与皮肤修复相关的miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了一种与皮肤修复相关的miRNA标志物及其应用，本发明专利技术开发了基于实时定量PCR技术的组织miRNA的两步法检测试剂、试剂盒和检测方法。本发明专利技术所述miRNA包括miR

【技术实现步骤摘要】
与皮肤修复相关的miRNA标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体而言本专利技术提供了与皮肤修复相关的miRNA标志物、及其在皮肤修复过程检测、相关药物筛选中应用，以及相关的miRNA检测试剂、试剂盒。

技术介绍

[0002]皮肤由表皮、真皮、皮下组织和皮下附属器4个部分组成，是保护人体不受外来有害因素损害的天然屏障，也是人体的第一道防线。皮肤的重量达人全身体重的5％～15％，而皮肤的全部面积可达1.5～2平方米。日常生活中，皮肤外伤、皮肤疾病、大面积烧伤、慢性溃疡或者手术创伤的皮肤缺损经常会导致化脓、疼痛、肿痛等状况，影响病患的工作及生活质量，严重时还会引发败血症、破伤风等疾病，对患者的生命健康造成威胁。
[0003]皮肤受损后，正常的创面修复过程通常会经历以血小板聚集活化的凝血阶段、以炎性细胞浸润吞噬细胞碎片和细菌为主的炎症阶段，还有以再上皮化、肉芽组织形成为主的增殖阶段和细胞外基质重塑阶段。皮肤创伤的修复是一个连续且相互重叠的过程，创面修复时，成纤维细胞、内皮细胞和免疫细胞等不同细胞分泌多类型的细胞因子，有序实现细胞的增殖、迁移和凋亡等程序，同时维持细胞外基质的沉积与降解之间的动态平衡，最终实现创面的愈合。
[0004]MicroRNA（miRNA）是一类高度保守的非编码单链RNA分子，长度约22个核苷酸，由较长的双链前体miRNA（pre
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miRNA）经核糖核酸酶III Dicer处理而成。miRNA可通过靶向结合信使RNA（mRNA）并使其降解或抑制其翻译，实现转录后基因表达调控。miRNA作为基因表达的重要调控分子，几乎参与了机体所有的生理和病理过程，如炎症、脂代谢、自噬等。近年多项研究结果显示，miRNA 参与调控皮肤及其附属器的形成和稳态，且与皮肤再生修复密切相关。皮肤创面愈合的不同阶段中miRNA的表达各不相同，miRNA的异常表达可能会导致创面的畸形愈合。
[0005]由于miRNA 在维持皮肤正常结构功能及创面再生修复过程中的重要作用，寻找在创面再生修复不同阶段与正常皮肤之间存在差异表达的miRNA，并建立相应的检测体系，不仅可以明确这些特异性的miRNAs在皮肤创面愈合中的作用，还能为其调控机制的研究提供基础，同时为皮肤创面愈合药物的筛选和评价提供靶点。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在提供一种皮肤修复相关的miRNA组合及其应用，以及相关的检测试剂、试剂盒。从而为解决本领域中皮肤修复、皮肤创面愈合中过程的监控、相关药物研发、皮肤炎症和细胞凋亡诊断相关问题提供解决方案。
[0007]为实现上述申请目的，本专利技术结合结合miRNA的特点，检测皮肤受损后，正常的创面修复过程的凝血阶段、炎症阶段、增殖阶段和重塑阶段中miRNA的表达情况进行检测，筛选出了与皮肤外伤修复相关的miRNA分子标志物。
[0008]在一个方案中，本专利技术提供的miRNA分子可以作为标志物用于皮肤修复过程检测，
所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。
[0009]在一个方案中，本专利技术提供了miRNA分子作为靶标在皮肤修复相关药物筛选中的应用，所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。所述药物通过调控或影响miRNA分子miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种的表达，进而影响皮肤的创伤修复，所述药物可以是化学药、生物药、小分子药物、生物药物药物可以是蛋白、抗体、核酸分子例如DNA、RNA分子。
[0010]在一个方案中，本专利技术提供了miRNA分子作为皮肤炎症和细胞凋亡标志物的应用，其特征在于：所述miRNA分子为miR
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7a
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。通过检测miRNA的表达进而判断皮肤的炎症程度、皮肤是否恶化、皮肤细胞凋亡程度，指示皮肤修复过程的和皮肤修复程度、进程的好与不良。
[0011]在一个方案中，本专利技术提供了miRNA分子在制备皮肤修复过程检测试剂、皮肤炎症和细胞凋亡诊断试剂中的应用，所述miRNA分子为miR
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7a
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5p、miR
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335
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5p和miR
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3p中的一种或多种。
[0012]在一个方案中，本专利技术提供了miRNA分子在制备皮肤修复过程检测试剂盒、皮肤炎症和细胞凋亡诊断试剂盒中的应用，所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。
[0013]在一个方案中，本专利技术述试剂/试剂盒为基于PCR平台进行分子生物检测的试剂/试剂盒，PCR平台的检测技术包括常规PCR检测方法、荧光定量PCR、数字PCR、环介导等温扩增技术等。优选的，本专利技术的相关试剂/试剂盒为miRNA两步法检测试剂/试剂盒。
[0014]在一个方案中，本专利技术所述试剂/试剂盒包括miRNA分子特异性茎环结构转录引物、看家基因转录引物、探针序列、PCR正向引物引物、PCR通用下游引物；优选的所述看家基因为U6。
[0015]本专利技术的试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，例如转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，无RNA酶的水和Taq DNA聚合酶。
[0016]在一个方案中，本专利技术所述的miRNA分子为miR
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5p，或miR
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5p，或miR
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3p，或miR
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5p与miR
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5p联合，或miR
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5p与miR
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3p联合，或miR
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5p与miR
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3p联合，或miR
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5p、miR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miRNA分子作为标志物在皮肤修复过程检测中的应用，其特征在于：所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。2.miRNA分子作为靶标在皮肤修复相关药物筛选中的应用，其特征在于：所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。3.miRNA分子作为皮肤炎症和细胞凋亡标志物的应用，其特征在于：所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。4.miRNA分子在制备皮肤修复过程检测试剂、皮肤炎症和细胞凋亡诊断试剂中的应用，其特征在于：所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。5.miRNA分子在制备皮肤修复过程检测用试剂盒、皮肤炎症和细胞凋亡诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述miRNA分子为miR
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5p、miR
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5p和miR
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3p中的一种或多种。6.根据权利要4或权利要求5所述的应用，所述试剂/试剂盒为基于PCR平台miRNA两步法检测试剂/试剂盒。7.根据权利要4或权利要求5所述的应用，所述试剂/试剂盒包括miRNA分子特异性茎环结构转录引物、看家基因U6转录引物、探针序列、PCR正向引物引物、PCR反向引物、PCR通用下游引物；其中，miR
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5p对应的转录引物如SEQ ID NO.5所示，miR
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5pPCR正向引物序列如SEQ ID NO.6所示，miR
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5p探针序列如SEQ ID NO.7所示；miR
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【专利技术属性】
技术研发人员：曹宇浩，宋雪梅，竺亚斌，赵枫，庞倩，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：