一种引发溶血性输血反应的A2血型变异型的SNP位点制造技术

本发明专利技术的目的是提供一种用于检测ABO血型系统A型变异型引发的急性溶血性输血反应的SNP位点，为新的A型变异型基因编码区域由起始密码子起第467位和626位碱基。本发明专利技术提供了A型变异型基因的新的用途，从而提供了一种有效的对能够引发的急性血管内溶血性输血反应的快速基因诊断、基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本发明专利技术所提供的基因的新突变位点及检测引物可以有效的用于临床患者外周血进行新的A型变异型基因突变位点的快速检测。行新的A型变异型基因突变位点的快速检测。行新的A型变异型基因突变位点的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种引发溶血性输血反应的A2血型变异型的SNP位点


[0001]本专利技术属于基因诊断制品
，具体涉及一种可引发急性或迟发性溶 血性输血反应ABO血型系统A2血型变异型的SNP位点，并通过检测该SNP 位点来建立快速检测A2血型变异型的方法。
[0002]专利技术背景
[0003]ABO血型系统是临床输血及器官移植中最为重要的血型系统，其中A2亚 型是ABO血型中常见的变异型。部分A2亚型患者血清中有抗
‑
A1抗体，2018 年荷兰报道了一例A2亚型患者输入A1型红细胞引起严重的溶血性输血反应死 亡的事件。专利技术人所在单位在对A型变异型的筛查中，首次发现了一例新的A2 变异型，其红细胞上A抗原强度较正常红细胞减弱，导致血浆中存在抗
‑
A1抗 体，一旦输注A型人血液，极易发生输血性溶血反应。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种引发溶血性输血反应的A2血型变异型的SNP位 点，并通过检测该SNP位点来筛选存在引发溶血性输血反应的A2血型变异型 的患者，从而弥补现有技术的不足。
[0005]本专利技术首先提供一种引发溶血性输血反应的A2血型变异型的SNP位点， 该突变位点能引发急性溶血性输血反应，该突变位点为ABO血型基因(NCBI Reference Sequence:NM_020469.3)编码区ATG起始第467位c.467C>T的突 变和第626位c.626G>A的突变；
[0006]作为实施例的一种具体记载，所述的SNP位点位于如下序列的第467位 c.467C>T、第626位c.626G>A；
[0007]atggccgaggtgttgcggacgctggccggaaaaccaaaatgccacgcacttcgacctatgatc cttttcctaataatgcttgtcttggtcttgtttggttacggggtcctaagccccagaagtctaatg ccaggaagcctggaacgggggttctgcatggctgttagggaacctgaccatctgcagcgcgtctcg ttgccaaggatggtctacccccagccaaaggtgctgacaccgtgtaggaaggatgtcctcgtggtg accccttggctggctcccattgtctgggagggcacattcaacatcgacatcctcaacgagcagttc aggctccagaacaccaccattgggttaactgtgtttgccatcaagaaatacgtggctttcctgaag ctgttcctggagacggcggagaagcacttcatggtgggccaccgtgtccactactatgtcttcacc gaccagccggccgcggtgccccgcgtgacgctggggaccggtcggcagctgtcagtgctggaggtg cgcgcctacaagcgctggcaggacgtgtccatgcgccgcatggagatgatcagtgacttctgcgag cggcgcttcctcagcgaggtggattacctggtgtgc(SEQ ID NO:1)。
[0008]本专利技术还提供用于检测所述的SNP位点的制剂的一种用途，是用于制备用 于检测引发溶血性输血反应的A2血型变异型的制品中的用途；
[0009]所述的检测所述的SNP位点的制剂，作为实施例的一种具体记载，为PCR 扩增测序引物或单倍型扩增及测序引物；
[0010]所述的制品为PCR扩增测序试剂盒，其中包含有检测上述SNP位点的扩 增测序引物或单倍型扩增及测序引物；
[0011]其中扩增引物的序列信息如下：
[0012]ABOnt467&nt626
‑
F:5'
‑
CCGCCTGCCTTGCAGATA
‑
3'(SEQ ID NO:2)、 ABOnt467&nt626
‑
R:5'
‑
ACCGCAGTGAACCTCAGCTT
‑
3'(SEQ ID NO:3)，
[0013]所述的单倍型扩增及测序引物的信息如下：
[0014]ABO
‑
E6mo：5'
‑
CGGGATCCATGTGGGTGGCACCCTGCCA
‑
3'(SEQ ID NO:4)、
[0015]ABO
‑
E7mo：5'
‑
GGGCCTAGGCTTCAGTTACTC
‑
3'(SEQ ID NO:5)。
[0016]本专利技术提供了一种可引发急性或迟发性溶血性输血反应ABO血型A型变异 型的SNP位点，并建立快速检测方法，从而提供了一种有效的避免急性溶血性 输血反应发生的基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本 专利技术所提供的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者外周血进行ABO 血型A型变异型基因突变位点的快速检测。
附图说明
[0017]图1：先证者直接测序图；为先证者ABO基因Exon7 PCR产物直接测序 结果图，采用ABO
‑
E7R引物对PCR产物进行测序，黑色箭头指向双峰起始位 点，提示其中一条链有碱基缺失。蓝色箭头所指为c.467C>T和c.626G＞A突 变。
[0018]图2：先证者克隆测序图，先证者ABO基因编码区域由起始密码子起第467 位碱基发生了突变(c.467C＞T)，626位碱基发生了突变(c.626G＞A)。
具体实施方式
[0019]申请人在一个ABO血型AB型变异型基因家系中发现致病性SNP位点， 并证实该基因的突变是导致A型血型发生变异，导致红细胞A抗原比正常A型 人红细胞A抗原要弱，并且血浆中产生同种抗
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A1抗体。一旦输入A型血液， 很可能引发急性溶血性输血反应。
[0020]所发现的SNP位点位于染色体9q34.1
‑
9q34.2，可转录成大约1065bp的 mRNA(NCBI登录号为NM_020469.2)，直接翻译形成355个氨基酸组成的 蛋白质。
[0021]下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。
[0022]实施例1：对ABO血型基因A型变异型先证者基因检测，确认A型变异型 的突变位点
[0023]1、提取外周血基因组DNA：
[0024]在符合国家相关政策规定，并在取样对象同意的基础上，抽取ABO血型 AB型变异型基因家系成员外周静脉血5ml，放入EDTA
‑
Na2抗凝管内；DNA提 取使用LIFE公司的DNA提取试剂盒，具体操作流程如下：
[0025]吸取500μL抗凝血，采用基因组DNA提取试剂盒提取其基因组DNA，并 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种引发溶血性输血反应的A2血型变异型的SNP位点，其特征在于，所述的SNP位点位于ABO血型基因编码区ATG起始第467位c.467C>T、第626位c.626G>A。2.用于检测权利要求1所述的SNP位点的制剂的用途，其特征在于，是在制备用于检测引发溶血性输血反应的A2血型变异型的制品中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的制剂为PCR扩增测序引物或单倍型扩增及测序引物。4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的制品为PCR扩增测序试剂盒。5.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的PCR扩增测序引物，其上游引物的序列为SEQ ID NO:2，下游引物的序列为SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：马文慧，李蓓，冯智慧，侯云，
申请(专利权)人：青岛市中心血站，
类型：发明
国别省市：