一种用于胃癌转移预测和预后判断的circRNA标志物及应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，尤其是一种用于胃癌转移预测和预后判断的circRNA标志物及应用，现提出如下方案，包括一种circRNA生物标志物在制备胃癌诊断的产品中的应用，所述circRNA生物标志物为CircPCSK5，其核酸序列如SEQIDNO.1所示，还包括一种circRNA生物标志物在制备胃癌诊断的生物制品，包括所述CircPCSK5，所述生物制品包括：试剂、试剂盒、芯片，还包括一种胃癌治疗药物。本发明专利技术明确了CircPCSK5在胃癌中高表达，并能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮

【技术实现步骤摘要】
一种用于胃癌转移预测和预后判断的circRNA标志物及应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种用于胃癌转移预测和预后判断的circRNA标志物及应用。

技术介绍

[0002]全球胃癌发病率和死亡率分别居所有恶性肿瘤的第五位和第四位，每年新发病例数近109万，约44％发生在中国[1]。早期胃癌缺乏特征性临床表现，大多患者确诊时已处于进展期。我国胃癌总体预后较差，转移仍然是其主要死亡原因。因此，深入探讨胃癌侵袭转移的发生机制、挖掘新的治疗靶点对提高患者生存率有重要研究意义。
[0003]环状RNA(Circular RNA，circRNA)已被证实能在多层面调控肿瘤增殖、侵袭转移、上皮
‑
间质转化(Epithelial
‑
mesenchymal transition，EMT)、免疫逃逸以及代谢重编程等生物学行为，进而影响肿瘤的发生发展；既往研究报道circ_0058106通过miR
‑
185
‑
3p调控Wnt2b/β
‑
catenin/c
‑
Myc通路，促进下咽鳞状细胞癌的增殖、侵袭转移和EMT；circ
‑
CPA4以竞争性内源RNA机制吸附let
‑
7，上调PD
‑
L1表达，促进非小细胞肺癌免疫逃逸；也发现circHECTD1可通过调控β
‑
catenin/c
‑
Myc信号通路促进胃癌谷氨酰胺代谢重编程和肿瘤进展；circRHBDD1能促进肝癌细胞糖酵解和肿瘤进展并降低肿瘤对PD
‑
1抑制剂的疗效。
[0004]为了明确环状RNA在胃癌中的表达特征和功能情况，为胃癌的转移预测和预后判断提供理论依据和潜在的治疗靶点，为此需要一种用于胃癌转移预测和预后判断的circRNA标志物及应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出的一种用于胃癌转移预测和预后判断的circRNA标志物及应用，解决了现有技术中存在的问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]一种circRNA生物标志物在制备胃癌诊断的产品中的应用，所述circRNA生物标志物为CircPCSK5，其核酸序列如SEQIDNO.1所示。
[0008]一种circRNA生物标志物在制备胃癌诊断的生物制品，包括所述CircPCSK5。
[0009]优选的，所述生物制品包括：试剂、试剂盒、芯片。
[0010]一种胃癌治疗药物，包括：如CircPCSK5，或CircPCSK5的抑制剂。
[0011]优选的，如权利要求1所述CircPCSK5作为作用靶标。
[0012]优选的，所述抑制剂包括：si
‑
circPCSK5#1:5，其序列为
‑
AGUCCUACGAUAAGGCAUGTT
‑3’
。
[0013]优选的，所述抑制剂包括：si
‑
circPCSK5#2:5，其序列为：
‑
CUACGAUAAGGCAUGGGACTT
‑
3。
[0014]本专利技术中，申请人通过高通量测序构建胃癌组织和癌旁正常胃粘膜组织的circRNA差异表达谱，利用RT
‑
qPCR检测circPCSK5在胃癌中的表达情况；
[0015]采用χ2检验分析circPCSK5表达水平与胃癌临床病理资料相关性，利用Kaplan
‑
Meier法绘制患者的总生存和无疾病生存曲线，Cox比例风险模型分析影响胃癌患者预后的独立危险因素；
[0016]通过RNase R和Actinomycin D实验检测circPCSK5的稳定性；通过CCK
‑
8和EdU实验检测circPCSK5对胃癌细胞增殖能力的影响，通过transwell实验检测circPCSK5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响；利用western blot和RT
‑
qPCR检测敲低或过表达circPCSK5后胃癌细胞上皮
‑
间质转化标记物的表达变化；
[0017]因此在胃癌组织和细胞中，circPCSK5的表达明显升高(P<0.001，P<0.01)；CircPCSK5表达水平与患者的肿瘤大小、脉管侵犯、淋巴结转移和AJCC分期存在明显正相关性(P<0.05)；CircPCSK5高表达患者有更差的总生存和无病生存时间(P<0.001)，并且circPCSK5高表达是胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)；敲低circPCSK5表达能明显抑制HGC27细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)，上皮
‑
间质转化标记物E
‑
cadherin表达升高，N
‑
cadherin和Vimentin表达降低(P<0.01)；过表达circPCSK5能促进MKN45细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)，降低E
‑
cadherin表达，升高N
‑
cadherin和Vimentin表达(P<0.01)；CircPCSK5在胃癌中高表达，并能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮
‑
间质转化，可作为胃癌良好的预后预测指标和潜在的分子治疗靶点。
附图说明
[0018]图1为胃癌组织中差异表达的circRNA测序分析谱；其中：
[0019]图1A为胃癌组织和邻近正常胃粘膜组织中差异表达的circRNA的热图；
[0020]图1B为circBase数据库表明circPCSK5的结构示意图；
[0021]图1C为Sanger测序分析显示circPCSK5的反向剪接位点的示意图；
[0022]图1D为使用HGC27细胞中随机引物和oligodT引物逆转录的模板cDNA，RT
‑
qPCR检测circPCSK5和PCSK5mRNA的表达水平的示意图；
[0023]图1E为RT
‑
qPCR检测用RNaseR处理后的HGC27细胞中circPCSK5和PCSK5mRNA的表达的示意图；
[0024]图1F为RT
‑
qPCR检测在指定时间点用放线菌素D处理后的HGC27细胞中circPCSK5和PCSK5mRNA的表达的示意图；
[0025]图2为CircPCSK5在胃癌中高表达的测试图谱；其中：
[0026]图2A为采用RT
‑
qPCR方法检测62对胃癌及癌旁组织中circPCSK5的表达的示意图；
[0027]图2B为采用RT
‑
qPCR方法检测cir本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种circRNA生物标志物在制备胃癌诊断的产品中的应用，所述circRNA生物标志物为CircPCSK5，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种circRNA生物标志物在制备胃癌诊断的生物制品，其特征在于，包括所述CircPCSK5。3.根据权利要求2所述生物制品，其特征在于，所述生物制品包括：试剂、试剂盒、芯片。4.一种胃癌治疗药物，其特征在于，包括：如权利要求1所述CircPCSK5，或如权利要求1所述CircPCSK5的抑制剂。5.根据权利要求4所述胃癌治疗药物，其特征在于，如权利要求1所述Cir...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡娟，左学良，
申请(专利权)人：皖南医学院第一附属医院皖南医学院弋矶山医院，
类型：发明
国别省市：