一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用，方法具体包括：S1、称取样品进行菌株的分离纯化；S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；S3、提取细菌DNA并进行菌种鉴定；S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；S5、将菌剂复配为复合菌剂并进行正交设计；S6、通过不同复配比菌种进行除氨除硫并记录不同复配比的去除率数据，得出复合菌剂中各菌种的除氨除硫配比；S7、制备固态菌剂；所述复合菌剂中的菌种包括苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和乳杆菌。本发明专利技术从餐厨垃圾生化仓样品中分离得到降解氨气和硫化氢的细菌、酵母菌、芽孢杆菌及放线菌等，成本低、除臭效率高且适应广。除臭效率高且适应广。

Screening, preparation and application of a deodorizing dominant bacterium

【技术实现步骤摘要】
一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物除臭
，具体涉及一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]餐厨垃圾处置过程中产生的恶臭污染物种类较为复杂，恶臭强度相对较高，恶臭物质种类按其组成可分成5类：含硫化合物，如硫化氢、二氧化硫、硫醇等；含氮化合物，如氨气、胺类、吲哚等；卤素及衍生物，如氯气、卤代烃等；烃类及芳香烃；含氧有机物，如醇、酚、醛、酮等。气相色谱检测表明，餐厨垃圾臭气的主要成分为氨(NH3)和硫化氢(H2S)。
[0003]恶臭污染物质的特性表现在以下几个方面：(1)恶臭物质的污染源分布广泛；(2)恶臭物质的浓度一般较低，有的甚至低达10
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9mo1/L，且处理后要求其浓度更低；(3)臭气一般是由多组分混和物构成，产生恶臭的物质多达1万种以上，气味强度与实际分子浓度不一定成线性关系。
[0004]目前常用的除臭方法主要包括：物理方法、化学方法和生物方法。
[0005]物理方法是指不改变恶臭物质的化学性质，而是采用掩蔽、稀释、吸附等方式改变大气中恶臭物质的浓度，以此来达到除臭目的。物理方法除臭方面的研究主要集中在活性炭吸附方面，目前物理除臭方法工艺比较成熟，但对所处理气体和处理环境的要求较高、且处理成本也很昂贵。
[0006]化学方法是通过一些化学反应，如氧化、燃烧等化学反应使恶臭物质转化为无味的物质。常见的化学处理方法有氧化、热分解、焚烧等。化学除臭法虽然可以快速高效的去除浓度高的恶臭物质，但是化学物质也会对环境造成严重危害，引起二次污染。
[0007]生物除臭技术与物理和化学技术相比，过程中不需添加化学物质，可在常温(10℃
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40℃)和常压下进行，比物理方法和化学方法的成本更低，操作更简单。它是利用微生物的生物化学作用将恶臭物质吸收转化成供自身生长的营养物质并代谢出体外，以达到去除臭味的目的。臭气的最终产物主要是水、二氧化碳、盐类等，不会造成二次污染。
[0008]微生物一般都是在液相环境下进行降解反应，即可以把微生物处理恶臭气体的过程划分为以下三个阶段。
[0009]第一阶段：恶臭物质与微生物接触并溶于水溶液中，完成由气相扩散到液相的传质过程。
[0010]第二阶段：溶解于液相的恶臭气体向细胞壁和细胞膜扩散继而被微生物所吸收，不溶于水的物质附着在微生物体外，后由微生物分泌物分解为可溶性物质，再渗入细胞。
[0011]第三阶段：进入细胞后，恶臭成分被当作微生物的营养物质，随微生物的生长代谢被分解成无毒无害的物质排除体外。
[0012]因此，微生物菌剂除臭法具有很大优势：如成本较低，只需要前期投入少量菌种即可，后期不需要或者添加量不多，因为腐熟料中残留很多数量的微生物菌株；除臭过程较短，5
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7天就能够达到除臭的效果；对餐厨垃圾具有减量化作用；菌种适应性强，能以餐厨垃
圾为养分快速繁殖代谢。
[0013]但是目前除臭菌剂的研究还主要存在以下问题：
[0014](1)目前，除臭菌剂中菌种种类较少，一般只有1
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3种，因此除臭效率不是很高；
[0015](2)微生物除臭菌剂的复配，对于菌种间合适比例和菌种间的拮抗作用考虑不全，导致产品质量和使用效果上不稳定，相关问题层出不穷；
[0016](3)餐厨垃圾好氧堆肥工艺存在高温阶段，温度能达到60
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70℃，会影响除臭菌剂中菌种的活性，最终影响除臭效果；
[0017](4)微生物除臭菌剂成品中实际活菌数目少以及保藏时间短，菌剂投入到实际应用场景效果不佳；
[0018](5)微生物除臭菌剂实际使用过程中，大部分人会忽视菌床培育过程，也不会添加菌剂引诱剂，这就不利于菌剂的扩大培养。

技术实现思路

[0019]本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用。
[0020]为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：
[0021]一种除臭优势菌的筛选、制备方法，具体包括：
[0022]S1、称取样品进行菌株的分离纯化；
[0023]S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；
[0024]S3、提取细菌DNA并进行菌种鉴定；
[0025]S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；
[0026]S5、将菌剂复配为复合菌剂并进行正交设计；
[0027]S6、通过不同复配比菌种进行除氨除硫并记录不同复配比的去除率数据，得出复合菌剂中各菌种的除氨除硫配比；
[0028]S7、制备固态菌剂；
[0029]所述复合菌剂中的菌种包括苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和乳杆菌。本专利技术从餐厨垃圾生化仓样品中，通过选择培养基的初筛和复筛，分离得到降解氨气和硫化氢的细菌、酵母菌、芽孢杆菌及放线菌等，成本低、除臭效率高且适应广；微生物除臭菌剂中添加苏云金芽孢杆菌，其晶体蛋白对蚊、蝇等昆虫具有毒杀作用，对细菌没有抑制作用。
[0030]进一步的，复合菌剂中苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与乳杆菌的除氨除硫配比是6：1：2：1：6：2：6。本专利技术微生物除臭菌剂中各菌种间不存在拮抗作用，通过正交的多因素多水平分析，得到最佳除臭菌种复配比
[0031]进一步的，步骤S1包括：
[0032]S101、称取餐厨垃圾样品，置于装有灭菌生理盐水和若干已灭菌玻璃珠的三角瓶，摇匀使分散充分，所述餐厨垃圾样品与灭菌生理盐水比例为1:9；
[0033]S102、通过使用无菌水将样品稀释为不同浓度梯度的稀释液；
[0034]S103、取100μL不同浓度稀释液涂布于不同培养基平板上，置于30℃恒温培养箱培养5天；
[0035]S104、通过平板稀释分离法进一步分离纯化，纯化后的单一菌株在显微镜下根据形态特征分类编号并于4℃斜面保存备用。
[0036]进一步的，对除臭优势菌进行筛选具体包括：
[0037]S201、初筛：取新鲜的餐厨垃圾置于容器中，按照3％的接种量将稀释液接种于容器中，混合均匀后密封，30℃静置培养7天；
[0038]S202、复筛：将新鲜餐厨垃圾加入广口瓶中，接种纯化得到的菌液，每个菌种三次重复；
[0039]接种除氨菌的广口瓶中设有盛有20mL硼酸吸收液的小烧杯，接种脱硫菌的广口瓶中放置盛有20mL碱性锌氨络盐吸收液的小烧杯，广口瓶盖上盖子后用双层塑料膜密封；
[0040]置于30℃培养箱中培养，每隔一段时间取出小烧杯，检测NH3和H2S的释放量，选出除臭效果好的菌种斜面保存。
[0041]进一步的，提取细菌DNA包括：
[0042]S301、1mL的细胞悬液在8000g下离心2min，弃去上清液并用400μL STE Buffer冲洗细胞两次，在8000g下离心2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种除臭优势菌的筛选、制备方法，其特征在于，具体包括：S1、称取样品进行菌株的分离纯化；S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；S3、提取细菌DNA并进行菌种鉴定；S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；S5、将菌剂复配为复合菌剂并进行正交设计；S6、通过不同复配比菌种进行除氨除硫并记录不同复配比的去除率数据，得出复合菌剂中各菌种的除氨除硫配比；S7、制备固态菌剂；所述复合菌剂中的菌种包括苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和乳杆菌。2.根据权利要求1所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法，其特征在于，所述复合菌剂中苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与乳杆菌的除氨除硫配比是6：1：2：1：6：2：6。3.根据权利要求1所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括：S101、称取餐厨垃圾样品，置于装有灭菌生理盐水和若干已灭菌玻璃珠的三角瓶，摇匀，所述餐厨垃圾样品与灭菌生理盐水比例为1:9；S102、通过使用无菌水将样品稀释为不同浓度梯度的稀释液；S103、取100μL不同浓度稀释液涂布于不同培养基平板上，置于30℃恒温培养箱培养5天；S104、通过平板稀释分离法进一步分离纯化，纯化后的单一菌株在显微镜下根据形态特征分类编号并于4℃斜面保存备用。4.根据权利要求3所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法，其特征在于，所述对除臭优势菌进行筛选具体包括：S201、初筛：取新鲜的餐厨垃圾置于容器中，按照3％的接种量将稀释液接种于容器中，混合均匀后密封，30℃静置培养7天；S202、复筛：将新鲜餐厨垃圾加入广口瓶中，接种纯化得到的菌液，每个菌种三次重复；接种除氨菌的广口瓶中设有盛有20mL硼酸吸收液的小烧杯，接种脱硫菌的广口瓶中放置盛有20mL碱性锌氨络盐吸收液的小烧杯，广口瓶盖上盖子后用双层塑料膜密封；置于30℃培养箱中培养，每隔一段时间取出小烧杯，检测NH3和H2S的释放量，选出除臭效果好的菌种斜面保存。5.根据权利要求4所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法，其特征在于，所述提取细菌DNA包括：S301、1mL的细胞悬液在8000g下离心2min，弃去上清液并用400μL STE Buffer冲洗细胞两次，在8000g下离心2min，弃去上清；S302、将200μL TE Buffer悬浮细胞和100μL的Tris
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saturated phenol加到离心管中，涡旋混合60s；S303、在4℃用13000g离心5min从有机相中分离出水相，取160μL上清液转移到干净的
EP管中；S304、加40μL的TE Buffer到EP管中，用100μL氯仿混合，在4℃，13000g下离心5mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：张辉，付鹏睿，肖通奋，刘江涛，
申请(专利权)人：浙江延杭智能科技有限公司，
类型：发明
国别省市：