一种将菌毛黏附蛋白fimH应用于群体感应动态调控系统提高大肠杆菌固定化发酵的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种将菌毛黏附蛋白fimH应用于群体感应动态调控系统提高大肠杆菌固定化发酵的方法，所述大肠杆菌基因工程菌是向大肠杆菌BL21中导入含esaI/R系统的pUC19

【技术实现步骤摘要】
一种将菌毛黏附蛋白fimH应用于群体感应动态调控系统提高大肠杆菌固定化发酵的方法


[0001]本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种将菌毛黏附蛋白fimH应用于群体感应动态调控系统提高大肠杆菌固定化发酵的方法。

技术介绍

[0002]生物膜(biofilm)是自然界中微生物群落的一种形态。微生物聚集在一起，并分泌有机物，如多糖类物质覆盖其表面，形成一层膜状物质。微生物通过形成这种群落结构能够更好的适应外界环境，抵抗不利于生存的因素。在医学领域，由于致病菌常形成生物膜使得菌体耐药性提高，对于生物膜的研究已持续了较长的时间。而在工业发酵应用领域，生物膜形成的机理研究相对较少。特别是针对固定化细胞发酵特征的分子研究。
[0003]粘附蛋白是广泛存在于革兰氏菌中的一类黏附蛋白。在革兰氏阴性细菌中，由黏附蛋白组成的细胞运动器官，我们称其为菌毛。这些菌毛的作用主要是负责细菌细胞之间、细菌与非生物表面的黏附，并且与生物膜的形成和DNA的转移等相关联。大肠杆菌中有众多类型的菌毛，在大肠杆菌形成生物膜的过程中，已有大量研究表明大肠杆菌的I型菌毛促进生物膜形本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，向大肠杆菌BL21中导入含esaI/R系统的pUC19
‑
PJ23119
‑
MCS质粒，并将其与黏附基因fimH相结合。2.根据权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述esaI/R系统所含基因为核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的转录调控因子：esaI、esaR；核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的启动子：P
esaS
、P
esaR
；核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的报告基因：红色荧光蛋白mCherry、绿色荧光蛋白EGFP。3.根据权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述fimH的核苷酸序列为SEQ ID NO.7所示。4.权利要求1～3中任意一项所述大肠杆菌基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板，扩增得到esaI、esaR基因；以通用生物合成基因P
esaS
、P
esaR
所在的PUC19质粒为模板扩增得到P
esaS
、P
esaR
基因；以质粒pET28a
‑
mcherry为模板扩增得到mCherry基因；以质粒pET
‑
28a
‑
EGFP为模板扩增得到EGFP基因；(2)以步骤(1)所得片段为模板，通过overlap PCR扩增得到esaI+esaR片段、P
esaS
+fimH+mCherry片段、P
esaR
+EGFP片段；(3)将步骤(2)所得基因片段克隆到质粒pUC19
‑
PJ23119
‑
MCS的HindⅢ和SacⅠ两个酶切位点之间，得到重组质粒pUC19
‑
PJ23119
‑
MCS
‑
esaI/R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；(4)将步骤(3)所得重组质粒转化到大肠杆菌T1感受态中，从大肠杆菌T1中进行重组质...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈勇，侯安奇，应汉杰，陈天鹏，孙文俊，余斌，柳东，牛欢青，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：