常见垂直传播病原的检测，有利于种鸭早期的疾病防控和净化。
[0006]为了实现上述效果，本专利技术提供如下技术方案：一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，包括以下步骤：
[0007]步骤一、雏鸭的颈上部紧靠头的位置采集血氧待用，解剖一日龄种鸭，获取内脏和组织，泄殖腔棉拭子采样；
[0008]步骤二、首先利用内脏和组织对沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌进行分离鉴定，同时检测垂直传播病毒；
[0009]步骤三、待检雏鸭用消毒液将羽毛打湿，置于剖检台，点燃酒精灯，打开腹腔，灼烧吊菌环，无菌采集肝脏、脑组织，5％血清琼脂培养基划线分离；
[0010]步骤四、采集的组织样品进行研磨处理后，对禽流感病毒、呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭细小病毒、鸭肝炎病毒的进行检测，取离心后的上清液提取病毒RNA或DNA，RNA反转录为cDNA后进行PCR扩增，DNA进行PCR扩增可以得到相应病毒的目的片段，随后测序，确定是否感染病毒。
[0011]进一步的，根据步骤一中的操作步骤，所述采好的血样要竖立放置，避免受冷和振动，在25
‑
37℃环境中静置10
‑
30min，这样有利于血液凝固和析出血清，否则容易发生溶血，然后放置4℃冰箱不少于4小时，待纤维蛋白收缩后，将血液以3000r/min离心10分钟，取血清作为待检样品。
[0012]进一步的，根据步骤一中的操作步骤，所述雏鸭体表进行消毒，从腹部剪开羽毛皮肤，打开腹腔漏出内脏，采集脏器主要有肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、胰腺、脑等组织脏器，未吸收完全的卵黄单独摘除，防止破裂撒体腔内，在样品采集选择上，最好多选取几只病料进行集中混合，防止个体选择上造成漏检，同时根据重点疫病特点，选取针对性病毒含量高的部位进行采集，所采集的组织脏器不宜过大，一般采集2
×
2cm大小的组织即可，较小的脏器可以全部取出。
[0013]进一步的，根据步骤一中的操作步骤，所述通过泄殖腔拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入雏鸭泄殖腔内，转动3
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5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖。
[0014]进一步的，根据步骤二中的操作步骤，所述肝脏、卵黄取样，无菌镊子取少量肝脏进入增菌液，取上述增菌液分区划线接种于ss培养基上，进行菌落培养，SS培养基出现紫色菌落，即可判定含有沙门氏菌。
[0015]进一步的，根据步骤三中的操作步骤，所述无菌采集肝脏、脑组织，5％血清琼脂培养基划线分离，5％血清营养培养基平板上生长出均匀一致的菌落，表面光滑，呈水滴状，稍隆起，圆形，边缘整齐，45度角对光观察可见淡蓝色荧光，血清型鉴定：将纯化后的鸭疫里默氏杆菌用无菌PBS吹下，吹下来的菌落呈乳白色，分别取25μL菌液与1、2、6、7、10型等阳性血清混合，对应血清型在玻片上出现颗粒状凝集。
[0016]进一步的，根据步骤四中的操作步骤，所述鸭呼肠孤病毒的检测方法包括：采集的组织样品进行研磨处理后，取离心后的上清液提取病毒RNA，并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增引物为：
[0017]XREO
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P1:ACCTCAGGATATCGCTGAAACT；
[0018]XREO
‑
P2:CTCCATCCCTGCAGCACATGTAAAG；
[0019]目的片段为580bp，扩增程序为50℃30min，94℃5min，95℃30s，54℃30s，72℃80s，72℃8min；
[0020]结果判定：鸭呼肠孤病毒RT
‑
PCR扩增可以得到相对应目的条带大小的片段，则判定相应的病料为阳性。
[0021]进一步的，根据步骤四中的操作步骤，所述鸭坦布苏病毒的检测方法包括：采集的组织样品进行研磨处理后，取离心后的上清液提取病毒RNA，并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增引物为：
[0022]CAP3:ATGTCTAACAAAAAACCAGG；
[0023]CAP4:CAGCCCAGCAACTATCG；
[0024]目的片段为363bp，扩增程序为50℃30min，94℃5min，95℃30s，54℃30s，72℃80s，72℃5min；
[0025]结果判定：坦布苏病毒RT
‑
PCR扩增可以得到363bp大小的片段，并经测序得知属于鸭坦布苏病毒，则判定相应的病料为鸭坦布苏阳性。
[0026]进一步的，根据步骤四中的操作步骤，所述新型鸭细小病毒的检测方法包括：采集的组织样品进行研磨处理后，取离心后的上清液提取病毒DNA，进进行PCR扩增，扩增引物为：
[0027]MZJ－细小s：GTGGTCGCAGGTCCGTAGA；
[0028]MZJ－细小x:CCAACAGAGCAGCAAAGA；
[0029]目的片段为363bp，扩增程序为94℃3min，95℃15s，54℃15s，72℃80s，72℃5min；
[0030]结果判定：新型鸭细小病毒PCR扩增可以得到363bp目的片段，并经测序分析后属于新型鸭细小病毒，则判定相应的病料为阳性。
[0031]进一步的，根据步骤四中的操作步骤，所述病毒的检测方法包括：采集的组织样品进行研磨处理后，取离心后的上清液提取病毒RNA，并反转录为c本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、雏鸭的颈上部紧靠头的位置采集血氧待用，解剖一日龄种鸭，获取内脏和组织，泄殖腔棉拭子采样；S2、首先利用内脏和组织对沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌进行分离鉴定，同时检测垂直传播病毒；S3、待检雏鸭用消毒液将羽毛打湿，置于剖检台，点燃酒精灯，打开腹腔，灼烧吊菌环，无菌采集肝脏、脑组织，5％血清琼脂培养基划线分离；S4、采集的组织样品进行研磨处理后，对禽流感病毒、呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭细小病毒、鸭肝炎病毒的进行检测，取离心后的上清液提取病毒RNA或DNA，RNA反转录为cDNA后进行PCR扩增，DNA进行PCR扩增可以得到相应病毒的目的片段，随后测序，确定是否感染病毒。2.据权利要求1所述的一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S1中的操作步骤，所述采好的血样要竖立放置，避免受冷和振动，在25
‑
37℃环境中静置10
‑
30min，这样有利于血液凝固和析出血清，否则容易发生溶血，然后放置4℃冰箱不少于4小时，待纤维蛋白收缩后，将血液以3000r/min离心10分钟，取血清作为待检样品。3.据权利要求1所述的一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S1中的操作步骤，所述雏鸭体表进行消毒，从腹部剪开羽毛皮肤，打开腹腔漏出内脏，采集脏器主要有肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、胰腺、脑等组织脏器，未吸收完全的卵黄单独摘除，防止破裂撒体腔内，在样品采集选择上，最好多选取几只病料进行集中混合，防止个体选择上造成漏检，同时根据重点疫病特点，选取针对性病毒含量高的部位进行采集，所采集的组织脏器不宜过大，一般采集2
×
2cm大小的组织即可，较小的脏器可以全部取出。4.据权利要求1所述的一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S1中的操作步骤，所述通过泄殖腔拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入雏鸭泄殖腔内，转动3
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5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖。5.据权利要求1所述的一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S2中的操作步骤，所述肝脏、卵黄取样，无菌镊子取少量肝脏进入增菌液，取上述增菌液分区划线接种于ss培养基上，进行菌落培养，SS培养基出现紫色菌落，即可判定含有沙门氏菌。6.据权利要求1所述的一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S3中的操作步骤，所述无菌采集肝脏、脑组织，5％血清琼脂培养基划线分离，5％血清营养培养基平板上生长出均匀一致的菌落，表面光滑，呈水滴状，稍隆起，圆形，边缘整齐，45度角对光观察可见淡蓝色荧光，血清型鉴定：将纯化后的鸭疫里默氏杆菌用无菌PBS吹下，吹下来的菌落呈乳白色，分别取25μL菌液与1、2、6、7、10型等阳性血清混合，对应血清型在玻片上出现颗粒状凝集。7.据权利要求1所述的一种一日龄种鸭常见垂传播病原的病料采集及检测方法，其特
征在于，包括以下步骤：根据S4中的操作步骤，所述鸭呼肠孤病毒的检测方法包括：采集的组织...

【专利技术属性】
技术研发人员：张中波，王胜，褚新星，汪建华，许明清，
申请(专利权)人：宁阳正和生物育种有限公司山东宁阳和樱种鸭有限公司，
类型：发明
国别省市：