NCgl2747基因突变体及其在制备L-赖氨酸中的应用制造技术

本发明专利技术公开了NCgl2747基因突变体及其在制备L

【技术实现步骤摘要】
NCgl2747基因突变体及其在制备L
‑
赖氨酸中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
中，NCgl2747基因突变体及其在制备L
‑
赖氨酸中的应用。

技术介绍

[0002]L
‑
赖氨酸具有促进发育、增强免疫力和提高中枢神经组织功能等生理功效，是人体和动物不能自身合成且生长必需的8种基本氨基酸之一。目前，L
‑
赖氨酸是世界上的第二大氨基酸品种，主要生产方法是发酵法，其中谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)等是赖氨酸的重要生产菌株。L
‑
赖氨酸工业产量的约90％用作饲料工业中的营养强化剂，10％用作食品工业中的鲜味剂和甜味剂，以及医药行业中的药物中间体。
[0003]对发酵法生产L
‑
赖氨酸的改进可以涉及发酵技术如搅拌和供应氧气；或涉及营养培养基的组成，例如发酵过程中的糖浓度；或涉及将发酵液加工成合适的产品形式，例如通过干燥和造粒发酵液或离子交换色谱；或可以涉及相关微生物本身的固有性能性质。
[0004]用于改善这些微生物的性能性质的方法包括是诱变、突变体的选择和筛选。以这种方式获得的菌株对抗代谢物具有抗性或对于具有调节重要性的代谢物是营养缺陷型并产生L
‑
赖氨酸。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种可以生产L
‑
赖氨酸的蛋白质与其相关生物材料。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种蛋白质，该蛋白质名称为NCgl2747
A955T
，NCgl2747
A955T
为如下A1)或A)：
[0007]A1)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白质；
[0008]A2)在A1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。
[0009]为了使A1)中的蛋白质便于纯化，可在由SEQ ID No.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如下表所示的标签。
[0010]表：标签的序列
[0011]标签残基序列Poly
‑
Arg5
‑
6(通常为5个)RRRRRPoly
‑
His2
‑
10(通常为6个)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep
‑
tag II8WSHPQFEKc
‑
myc10EQKLISEEDL
[0012]本专利技术还提供了与NCgl2747
A955T
相关的生物材料，所述生物材料为下述B1)至B4)中的任一种：
[0013]B1)编码NCgl2747
A955T
的核酸分子；
[0014]B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
[0015]B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
[0016]B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物。
[0017]上述生物材料中，B1)所述核酸分子可为如下b11)或b12)或b13)：
[0018]b11)序列表中SEQ ID No.3所示的DNA分子；
[0019]b12)与b11)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码NCgl2747
A955T
的DNA分子；
[0020]b13)在严格条件下与b11)或b12)限定的核苷酸序列杂交，且编码NCgl2747
A955T
的基因组DNA分子。
[0021]其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
[0022]本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本专利技术的编码NCgl2747
A955T
蛋白质的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本专利技术的NCgl2747
A955T
蛋白质的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码NCgl2747
A955T
蛋白质且具有NCgl2747
A955T
蛋白质功能，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。
[0023]这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的编码SEQ ID No.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
[0024]上述生物材料中，所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6
×
SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交,然后用2
×
SSC,0.1％SDS和1
×
SSC,0.1％SDS各洗膜一次；也可为：2
×
SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5
×
SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；也可为：0.1
×
SSPE(或0.1
×
SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。
[0025]上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。
[0026]上述生物材料中，B2)所述的含有编码NCgl2747
A955T
蛋白质的核酸分子的表达盒(NCgl2747
A955T
基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达NCgl2747
A955T
蛋白质的DNA，该DN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蛋白质，为如下A1)或A)：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白质；A2)在A1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。2.与权利要求1所述蛋白质相关的生物材料，为下述B1)至B4)中的任一种：B1)编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物。3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子为如下b11)或b12)或b13)：b11)序列表中SEQ ID No.3所示的DNA分子；b12)与b11)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；b13)在严格条件下与b11)或b12)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述蛋白质的基因组DNA分子。4.根据权利要求2或3所述的生物材料，其特征在于：B2)所述表达盒为SEQ ID No.8所示的DNA分子；B4)所述重组微生物为将含有SEQ ID No.1所示的NCgl2747基因的微生物中的NCgl2747基因替换为B1)所述核酸分子得到的重组微生物，或向微生物中导入B1)所述核酸分子并使其得到表达得到的重组微生物。5.一种制备L
‑
赖氨酸的方法，包括：使受体生物细胞中...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟刚，周晓群，魏爱英，赵春光，马风勇，马文有，
申请(专利权)人：宁夏伊品生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：