一株成团泛菌及其在防治花椒病害方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株成团泛菌及其在防治花椒病害方面的应用。本发明专利技术的成团泛菌(Pantoea agglomerans)HJEB

【技术实现步骤摘要】
一株成团泛菌及其在防治花椒病害方面的应用


[0001]本专利技术属于微生物应用领域，具体而言，本专利技术涉及一株成团泛菌菌株及其用途。

技术介绍

[0002]花椒(Zanthoxylum bungeanum)原产于中国，落叶小乔木或灌木，属于芸香科、花椒属。花椒耐干旱、瘠薄，适宜性强，分布广，是我国重要的经济树种。花椒是重要的食用调味品、中药材、香料及木本油料树种，同时花椒根系发达，防止水土流失，因此花椒种植具有重要经济价值和生态价值，在当地乡村振兴中发挥着重要作用。我国是花椒生产和贸易大国，种植面积约1728.4万亩，2020年产量45.6万吨。但由于气候的变化和栽培方式的改变、栽培面积的迅速扩大，花椒溃疡病、锈病、炭疽病、棉蚜、全爪螨等病虫害已呈现多发、频发、重发的态势，严重影响花椒产量，危害产业健康发展。最近，许多花椒园中出现一种新型溃疡病，危害花椒枝干，侵染部位组织坏死，凹陷，容易风折，严重时，整个枝条枯死。该病由间座壳属真菌侵染引起，病菌主要通过伤口、皮孔等侵入寄主组织，严重影响花椒树势及花椒产量，给农户们造成了极大的危害。
[0003]目前，花椒病害的防治措施以依赖化学农药为主，易造成病虫抗药性增强、防治效果下降，出现农药越打越多、病虫越防越难，农药残留超标等问题，严重影响果品质量安全和生态环境安全，制约花椒出口。因此利用生物防治技术控制花椒病虫害危害是必然趋势。利用拮抗微生物防治花椒溃疡病等病害有望成为代替化学药剂的一种安全、无毒及有效的新方法。拮抗微生物不仅可以防病，而且还能促进植物生长，对改善林地生态系统，保持林间生物多样性，以及维护林田生态平衡实现林业可持续发展将起到重要作用。与其他生物农药相比，微生物源生物农药生防因子繁殖速度快、防治效果持久、开发利用途径多、不易产生抗性、发酵工艺简单及生产成本低，成为生物农药领域的研究热点，依然是未来较长一段时间生物农药登记的主要选择。
[0004]成团泛菌在自然界分布广泛，是重要的生防微生物资源。目前利用成团泛菌防治花椒溃疡病还未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的首要目的是提供一株新的成团泛菌菌株HJEB
‑
01，它可以用作生物农药，用来防治花椒溃疡病等花椒病害，具有良好的应用前景。
[0006]本专利技术的另一个目的是提供一种采用新的成团泛菌制备的生物菌剂(发酵液)。
[0007]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：
[0008]本专利技术提供的成团泛菌(Pantoea agglomerans)HJEB
‑
01，是从花椒枝条中采用组织分离法分离获得的，已于2022年3月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No：M 2022255。其具有以下微生物学特性：HJEB
‑
01菌株表面粘稠，菌落黄色、圆形、光滑、边缘整齐，隆起，革兰氏染色阴性。上述菌株普通培养采用LB培养基保存，长期保存选用20％甘油保存。
[0009]该微生物菌剂可以用作生物农药，用于防治花椒溃疡病等花椒病害。因此，另一方面，本专利技术提供成团泛菌HJEB
‑
01或者其发酵液用于防治花椒溃疡病等花椒病害中的用途。
[0010]本专利技术还提供一种用于防治花椒溃疡病的方法，所述方法包括向具有花椒溃疡病的花椒施用成团泛菌HJEB
‑
01或者其生物菌剂(发酵液)。
[0011]上述生物菌剂(发酵液)制备采用的发酵培养基为：蛋白胨0.3
‑
0.8％，酵母膏0.3
‑
0.8％，蔗糖0.8
‑
1.2％，黄豆粉2
‑
3％，玉米粉0.8
‑
1.2％，轻质碳酸钙0.2
‑
0.3％，氯化钠0.03
‑
0.08％，其余为水，pH 8。培养条件：培养温度28
‑
32℃，初始pH7.5
‑
8.5，接菌量1.0
‑
2.0％，培养时间36
‑
60h。采用此培养基发酵培养，菌数可达50
‑
90亿/g。
[0012]实验表明，本专利技术的成团泛菌具有菌株新颖、高效、活体菌含量高的特点，其发酵液100倍防治花椒溃疡病效果显著，防治效果达到63.45％，无药害产生。同时其安全高效，无药残，无毒副作用，能减少化学农药的使用，因而在生物防治花椒溃疡病等花椒病害中具有重要应用前景。
附图说明
[0013]图1为成团泛菌HJEB
‑
01单菌落形态图；
[0014]图2为成团泛菌HJEB
‑
01对花椒溃疡病菌抑制效果图；其中A图为成团泛菌HJEB
‑
01对花椒溃疡病菌抑菌效果；B图为只接种花椒溃疡病菌饼的对照。
具体实施方式
[0015]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。
[0016]实施例1：成团泛菌(P.agglomerans)HJEB
‑
01的分离与鉴定
[0017]1.分离：
[0018]本专利技术的成团泛菌是从山东省菏泽市花椒种植园中采用组织分离法分离获得的，分离方法为：
[0019](1)组织采集：从花椒溃疡病发病较重花椒园采集健康无病的花椒枝条，置于密封袋中，带回实验室，备用；
[0020](2)培养基平板制备：将马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)融化，分别倒入无菌培养皿，冷却，制成PDA平板；
[0021](3)将采回的健康花椒枝条依次进行以下处理：
①
流动自来水冲洗干净1min，晾干；
②
用75％乙醇表面消毒；
③
将处理好的花椒枝条，在无菌条件下，用无菌的剪刀将花椒枝条剪成5mm
×
5mm的组织块；
④
将组织块在75％乙醇中浸泡30s，然后再将组织块转入3％次氯酸钠溶液中浸泡1min，最后将组织块依次在无菌水中冲洗3次。
[0022](4)取上述处理好的组织块，每个平皿放置5块，置于培养箱28℃恒温培养3
‑
5d。
[0023](5)将单个菌落在PDA培养基上划线，得到单菌落，转移至PDA试管斜面培养基中，至28℃恒温培养。
[0024](6)以花椒溃疡病菌(Diaporthe eres)为靶标菌，采用对峙培养法，筛选到1株对
花椒溃疡病菌具有较强抑制活性的菌株，编号HJEB
‑
01。
[0025]上述PDA培养基配方为：马铃薯(去皮切块)200g，葡萄糖20g，琼脂14g，蒸馏水100本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株成团泛菌(Pantoea agglomerans)HJEB
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01，所述菌株的保藏编号为CCTCC M 2022255。2.权利要求1所述的成团泛菌HJEB
‑
01在防治花椒病害中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述花椒病害为花椒溃疡病。4.一种含有权利要求1所述的成团泛菌HJEB
‑
01的生物菌剂。5.权利要求4所述的生物菌剂的制备方法，其特征是，在下述的发酵培养基中进行发酵获得发酵液，即为生物菌剂；发酵培养基为：蛋白胨0.3
‑
0.8％，酵母膏0.3
‑
0.8％，蔗糖0.8
‑
1.2％，黄豆粉2
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：王清海，亓玉昆，刘在哲，吕娟，王俊伟，韩新英，杨静，朱文成，孔令刚，刘慇，万平平，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：