一种用于检测耐药基因适应性代价的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法技术

本发明专利技术提供了一种用于检测耐药基因适应性代价的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法，通过Crisper技术在大肠杆菌的attb位点插入sfgfp基因，并导入包含p15a低拷贝复制子、卡那霉素抗性基因kan和多克隆位点MCS的pAKM质粒，构建得到一种用于检测耐药基因适应性代价的检测对照菌，其本身不存在适应性代价，可用于更加准确、稳定、快速、高效地检测目标耐药基因在待测菌株中的适应性代价，适用于耐药基因(含整合子等耐药可移动原件)的适应性代价分析。析。析。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测耐药基因适应性代价的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体而言，涉及一种用于检测耐药基因适应性代价的基因工程菌及其构建方法，尤其涉及一种用于检测耐药基因适应性代价的检测对照菌及其构建方法。

技术介绍

[0002]细菌耐药性往往伴随适应性代价的出现，包括生长速率减缓和毒力下降等现象。在无抗菌药物或抗菌药物选择压力较低的环境中，适应性代价可致敏感菌株的数量超过耐药菌株。细菌耐药性致适应性代价影响细菌耐药性产生的速度，即减少抗菌药物的使用，可降低耐药菌株在环境中的比例，进而减缓或防止耐药性的产生。近年来，细菌耐药性问题日益严峻，且产生的速度和程度依然没有减缓的迹象。因此正确检测和评价细菌的适应性代价，可以为如何利用耐药性所致的适应性代价来减缓或阻止耐药性的产生提供参考。
[0003]因此急需建立一种更准确高效的适应性代价检测方法，但是由于适应性代价只能通过相对值来进行表征，所以还需尽快建立一种用于检测耐药基因适应性代价的检测对照菌，所述的检测对照菌必须具备易于准确分辨的标志分子，且本身不存本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测耐药基因适应性代价的检测对照菌，其特征在于，包含大肠杆菌的基因组；所述的大肠杆菌基因组的attb位点包含sfgfp基因；所述sfgfp基因是通过Crisper技术插入大肠杆菌的attb位点；所述的大肠杆菌基因组还包含pAKM质粒，所述pAKM质粒包含p15a低拷贝复制子、卡那霉素抗性基因kan和多克隆位点MCS。2.如权利要求1所述的检测对照菌，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌E.coliMG1655
△
lacZ；所述包含sfgfp基因的attb位点的序列如Seq ID NO.1所示；所述sfgfp基因的序列如Seq ID NO.2所示；所述检测对照菌的保藏编号为CCTCC NO:M2021051。3.如权利要求1所述的检测对照菌，其特征在于，所述pAKM质粒的序列如Seq ID NO.3所示；所述p15a低拷贝复制子的序列如Seq ID NO.4所示；所述卡那霉素抗性基因kan的序列如Seq ID NO.5所示；所述多克隆位点MCS的序列如Seq ID NO.6所示。4.一种如权利要求1
‑
3任一项所述的检测对照菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)利用Crisper技术在大肠杆菌的attb位点插入sfgfp基因，获得大肠杆菌工程菌；2)构建带有p15a低拷贝复制子、卡那霉素抗性基因kan和多克隆位点MCS的pAKM质粒；3)将pAKM质粒导入步骤1)获得的大肠杆菌工程菌。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤1)包括分别扩增大肠杆菌基因组的attb位点的上游同源臂、下游同源臂及sfgfp基因片段，经融合PCR扩增后，通...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋晗，方结红，汪雯，唐标，黄光荣，肖朝耿，唐乔，程辉，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：