一种生长激素融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种生长激素融合蛋白及其应用。该融合蛋白包括一种Fc突变体，该突变体包括：第一肽链，其中，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4Fc片段，具有如下位点的突变：第234位、第235位、第298位、第299位、第300位中的至少一位；或第231

【技术实现步骤摘要】
一种生长激素融合蛋白及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及一种生长激素融合蛋白及其应用，更具体地，本专利技术涉及一种Fc突变体、融合蛋白、核酸分子、表达载体、重组细胞、组合物、制药用途以及药物。

技术介绍

[0002]生长激素缺乏症是一种公认的临床综合征，与许多代谢异常相关，包括身体成分异常、体能下降、脂质代谢改变、骨量减少、胰岛素抵抗增加和生活质量降低。大多数与生长激素缺乏症相关的代谢异常可通过重组人生长激素(rhGH)替代物逆转。传统的生长激素缺乏症治疗包括每天皮下注射rhGH。然而，注射时间过于频繁，对许多患者来说并不方便，引起了人们对治疗依从性差的担忧，这可能导致疗效降低。长效rhGH制剂不仅可以减少注射次数，从而提高依从性，并有助于提高GH治疗的疗效。
[0003]已有研究使用免疫球蛋白Fc制备融合蛋白，以增加融合蛋白的半衰期(Cheol Ryong Ku等人，Eur J Endocrinol.2018 Sep；179(3):169
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179；Wolfgang Glaesner等人，Diabetes Metab Res Rev.2010May；26(4):287
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96.)。由于生长激素生物学活性的发挥需要一定的空间效应，因此融合蛋白中Fc的连接不当会造成空间位阻效应。但研究发现，采用GGGGSGGGSGGGGS或Genexine GX
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H9的部分片段与Fc进行连接，均存在对人生长激素受体结合力低，促进细胞增殖的活性低，及体外活性低等问题。
[0004]因此，仍亟需一种对人生长激素受体具有较高结合活性，能够促进T细胞增殖的融合蛋白。

技术实现思路

[0005]本申请是基于专利技术人对下列问题和事实的发现而提出的：
[0006]在本专利技术的的第一方面，本专利技术提出了一种Fc突变体。根据本专利技术的实施例，包括：第一肽链，其中，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4 Fc片段，具有如下位点的突变：第234位、第235位、第298位、第299位、第300位中的至少一位；或第231
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239位；或2)相较于野生型IgG1 Fc片段，具有如下位点的突变：第228
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239位，和/或，第268位、第296位、第330位和第331位中的至少一位。专利技术人对IgG4或IgG1抗体的Fc片段分别进行上述突变，不同的位点进行突变具有不同的作用，根据本专利技术实施例的Fc突变体可以有效降低所述Fc片段制备过程中的碎片含量，避免其形成半抗体，并消除ADCC以及CDC效应，利用本申请所述Fc突变体制备的融合蛋白与人源生长激素受体具有较强的结合活性，可以消除ADCC以及CDC效应，促进Nb2
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11细胞增殖，能够有效治疗或预防人生长激素异常相关疾病。
[0007]根据本专利技术的实施例，上述Fc突变体还可以进一步包括如下附加技术特征中的至少之一：
[0008]根据本专利技术的实施例，所述Fc突变体不能将第235位氨基酸突变为丙氨酸。
[0009]根据本专利技术的实施例，所述Fc突变体的序列不为SEQ ID NO:69。
[0010]Fc突变体排除序列(第一肽链6)(相较于野生型IgG4抗体的Fc片段具有F234V和L235A突变)的氨基酸序列：
[0011]APEVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:69)。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述Fc突变体不能同时，有且只有第234位和第235位氨基酸突变。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述Fc突变体进一步包括第二肽链，所述第二肽链的C端与所述第一肽链的N端相连，所述第二肽链具有如下突变位点：1)相较于野生型IgG4的铰链区，具有如下位点的突变：第228位；或2)具有野生型IgD片段1或IgD片段1突变体。
[0014]野生型IgG4的铰链区包括：
[0015]ESKYGPPCPSCP(SEQ ID NO:72)。
[0016]根据本专利技术的实施例，所述野生型IgD片段1包括野生型IgD的第287
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298位氨基酸。
[0017]根据本专利技术的实施例，所述IgD片段1突变体相较于野生型IgD片段1具有如下位点的突变：第291
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296位中的至少一位。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述Fc突变体进一步包括第三肽链，所述第三肽链的C端与所述第二肽链的N端相连，所述第三肽链相较于野生型IgD片段2，具有如下突变位点中的至少之一：第263位、第264位、第266位、第267位、第268位、第269位、第270位、第271位、第272位、第273位、第274位、第275位、第276位、第277位、第278位、第280位、第281位、第283位、第284位、第285位、第286位、第287位、第288位、第289位、第290位、第291位。
[0019]根据本专利技术的实施例，所述野生型IgD片段2包括野生型IgD的第262
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291位氨基酸。
[0020]根据本专利技术的实施例，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4 Fc片段，具有如下位点的突变：第234位和第235位；或第298位、第299位、第300位；或第231
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239位；或2)相较于野生型IgG1 Fc片段，具有如下位点的突变：第228
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239位、第268位、第296位、第330位和第331位。
[0021]根据本专利技术的实施例，所述第二肽链1)相较于野生型IgG4的铰链区，具有如下位点的突变：第228位；或2)具有野生型IgD片段1或IgD片段1突变体。
[0022]根据本专利技术的实施例，所述IgD片段1突变体相较于野生型IgD片段1具有如下突变：第291
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296位。
[0023]根据本专利技术的实施例，所述第三肽链相较于野生型IgD片段2，具有如下突变位点：1)第266位、第267位、第268位、第277位、第278位、第280位、第283位、第285位、第286位和第287位；或2)第266位、第277位、第278位、第280位、第283位、第285位、第286位和第287位；或3)第266位、第269位、第270位、第271位、第273位、第274位、第275位、第277位、第278位、第281位和第283位；或4)第263位、第264位、第266位、第269位、第270位、第272位、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Fc突变体，其特征在于，包括：第一肽链，其中，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4 Fc片段，具有如下位点的突变：第234位、第235位、第298位、第299位、第300位中的至少一位；或第231
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239位；或2)相较于野生型IgG1 Fc片段，具有如下位点的突变：第228
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239位，和/或，第268位、第296位、第330位和第331位中的至少一位。2.根据权利要求1所述的Fc突变体，其特征在于，所述Fc突变体不能将第235位氨基酸突变为丙氨酸；任选地，所述Fc突变体的序列不为SEQ ID NO:69；任选地，所述Fc突变体进一步包括第二肽链，所述第二肽链的C端与所述第一肽链的N端相连，所述第二肽链：1)相较于野生型IgG4的铰链区，具有如下位点的突变：第228位；或2)具有野生型IgD片段1或IgD片段1突变体；任选地，所述野生型IgD片段1包括野生型IgD的第287
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298位氨基酸；任选地，所述IgD片段1突变体相较于野生型IgD片段1具有如下位点的突变：第291
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296位中的至少一位；任选地，所述Fc突变体进一步包括第三肽链，所述第三肽链的C端与所述第二肽链的N端相连，所述第三肽链相较于野生型IgD片段2，具有如下突变位点中的至少之一：第263位、第264位、第266位、第267位、第268位、第269位、第270位、第271位、第272位、第273位、第274位、第275位、第276位、第277位、第278位、第280位、第281位、第283位、第284位、第285位、第286位、第287位、第288位、第289位、第290位、第291位；任选地，所述野生型IgD片段2包括野生型IgD的第262
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291位氨基酸。3.根据权利要求1～2任一项所述的Fc突变体，其特征在于，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4Fc片段，具有如下位点的突变：第234位和第235位；或第298位、第299位、第300位；或第231
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239位；或2)相较于野生型IgG1 Fc片段，具有如下位点的突变：第228
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239位、第268位、第296位、第330位和第331位；任选地，所述第二肽链1)相较于野生型IgG4的铰链区，具有如下位点的突变：第228位；或2)具有野生型IgD片段1或IgD片段1突变体；任选地，所述IgD片段1突变体相较于野生型IgD片段1具有如下突变：第291
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296位；任选地，所述第三肽链相较于野生型IgD片段2，具有如下突变位点：1)第266位、第267位、第268位、第277位、第278位、第280位、第283位、第285位、第286位和第287位；或2)第266位、第277位、第278位、第280位、第283位、第285位、第286位和第287位；或3)第266位、第269位、第270位、第271位、第273位、第274位、第275位、第277位、第278位、第281位和第283位；或4)第263位、第264位、第266位、第269位、第270位、第272位、第274位、第276位、第284位、第287
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291。4.根据权利要求1～3任一项所述的Fc突变体，其特征在于，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4Fc片段，具有如下突变：F234A和L235E；或F234V和L235E；或S298N、T299A和Y300S；或第231
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239位氨基酸缺失；或2)相较于野生型IgG1 Fc片段，具有如下突变：第228
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239位氨基酸缺失、H268Q、Y296F、A330S和P331S；
任选地，所述第二肽链相较于野生型IgG4的铰链区，具有如下突变：S228P；或2)具有野生型IgD片段1或IgD片段1突变体；任选地，所述IgD片段1突变体相较于野生型IgD片段1具有如下突变：P291C、S292H、H293P、T294R、Q295L、P296S；任选地，所述第三肽链相较于野生型IgD片段2，具有如突变：1)R266E、G267R、G268E、K277E、E278K、Q280E、R283E、T285E、K286G和T287E；或2)R266K、K277E、E278K、Q280N、R283E、T285E、K286R和T287E；或3)R266K、E269D、E270D、K271E、K273E、E274D、K275E、K277E、E278K、E281Q和R283G；或4)N263Q、T264S、R266K、...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦锁富，鄢成伟，邱玉信，郭昵宁，
申请(专利权)人：深圳科兴药业有限公司，
类型：发明
国别省市：