植物乳杆菌LP11、其发酵液及制备方法和应用技术

本申请涉及微生物的技术领域，具体公开了一种植物乳杆菌LP11、其发酵液及制备方法和应用，本申请中提供了保藏编号为CGMCC No.22600的植物乳杆菌LP11菌株，该菌株产酸速率快，产酸量大，乳酸含量可达147mmol/L。并在pH=2.0较低的情况下，仍能保持很好的生长状态，同时能够耐受高浓度的5%胆盐；在胃肠道环境中有很强的生存能力，并且对肠道致病菌ETEC和SA有明显的抑制作用；本申请还公开了采用上述植物乳杆菌LP11发酵得到的发酵液，该发酵液在高温、强酸性条件下抑菌活性高，且发酵液中的抑菌物质不会被蛋白酶水解；本申请还公开了该发酵液的制备方法，以及植物乳杆菌LP11和发酵液在生物试剂中的应用。试剂中的应用。试剂中的应用。

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌LP11、其发酵液及制备方法和应用


[0001]本申请涉及微生物
，具体涉及植物乳杆菌LP11、其发酵液及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]近年来，由于在食品和饲料中使用化学添加剂的情况多来越多，给消费者带来的危害越来越大。因此，人们对不含化学防腐剂的天然新鲜食品需求越来越高。乳酸菌具有良好的安全性和抗菌活性，在食品和饲料中得到了广泛的应用，是公认的食品级安全微生物。在乳酸菌中，最大的类群是乳杆菌属，它有150多个不同的物种，其中包括一些对宿主健康有益的乳杆菌属。植物乳杆菌就是一种重要的工业微生物，其分布广泛，范围包括乳制品和发酵食品；牛粪、青贮饲料和污水等环境；以及人和动物口腔、肠道和粪便等。
[0003]植物乳杆菌具有重要的抗菌活性和益生菌特性，已被用于开发功能性食品和大规模生产，在以往研究中乳杆菌的抗菌物质主要是有机酸、脂肪酸、短肽等物质。据报导，乳酸菌产六种有机酸，可抑制霉菌的生长，包括乳酸、乙酸和丙酸等。后来，许多研究发现脂肪酸也具有抗菌特性，如植物乳杆菌MILAB14中的3
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羟基脂肪酸，而副酸杆菌所产生的细菌素对丙酸杆菌有明显的抑制作用。
[0004]但大多数乳杆菌的活力极弱，它们只能在特定的环境中存活，一旦这些环境发生改变，其自身将会灭亡，在复杂的肠道微生物中无法长时间占据主导地位。植物乳杆菌在胃肠道系统中常常会伴随各种不利环境的胁迫，同时存在抑菌效率低、抑菌活性不稳定等问题，因此，通过体外试验，以研究植物乳杆菌在机体消化道的生存能力，以突出其益生菌潜力，发挥植物乳杆菌最大的益生效果，具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本申请提供植物乳杆菌LP11、其发酵液及制备方法和应用，其具有良好的耐胆盐、耐酸及耐人工胃肠液性能，具有独特的益生特性，且产酸速率快，产乳酸量大的特点，对ETEC和SA具有优异的抑制作用。
[0006]第一方面，本申请提供植物乳杆菌LP11，采用如下的技术方案：植物乳杆菌LP11，所述菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,LP)，命名为植物乳杆菌LP11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22600，保藏时间为：2021年5月25日。
[0007]通过采用上述技术方案，本申请中的植物乳杆菌LP11经过纯化并通过产酸性能、耐受性和抑菌作用筛选得到，更加耐受酸性环境，有利于饲料发酵，而且对SA和ETEC具有拮抗抑制作用，应用于生物饲料时，可代替抗生素起到对SA和ETEC的抑制作用，且由于其从健康仔猪肠道内容物及粪便中分离筛选得到，来源安全，而且更加适合动物肠道特点，更加有利于饲料的制备和应用。
[0008]优选的，所述植物乳杆菌LP11菌落表面光滑，边缘整齐，呈乳白色，在含碳酸钙的MRS固体培养基中可看到有明显的溶钙圈，革兰氏染色后菌株呈杆状。
[0009]进一步地，所述植物乳杆菌LP11发酵后的上清液(2％添加量)对致病菌产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxic Escherichia coli，ETEC)和/或金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)抑菌率≥99％。
[0010]进一步地，所述植物乳杆菌LP11具有耐酸性，在pH2.0的条件下能够生长，存活率为112.95％。
[0011]进一步地，所述植物乳杆菌LP11具有耐胆盐能力，在0.5％高胆盐条件下存活率在58.94％；进一步地，所述植物乳杆菌LP11耐受人工胃肠液，经人工胃肠液处理后，存活率≥95.95％。
[0012]第二方面，本申请提供发酵液，由上述植物乳杆菌LP11发酵得到。
[0013]由上述植物乳杆菌LP11发酵得到的发酵液不仅具有良好的耐热、耐酸性能，而且耐蛋白酶类，有利于在生物饲料中应用。
[0014]进一步地，所述发酵液具有热稳定性，在100℃高温时，发酵液的抑菌活性没有影响。
[0015]进一步地，所述发酵液具有耐酸性，在pH3环境下，发酵液的抑菌活性没有影响。
[0016]进一步地，所述发酵液经过氧化氢酶处理，发酵液抑菌活性没有影响。
[0017]进一步地，所述发酵液经蛋白酶处理，发酵液仍然能够抑菌。
[0018]进一步地，所述蛋白酶选用胃蛋白酶。
[0019]进一步地，所述发酵液经胃蛋白酶处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于产肠毒素性大肠杆菌的抑菌率≥99％。
[0020]进一步地，所述发酵液经胃蛋白酶处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于金黄色葡萄球菌的抑菌率≥99％。
[0021]进一步地，所述蛋白酶选用胰蛋白酶。
[0022]进一步地，所述发酵液经胰蛋白酶处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于产肠毒素性大肠杆菌的抑菌率≥99％。
[0023]进一步地，所述发酵液经胰蛋白酶处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于金黄色葡萄球菌的抑菌率≥99％。
[0024]进一步地，所述蛋白酶选用木瓜蛋白酶。
[0025]进一步地，所述发酵液经木瓜蛋白酶处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于产肠毒素性大肠杆菌的抑菌率≥99％。
[0026]进一步地，所述发酵液经木瓜蛋白酶处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于金黄色葡萄球菌的抑菌率≥99％。
[0027]进一步地，所述蛋白酶选用蛋白酶K。
[0028]进一步地，所述发酵液经蛋白酶K处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于产肠毒素性大肠杆菌的抑菌率≥99％。
[0029]进一步地，所述发酵液经蛋白酶K处理后，发酵液抑菌活性没有影响，发酵液对于金黄色葡萄球菌的抑菌率≥99％。
[0030]第三方面，本申请提供发酵液的制备方法，采用如下的技术方案：发酵液的制备方法，其特征在于，所述发酵液由植物乳杆菌LP11通过下述步骤培养发酵得到：(1)植物乳杆菌LP11种子液制备：将植物乳杆菌LP11菌种接种于含碳酸钙的MRS固体培养基中，25
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40℃静置培养18
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24h，筛选溶钙圈较大的单菌落，接种于MRS液体培养基中，25
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40℃振荡培养24
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32h；(2)植物乳杆菌LP11发酵液制备：将活化的种子液，按体积百分比为0.5
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10％接种于MRS液体培养基，振荡培养36
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52h后，8000
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12000rpm/min离心1
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5min，取上清液，用0.22μm滤器过滤，即得。
[0031]进一步地，所述发酵液由植物乳杆菌LP11通过下述步骤培养发酵得到：(1)植物乳杆菌LP11种子液制备：将植物乳杆菌LP11菌种接种于含碳酸钙的MRS固体培养基中，37℃静置培养18
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌LP11，其特征在于，所述菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum, LP)，命名为植物乳杆菌LP11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC No. 22600，保藏时间为：2021年5月25日。2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌LP11，其特征在于，所述植物乳杆菌LP11菌落表面光滑，边缘整齐，呈乳白色，在含碳酸钙的MRS固体培养基中可看到有明显的溶钙圈，革兰氏染色后菌株呈杆状。3.发酵液，其特征在于：由权利要求1或2所述的植物乳杆菌LP11发酵得到。4.如权利要求3所述的发酵液的制备方法，其特征在于，所述发酵液由植物乳杆菌LP11通过下述步骤培养发酵得到：（1）植物乳杆菌LP11种子液制备：将植物乳杆菌LP11菌种接种于含碳酸钙的MRS固体培养基中，25
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40℃静置培养18
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24 h，筛选溶钙圈较大的单菌落，接种于MRS液体培养基中，25
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40℃振荡培养24
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32 h；（2）植物乳杆菌LP11发酵液制备：将活化的种子液，按体积百分比为0.5
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10 %接种于M...

【专利技术属性】
技术研发人员：邬奇修，孙小涵，孙洪浩，吕福军，
申请(专利权)人：辽宁波尔莱特农牧实业有限公司，
类型：发明
国别省市：