YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用及抗肺癌药物制造技术

本发明专利技术提供了YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用即抗肺癌药物，本发明专利技术经试验发现：肺癌患者血浆中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，肺癌患者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，因此，YRNA片段hY4F可作为分子标志物用于区分肺癌患者和健康者，灵敏度达到78％；特异度达到69％。本发明专利技术还发现，肺癌细胞能够通过EVs将hY4F传递给其他肺癌细胞，发挥抑癌功能，YBX1基因敲除的肺癌细胞在裸鼠体内的肿瘤形成和转移能力显著减弱；因此提高YRNA片段hY4F在肺癌细胞中表达和/或抑制RNA结合蛋白在肺癌细胞中表达的药物或小分子抑制剂有作为抗肺癌药物的潜能。有作为抗肺癌药物的潜能。有作为抗肺癌药物的潜能。

Application of YRNA fragment hy4f as a molecular marker in the preparation of lung cancer diagnostic reagents and anti lung cancer drugs

【技术实现步骤摘要】
YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用及抗肺癌药物


[0001]本专利技术涉及生物医学检测
，特别涉及YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用及抗肺癌药物。

技术介绍

[0002]肺癌是一种严重威胁人类健康的重大疾病，其发病率和死亡率都很高，在全世界范围内的肿瘤相关死亡病例中居于首位。无论是从发病率和死亡率来看，肺癌都是中国的第一大癌症，在各种肿瘤疾病中居于首位，严重威胁着我国人民的生命健康。依据2015年的统计数据，我国有733,300例新增肺癌病例和610,200例肺癌死亡病例。近年来的统计数据表明，肺癌病人的5年生存率仅有18％，超过一半的确诊肺癌病人都是在肺癌中晚期，其5年生存率低于5％。由于目前对于肺癌还缺乏有效的早期诊断方法，因此多数肺癌病人被确诊时已经处于中晚期，难以得到有效的治疗。因此，关于肺癌早期诊断和预测方法的研究迫在眉睫。
[0003]细胞外囊泡(Extracellular Vesicles，EVs)是细胞分泌到胞外的一种囊泡状结构，其参与肿瘤微环境中肿瘤细胞和正常细胞之间的细胞通信，从而参与肿瘤的发生和转移。由于胞外囊泡可以通过血液、淋巴和其他体液系统参与体内的运输和信号传递，并且其中包含的核酸等物质可以借由囊泡的保护而免遭降解。由于胞外囊泡的这些特性，使得其在肿瘤非侵入式检测中具有巨大的潜力。目前已有大量报道表明，外泌体等胞外囊泡中的蛋白以及核酸成分可能作为癌症早期诊断的标志物。
[0004]非编码小RNA是长度在200nt以下的不能编码蛋白质的一类RNA，其中包括miRNA、snRNA、snoRNA、tRNA、piRNA、rRNA和YRNA等多种RNA类型。这些小RNA在多种生理病理过程中发挥作用，例如RNA沉默、转录调控、染色体DNA复制、RNA加工、调节蛋白运输和降解等。越来越多的研究表明，非编码小RNA可以被细胞分选到外泌体中，免受RNA酶的降解，然后随着外泌体被受体细胞通过胞吞或者细胞融合等方式摄取后，进入受体细胞发挥调控功能。因此，研究肺癌胞外囊泡非编码小RNA对于探索肺癌早期诊断和预测的靶标，以及肺癌发生和发展的机制具有重要意义。
[0005]因此，有必要开发一种新的灵敏度、特异度高的标志物及抗肺癌药物。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的是提供YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用，所述YRNA片段hY4F作为分子标志物用于区分肺癌患者和健康者，其中肺癌患者血浆中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，肺癌患者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，单独检测YRNA片段hY4F区分肝癌患者和癌旁对照者，灵敏度达到78％；特异度达到69％。且YBX1基因敲除的肺癌细胞在裸鼠体内的肿瘤形成和转移能力显著减弱，说明抑制RNA结合蛋白YBX1表达的药物或小分子抑制剂有作为抗肺癌药物的潜
能。
[0007]在本专利技术的第一方面，提供了YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用。
[0008]进一步地，所述YRNA片段hY4F作为分子标志物用于区分肺癌患者和健康者，其中肺癌患者血浆中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，肺癌患者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的hY4F表达水平显著高于健康对照组。
[0009]进一步地，所述肺癌诊断试剂包括YRNA片段hY4F分子标志物的检测试剂或检测试剂盒。
[0010]进一步地，所述检测试剂盒包括引物，所述引物的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
[0011]进一步地，所述检测试剂盒还包括：阳性对照模板、阴性对照模板和qPCR反应常规试剂。
[0012]在本专利技术的第二方面，提供了一种抗肺癌药物，所述抗肺癌药物包括：
[0013]抑制YRNA片段hY4F表达的药物或小分子抑制剂；
[0014]和/或抑制RNA结合蛋白YBX1表达的药物或小分子抑制剂。
[0015]进一步地，所述抑制RNA结合蛋白YBX1表达的药物或小分子抑制剂包括：YBX1的小干扰RNA和/或敲除YBX1的sgRNA；所述YBX1的小干扰RNA的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述sgRNA的正反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8
‑
SEQ ID NO.9所示。
[0016]进一步地，所述提高YRNA片段hY4F在肺癌细胞中表达的药物包括：hY4F mimic(即hY4F的模拟物)，所述hY4F模拟物的核苷酸序列如SEQ NO.4所示。
[0017]本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
[0018]1、本专利技术提供的YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用，本专利技术经过试验发现：肺癌患者血浆中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，肺癌患者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，因此，YRNA片段hY4F作为分子标志物用于区分肺癌患者和健康者，单独检测YRNA片段hY4F区分肝癌患者和癌旁对照者，灵敏度达到78％；特异度达到69％。
[0019]2、本专利技术还发现，肺癌细胞中hY4F的表达显著减少，而肺癌细胞外囊泡中的hY4F显著升高，这种情况会促进肺癌的发生发展过程，肺癌细胞能够通过EVs将hY4F传递给其他肺癌细胞，发挥抑癌功能，YBX1基因敲除的肺癌细胞在裸鼠体内的肿瘤形成和转移能力显著减弱；因此为了逆转肺癌进展，提高YRNA片段hY4F在肺癌细胞中表达的药物；和/或抑制RNA结合蛋白YBX1表达的药物或小分子抑制剂有作为抗肺癌药物的潜能，提供了一种潜在的治疗方案。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0021]图1为hY4F能够抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭。A、采用qPCR分别检测健康对照组和肺癌患者组的血浆中hY4F的相对表达水平。B、采用qPCR分别检测人胚肺成纤维细胞(IMR
‑
90)和肺癌细胞(A549、H460、H1975和H2030)分泌的EVs中和细胞中hY4F的水平。C、采用CCK8实验方法分析hY4F模拟物对肺癌细胞A549的细胞活性影响。D
‑
E、采用Transwell实验方法分析hY4F模拟物对肺癌细胞A549的细胞迁移(D)和细胞侵袭(E)的影响。***，p<0.001。
[0022]图2为hY4F能够抑制肺癌细胞H1975的增殖、迁移和侵袭。A、采用CCK8实验方法分析hY4F模拟物对肺癌细胞H1975的细胞活性影响。B
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...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述YRNA片段hY4F作为分子标志物用于区分肺癌患者和健康者，其中肺癌患者血浆中的hY4F表达水平显著高于健康对照组，肺癌患者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的hY4F表达水平显著高于健康对照组。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肺癌诊断试剂包括YRNA片段hY4F的检测试剂或检测试剂盒。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒包括引物，所述引物的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：阳性对照模板、阴性对照模板和qPCR反应常规试剂。6.一种抗肺癌药物，其特征在于，所述抗肺癌药...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭明雄，孙桂鸿，李闯，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：