肿瘤特异性密蛋白18.2抗体制造技术

本发明专利技术提供肿瘤特异性抗CLDN18.2抗体或其片段。与表达CLDN18.2的健康组织相比，抗体或其片段对表达CLDN18.2的肿瘤组织展现出结合增加。此外，抗体不表现出与CLDN18.1的交叉反应性。本发明专利技术还提供核酸、载体、宿主细胞和医学用途。学用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肿瘤特异性密蛋白18.2抗体
[0001]专利技术背景
[0002]紧密连接是连接相邻的上皮或内皮细胞以形成屏障，阻止分子在细胞之间通过，并有助于维持细胞和组织的极性的多蛋白复合物。紧密连接由三大组跨膜蛋白组成：密蛋白和闭合蛋白、细胞质斑块蛋白和带蛋白。它们还含有细胞骨架蛋白和信号传导蛋白，例如肌动蛋白、肌球蛋白II和PKCζ。这些蛋白质相互作用以维持紧密连接结构(Yu和Turner 2008)。
[0003]密蛋白形成23种蛋白质的家族(Hewitt,Agarwal和Morin 2006)。密蛋白18是由CLDN18基因编码的人类蛋白质，可在上皮细胞中形成紧密连接股。人CLDN18可以在两个可变第一外显子的情况下可变剪接，产生两种蛋白质同种型(isoform)CLDN18.1(或密蛋白18.1)和CLDN18.2(或密蛋白18.2)。CLDN18.2在WO2000/015659中首次公开为Zsig28蛋白。这两种同种型的不同之处在于涵盖第一细胞外环的N端69个氨基酸。第一胞外域的跨度从氨基酸28到氨基酸80。在此范围内，CLDN18.1和CLDN18.2之间存在8个氨基酸差异。这两种不同的同种型在不同的组织中表达，CLDN18.1主要在肺组织中表达，而CLDN18.2显示出胃特异性(Niimi等人2001)。CLDN18.2在正常胃中的表达限于胃上皮的分化的短寿命细胞。CLDN18.2的表达已在各种肿瘤组织中得到进一步鉴定。例如，已发现CLDN18.2在胰腺、食管、卵巢和肺部的肿瘤中表达，与不同的组织学亚型相关(Sahin等人2008)。人CLDN18.2蛋白的氨基酸序列可来源于NCBI参考序列：NP_001002026.1。该序列也公开为SEQ ID NO:133。
[0004]鉴于CLDN18.2在正常组织中的受限表达模式以及其在人类癌症中的异位表达，其是上皮肿瘤抗体治疗的有吸引力的癌症靶标。已经对这种抗体疗法进行了许多研究。WO2004/047863鉴定了CLDN18的剪接变体并筛选了针对源自CLDN18.2的不同肽的抗体：肽DQWSTQDLYN(SEQ ID NO:57)，CLDN18.2的N端胞外，与糖基化无关；肽NNPVTAVFNYQ(SEQ ID NO:58)，CLDN18.2的N端胞外，大体上未糖基化；和肽STQDLYNNPVTAVF(SEQ ID NO:59)，CLDN18.2的N端胞外域，未糖基化。其还公开了用在CLDN18.1和CLDN18.2同种型共同的C端胞外域中的泛CLDN18肽TNFWMSTANMYTG(SEQ ID NO:60)筛选的多克隆兔抗体。WO2005/113587公开了针对由肽序列定义的CLDN18.2特定表位的抗体：ALMIVGIVLGAIGLLV(SEQ ID NO:61)和RIGSMEDSAKANMTLTSGIMFIVS(SEQ ID NO:62)。WO2007/059997公开了通过用肽METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPARRARRTKLGTELGSTPVWWNSADGRMDQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGLWRSCVRESSGFTECRGYFTLLGLPAMLQAVRAAIQHSGGRSRRARTKTHLRRGSE(SEQ ID NO:63)免疫获得的CLDN18.2特异性单克隆抗体，包括具有N
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端和C
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端延伸的CLDN18.2的第一胞外域。通过这种免疫获得的抗体通过补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)介导细胞杀伤。抗体IMAB362，也称为Claudiximab或Zolbetuximab，公开于WO2007/059997和WO2016/165762。IMAB362是源自鼠单克隆抗体的IgG1抗体，并且已经被嵌合以展示人IgG1恒定区供临床使用。WO2008/145338还公开了与第一胞外域内的重叠肽(MDQWSTQDLYNNPVT(SEQ ID NO:64)、LYNNPVTAVFNYQGL(SEQ ID NO:65)、VFNYQGLWRSCVRES(SEQ ID NO:66)、QGLWRSCVRESSGFT(SEQ ID NO:67)和RSCVRESSGFTECRG(SEQ ID NO:68))
结合的抗体。为了产生靶向CLDN18.2的C
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端部分的抗体以用于检测癌症组织切片的细胞中的CLDN18.2表达的诊断目的，WO2013/167259公开了与CLDN18.2的C
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端表位结合的抗体。这两个表位的序列是TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO:69)和EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO:70)。WO2013/174509提出了抗CLDN18.2抗体与稳定γδ T细胞的药剂或与稳定或增加CLDN18.2表达的药剂的组合。抗体可以与治疗部分如细胞毒素、药物(例如，免疫抑制剂)或放射性同位素缀合。WO2014/075788公开了使用结合CLDN18.2和CD3的双特异性抗体治疗癌症疾病的方法。WO2014/127906公开了稳定或增加CLDN18.2表达的组合剂。WO2016/166122公开了抗CLDN18.2单克隆抗体，该抗体可在CLDN18.2结合后高效内化，因此适用于抗体
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药物缀合物(ADC)开发。此外，还公开了分别使用可切割的SPDB或缬氨酸
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瓜氨酸接头将此类抗体与药物DM4和MMAE缀合。然而，尽管专利申请中公开了所有抗体，但目前只有WO2007/059997和WO2016/165762中公开的嵌合IMAB362在临床试验中得到测试。除了这些抗体和ADC，WO2018/006882还公开了基于抗CLDN18.2单克隆抗体的嵌合抗原受体(CAR)。WO2018/006882的抗体已经人源化，其序列在与Jiang等人2018(Jiang等人2018)相关的补充材料部分中公开。基于人源化抗体的CAR T细胞目前正在晚期胃腺癌和胰腺癌患者的I期临床试验(ClinicalTrials.gov标识符：NCT03159819)中进行测试。CN109762067公开了介导通过CDC和ADCC的细胞杀伤的其他抗CLDN18.2单克隆抗体。WO2019/173420公开了具有ADCC活性的抗CLDN18.2人源化单克隆抗体。WO2019/175617公开了相较于IMAB362结合不同的表位的抗CLDN18.2单克隆抗体。WO2019/219089公开了结合CLDN18.2突变体的单克隆抗体。
[0005]已描述CLDN18.2以不同的构象存在并含有潜在的细胞外N
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糖基化位点(参见WO2007/059997第3页，第一段)，这可能导致正常细胞和肿瘤细胞之间潜在不同的拓扑结构/差异糖基化(参见WO2007/059997第4页，第二段)。然而，报道的抗体无一优先靶向肿瘤细胞上表达的CLDN18.2。由于CLDN18.2不仅在肿瘤中表达，而且在健康组织即在胃组织中表达(Sahin等人2008本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.结合CLDN18.2的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段展现出与表达CLDN18.2的健康组织相比对表达CLDN18.2的肿瘤组织的结合增加。2.结合CLDN18.2的抗体或其片段，其包含分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。3.权利要求1或2的抗体或其片段，其包含：a.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；b.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；c.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:11的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；d.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:11的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；e.分别为SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；f.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；g.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:11的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；h.分别为SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:8的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；或i.分别为SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:8的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:11的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。4.权利要求1或2的抗体或其片段，其包含：a.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；b.分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；或c.分别为SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:11的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，优选地包含：d.SEQ ID NO:27的VH序列和SEQ ID NO:28的VL序列；e.SEQ ID NO:29的VH序列和SEQ ID NO:30的VL序列；或f.SEQ ID NO:31的VH序列和SEQ ID NO:32的VL序列。5.权利要求1
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3中任一项的抗体或其片段，其包含：a.与SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VH序列；b.与SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少
98％的序列同一性的VH序列；c.与SEQ ID NO:35的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VH序列；d.与SEQ ID NO:36的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VH序列；或e.与SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VH序列；和f.与SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VL序列；g.与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VL序列；h.与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VL序列；或i.与SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性的VL序列，优选地包含：a.SEQ ID NO:33的VH序列；b.SEQ ID NO:34的VH序列；c.SEQ ID NO:35的VH序列；d.SEQ ID NO:36的VH序列；或e.SEQ ID NO:37的VH序列；和f.SEQ ID NO:38的VL序列；g.SEQ ID NO:39的VL序列；h.SEQ ID NO:40的VL序列；或i.SEQ ID NO:41的VL序列。6.权利要求1或2的抗体或其片段，其包含：a.SEQ ID NO:33的VH序列和SEQ ID NO:38的VL序列；b.SEQ ID NO:34的VH序列和SEQ ID NO:38的VL序列；c.SEQ ID NO:34的VH序列和SEQ ID NO:39的VL序列；d.SEQ ID NO:34的VH序列和SEQ ID NO:40的VL序列；e.SEQ ID NO:35的VH序列和SEQ ID NO:38的VL序列；f.SEQ ID NO:36的VH序列和SEQ ID NO:41的VL序列；g.SEQ ID NO:36的VH序列和SEQ ID NO:40的VL序列；h.SEQ ID NO:37的VH序列和S...

【专利技术属性】
技术研发人员：L巴默特，L基里奇萨迪尔科娃，S霍斯科娃，V伊娃，L瓦尔德迈尔，R贝尔利，U莫比乌斯，
申请(专利权)人：斯迪安生物技术公司，
类型：发明
国别省市：