一种高灵敏度病毒核酸提取试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种高灵敏度的病毒核酸提取试剂盒，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术的病毒核酸提取试剂盒包括：病毒裂解液、磁珠缓冲液、漂洗液1、漂洗液2、洗脱液，所述病毒裂解液的配方如下：1

A highly sensitive virus nucleic acid extraction kit

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏度病毒核酸提取试剂盒


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种高灵敏度病毒核酸提取试剂盒。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前主流的核酸提取技术。
[0003]目前市面上磁珠法的核酸提取试剂盒已经较为成熟，普遍具备高通量、自动化、提取时间短等优势，但存在提取灵敏度较低的弊端。CN102220310B提供了一种提取纯化人体唾液DNA的方法，但是其组份含有蛋白酶K，成本较高，且需要冰袋运输，增加了运输成本，增加了应用场景的限制，且该配方预处理时，需要进行56℃温浴30min，对设备要求较多。CN108330127B提供了一种磁珠混合液、核酸保存方法、核酸提取试剂及试剂盒，但其仍具有蛋白酶K。CN109022420A提供了一种用于基于磁珠的DNA提取方法的裂解液，但是其组份也含有蛋白酶K，且裂解温度需要为56℃至65℃。CN110684764B提供一种用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法，虽然不需要蛋白酶K，常温裂解，但提取的灵敏度较低，无法做到低浓度样本的提取。市面上的核酸提取试剂盒大多数只能做到500copies/mL的提取下限，面对更低浓度的样本提取效果较差甚至提取不出来，导致假阴性误判。
[0004]基于此，有必要针对上述问题，提供一种核酸提取试剂盒，能够有更高的灵敏度，针对低浓度样本可以准确提取出来，极大的提高检测效率。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术要解决的技术问题是提供一种高灵敏度病毒核酸提取试剂盒，以提高病毒检测灵敏度，提高检测效率。
[0006]技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种高灵敏度核酸提取试剂盒，能够快速提取病毒核酸，通过裂解、漂洗、洗脱等一系列流程，使得核酸从样本中提取出来，裂解液中含有的胍盐、表面活性剂、金属离子等将样本的蛋白质外壳裂解，使核酸暴露出来，通过纳米磁珠的特异性结合作用，将核酸结合在磁珠上，然后经过两种不同的漂洗液，将核酸上携带着的蛋白质和金属离子等杂质清洗干净，最后将磁珠上的核酸溶解于洗脱液中，得到纯净、高浓度的核酸。通过上述各组分的协同作用，本专利技术的核酸提取试剂可以将样品中的核酸在室温下直接提取出，避免因加热产生气溶胶导致的样品污染问题，更重要的是提取出来的核酸纯度和浓度较高，最低提取下限100copies/ml，提取低浓度样本能力较强，能有效避免假阴性问题。
[0008]一种高灵敏度的病毒核酸提取试剂盒，该试剂盒包括病毒裂解液、磁珠缓冲液、漂
洗液1、漂洗液2、洗脱液；
[0009]所述病毒裂解液，包括1
‑
5M的异硫氰酸胍，1
‑
5M的碘化钠，10
‑
100g/L的SLS，10
‑
100mL/L的曲拉通
‑
100，10
‑
200mM的EDTA
‑
2Na，200
‑
500mL/L的异丙醇，所述病毒裂解液的pH值为7.0
‑
8.0；优选3M的异硫氰酸胍、3M的碘化钠、50g/L的SLS、100mL/L的曲拉通
‑
100、100mM的EDTA
‑
2Na、200mL/L的异丙醇，所述病毒裂解液的pH值优选为7.4；
[0010]所述磁珠缓冲液，其含有浓度为50mg/mL的磁珠，0.1mL/L的防腐剂proclin300；优选50mg/mL的磁珠，0.1mL/L的防腐剂proclin 300。
[0011]所述漂洗液1，其含有0.1
‑
1M的氯化钠和300
‑
700mL/L的异丙醇；优选1M的氯化钠和600mL/L的异丙醇。
[0012]所述漂洗液2，其含有0.1
‑
0.5M的氯化钠和600
‑
900mL/L的乙醇，优选0.1M的氯化钠和800mL/L的乙醇。
[0013]所述洗脱液，其含有1mL/L的DEPC，优选1mL/L的DEPC水溶液。
[0014]所述含病毒核酸的生物样本与所述病毒裂解液以1:1的体积比混合。
[0015]上述高灵敏度的病毒核酸提取试剂盒在病毒核酸提取中的应用在本专利技术的保护范围之内。
[0016]应用上述高灵敏度的病毒核酸提取试剂盒提取病毒核酸的方法，包括如下步骤：
[0017](1)预处理：用病毒裂解液裂解含病毒核酸的生物样本，得到粗裂解液；
[0018](2)核酸吸附：将步骤1)得到的粗裂解液与磁珠缓冲液混合，形成含有磁性纳米微球
‑
核酸的复合体的溶液体系，收集所述溶液体系中的磁性纳米微球
‑
核酸的复合体；
[0019](3)洗涤：将步骤2)得到的磁性纳米微球
‑
核酸复合体依次用漂洗液1、漂洗液2洗涤，然后用洗脱液溶出核酸，得到纯化的核酸。
[0020]有益效果：
[0021](1)操作简单，不需预处理，不需要加蛋白酶K，直接进行样本的提取；
[0022](2)灵敏度高，最低可提取100copies/mL浓度的样本，有效避免假阴性问题；
[0023](3)对实验室和实验操作人员的污染风险小：整个核酸提取的过程均在室温下进行，可有效降低气溶胶的污染，能有效的保护实验操作人员。
附图说明
[0024]图1本专利技术的核酸提取试剂提取500copies/mL的样本荧光定量PCR扩增曲线(ORF1ab基因)。
[0025]图2本专利技术的核酸提取试剂提取500copies/mL的样本荧光定量PCR扩增曲线(N基因)。
[0026]图3本专利技术的核酸提取试剂提取100copies/mL的样本荧光定量PCR扩增曲线(ORF1ab基因)。
[0027]图4本专利技术的核酸提取试剂提取100copies/mL的样本荧光定量PCR扩增曲线(N基因)。
具体实施方式：
[0028]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说
明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
[0029]以下实施例中涉及的试剂均是市场购买的常规试剂。
[0030]实施例1：
[0031]一种高灵敏度的核酸提取试剂盒，包括以下组分：
[0032]病毒裂解液：浓度为3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏度的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于；该试剂盒包括：病毒裂解液、磁珠缓冲液、漂洗液1、漂洗液2、洗脱液；所述病毒裂解液包含如下物质：1
‑
5M的异硫氰酸胍、1
‑
5M的碘化钠、10
‑
100g/L的SLS、10
‑
100mL/L的曲拉通
‑
100、10
‑
200mM的EDTA
‑
2Na、200
‑
500mL/L的异丙醇；所述病毒裂解液的pH值为7.0
‑
8.0；所述磁珠缓冲液包含如下物质：浓度为10～50mg/mL的磁珠，0.1～0.5mL/L的防腐剂proclin 300；所述漂洗液1包含如下物质：0.1
‑
1M的氯化钠和300
‑
700mL/L的异丙醇；所述漂洗液2包含如下物质：0.1
‑
0.5M的氯化钠和600
‑
900mL/L的乙醇；所述洗脱液包含如下物质：1mL/L的DEPC水溶液。2.根据权利要求1所述的高灵敏度的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于：所述病毒裂解液包含如下物质：3M的异硫氰酸胍、3M的碘化钠、50g/L的SLS、100mL/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新鹏，李云鹏，周志图，
申请(专利权)人：无锡百泰克生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：