生物标志物在HBV相关肝癌诊断及预后中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种检测lncRNA的表达水平的试剂在制备诊断HBV相关肝癌或预测HBV相关肝癌预后的产品中的应用，所述lncRNA为AC005332.5、ELF3

【技术实现步骤摘要】
生物标志物在HBV相关肝癌诊断及预后中的应用


[0001]本专利技术涉及医学生物检测
，具体地说，涉及血清标志物在HBV相关肝癌的诊断及预后判断中的应用。

技术介绍

[0002]原发性肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称肝癌）是临床最常见的恶性肿瘤之一，近年来其致死率已跃居恶性肿瘤中的第三位，严重威胁着人类的生命健康。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）被认为是肝癌进展的关键危险因素，甚至是主要的病因。虽然治疗手段如手术、移植和射频消融术有了进步，但由于肿瘤的高侵袭性和复发率，HBV相关的肝癌患者的总体生存率仍较低。且对于大多数HBV相关的肝癌患者，在诊断时已经进展到中晚期，已出现局部肿瘤侵犯血管，及淋巴结和远处转移，丧失手术机会。目前，组织活检和病理检查是肝癌诊断的“金标准”，然而由于其有创性，临床应用有限。而临床上使用最广泛的肝癌血清标志物是AFP，但是随着AFP阴性患者的增多，肝癌患者漏检增多，直接影响肝癌患者的早期诊断和预后评价。因此寻找更有效的、敏感的HBV相关的肝癌诊断和预后相关的新型无创标志物具有重要意义。
[0003]长链非编码RNA（Long non
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coding RNA，lncRNA）是长度超过200个核苷酸的非编码RNA，在基因组转录过程中广泛存在，曾被认为不具有任何生物学功能，作为RNA聚合酶II转录的副产物，被称为是基因组转录的“暗物质”，但随着这些年以来分子生物学技术的不断发展和进步，现有越来越多的研究发现，这些之前所谓的基因组“暗物质”可调控细胞分化、细胞凋亡等多种生物学过程，并在癌症的发生发展中发挥重要作用。而lncRNA与肿瘤之间关系的研究多使用的组织标本。组织标本的获取为有创过程，获取病变部位不一定准确，不适合早期诊断，也不适用于高危人群的筛查。血清标本采集简便，创伤性小，而且可以同时获得多个肿瘤相关指标。因此可以研究血液标本中lncRNA与肿瘤发生发展的关系。由于肝癌的发生发展过程中涉及复杂的病理改变，因此进一步探索lncRNA与HBV相关肝癌的关系，建立lncRNA分子联合检测模型对了解HBV相关肝癌的发生发展及诊断预后具有重大意义。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的缺陷，本申请专利技术人经过研究，从大批的癌症标志物中筛选得到了可潜在应用于HBV相关肝癌诊断及预后判断的标志物组合，所述标志物组合是AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665。本专利技术惊奇地发现，该标志物组合具有高特异性和灵敏度，能够作为HBV相关肝癌的有效诊断标记，并且其表达水平与HBV相关肝癌分期、分级及总体存活率相关，可应用于HBV相关肝癌的预后判断。
[0005]本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供了一种诊断HBV相关肝癌或预测HBV相关肝癌预后的产品，所述产品包括检测AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665的表达水平的试剂。
[0006]作为本专利技术优选的实施方案，所述所述产品包括通过PCR、原位杂交、或高通量测序平台检测AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665表达水平的试剂。
[0007]作为本专利技术优选的实施方案，所述试剂包括特异性针对所述AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665的探针或引物。
[0008]进一步，所述引物序列为：所述AC005332.5的正向引物为AGAACCCTGGACCCTAGCATTGG（SEQ ID NO 1）；所述AC005332.5的反向引物为TAGCCACTCGCACATCCTCCTC（SEQ ID NO 2）；所述ELF3
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AS1的正向引物为；CAAAGTGCCGAGATTAG（SEQ ID NO 3）；所述ELF3
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AS1的反向引物为；ACACGGTTATGGACTG（SEQ ID NO 4）；所述LINC00665的正向引物为；GGTGCAAAGTGGGAAGTGTG（SEQ ID NO 5）；所述LINC00665的反向引物为CGGTGGACGGATGAGAAACG（SEQ ID NO 6）。
[0009]作为本专利技术优选的实施方案，所述产品包括芯片或试剂盒。
[0010]进一步，本专利技术所述的制备诊断HBV相关肝癌或预测HBV相关肝癌预后的产品中的应用，具体为，利用所述产品检测受试者样本中的AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665的表达水平，与正常人相比，受试者样本中的AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665的表达水平上调，则诊断该受试者为HBV相关肝癌患者或HBV相关肝癌预后不良。
[0011]作为本专利技术优选的实施方案，所述样本为血清。
[0012]作为本专利技术优选的实施方案，所述受试者为人。
[0013]本专利技术的优点和有益效果如下：本专利技术通过分析从TCGA数据集中下载的lncRNA测序数据，确定了159个与HBV相关肝癌中的差异表达lncRNAs，并选择6个在HBV相关肝癌中表达上调的lncRNAs（SNHG1，AC092171.2，MAPKAPK5
‑
AS1，AC005332.5，ELF3
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AS1，LINC00665）及6个在HBV相关肝癌中表达下调的lncRNAs（LINC01093，LINC02027，AL161668.4，LINC02428，AC104809.1，AC007298.2）在10对HBV相关肝癌及正常对照组血清样本中进行实时定量荧光PCR（quantitative Real
‑
time PCR，qRT
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PCR）验证，并从中选择在TCGA数据库中预测准确度最高的AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665组合（AUC=99.6%）进一步大规模验证研究。
[0014]本专利技术发现在76例HBV相关肝癌及36例正常人对照组中验证发现，AC005332.5、ELF3
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AS1、LINC00665及三种lncRNAs的组合均在HBV相关肝癌中呈现为高表达。而AC005332.5、ELF3
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AS1、LINC00665的AUC值分别为0.809（95%CI：0.7279
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0.802）、0.815（95%CI：0.7166
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0.9143）和0.852（95%CI：0.7702
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0.9330）。同时，三种lncRNAs的组合被证明AUC结果最佳0.913（95%CI：0.8610
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0.9665）。这些结果进一步表明，三个lncRNA组合的诊断能力优于一个lncRNA标记，并可作为HBV相关肝癌的有效诊断标记。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测lncRNA的表达水平的试剂在制备诊断HBV相关肝癌或预测HBV相关肝癌预后的产品中的应用，其特征在于，所述lncRNA为AC005332.5、ELF3
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AS1和LINC00665。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过PCR、原位杂交、或高通量测序平台检测所述lncRNA表达水平的试剂。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括特异性针对所述lncRNA的探针或引物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物序列为：所述AC005332.5的正向引物为AGAACCCTGGACCCTAGCATTGG；所述AC005332.5的反向引物为TAGCCACTCGCACATCCTCCTC；所述ELF3
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AS1的正向引物为；CAAAGTGCCGAGATTAG；所述ELF3
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【专利技术属性】
技术研发人员：晏少颖，龚彬彬，
申请(专利权)人：南昌大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：