一种黑曲霉（Aspergillusniger）PL-L2及其应用制造技术

本申请涉及微生物技术领域，公开了一种黑曲霉（Aspergillus niger）PL

【技术实现步骤摘要】
一种黑曲霉(Aspergillus niger)PL
‑
L2及其应用


[0001]本申请涉及微生物
，尤其涉及一种黑曲霉(Aspergillus niger)PL
‑
L2及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，益生菌产品层出不穷，应用越来越广泛，黑曲霉(Aspergillus niger)作为国家允许使用的安全益生菌，被广泛应用于畜禽养殖和有机肥发酵等相关行业，其效果得到认可。黑曲霉还具有美国FDA认证的GPAS食品级生产许可。黑曲霉(Aspergillus niger)是子囊菌亚门，丝孢纲，丝孢目，从梗孢科。黑曲霉可以产生多种代谢酶，包括淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、β
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半乳糖苷酶、脂肪酶等。
[0003]饲料酶制剂是近年动物营养方面研究的热点之一，酶制剂作为一种生物催化剂，不仅可以促进营养物质的消化吸收，提高饲料利用率，促进畜禽的生长发育，还可以减少排泄物中的氨、甲酚、吲哚等腐败物质的含量，净化畜禽环境。黑曲霉因其具有强大的外源基因表达能力及高效的蛋白表达、分泌和修饰能力，还有很强的酶表达体系，同时具有很高的遗传稳定性，在传统酶制剂生产中具有很大的优势，是工业酶制剂纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的生产中应用较多的菌株。但是，目前生产上应用的黑曲霉分泌的酶活性并不高，尤其是能够促进细胞分离和促使细胞壁降解的纤维素酶、果胶酶、β
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甘露聚糖酶等。
[0004]因此，急需寻找到一种产酶种类多且纤维素酶、果胶酶、β
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甘露聚糖酶等酶活性高的黑曲霉，从而提高动物饲料的利用率。

技术实现思路

[0005]为了克服上述技术问题，本申请提供了通过一种自然筛选获得的黑曲霉(Aspergillus niger)PL
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L2，该黑曲霉可以分泌多种酶，如酸性蛋白酶、中性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和β
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甘露聚糖酶等，并提供了其发酵液及应用。
[0006]第一方面，本申请提供了一种黑曲霉PL
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L2，分类命名为黑曲霉Aspergillus niger，于2023年2月20日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.40501，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。
[0007]黑曲霉PL
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L2的生物学特性：培养学特征包括菌落呈圆形且边缘整齐，菌落初期为白色，中期淡黄色且少量黑色粉粒，后期黑褐色，质地厚丝绒状，背面具放射状脊，淡黄褐色。形态学特征包括分生孢子头、孢子梗、顶囊、产胞结构等几部分。分生孢子头呈球形，直径55
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75μm；分生孢子梗发生于基质，孢梗直径15
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20μm，壁平滑；产孢结构双层，梗基长度10
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12μm直径4
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5μm，瓶梗长度8
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12μm；顶囊球形，直径35
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40μm，表面全面可育。
[0008]黑曲霉PL
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L2能分泌多种酶，如酸性蛋白酶、中性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和β
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甘露聚糖酶等，且纤维素酶、果胶酶、β
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甘露聚糖酶的酶活高。可将黑曲霉
PL
‑
L2作为益生菌株应用于饲料生产中，可增强动物肠道对营养物质的消化吸收能力，提高饲料的利用率，减少动物排泄量，净化养殖环境，同时可增加养殖效益。
[0009]第二方面，本申请提供了一种发酵液，所述发酵液由所述黑曲霉(Aspergillus niger)PL
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L2发酵制得。
[0010]可选地，所述发酵为液体发酵制得。
[0011]可选地，所述液体发酵具体为，黑曲霉PL
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L2单菌落接种于PDA斜面培养基上，在28
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32℃下培养72
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120h至孢子成熟；然后用适量生理盐水将成熟孢子洗下，装入含有玻璃珠的三角瓶中，摇床震荡2
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4h，打散孢子。用四层纱布过滤孢子悬液，用适量生理盐水稀释，血球计数版计数孢子浓度，调整最终孢子浓度为107‑
108个/mL，制得孢子悬浮液。孢子悬浮液按2％
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10％接种量转接至发酵培养基，28
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32℃150
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200r/min培养72
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96h，制得发酵液。
[0012]可选地，发酵培养基的成分：麦芽浸粉20.0g/L、玉米芯粉10.0g/L、豆粕粉10.0g/L、硫酸铵3.0g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸铁0.01g/L。
[0013]可选地，所述孢子悬浮液按5％接种量转接至发酵培养基，30℃180r/min培养96h，制得发酵液。
[0014]第三方面，本申请还提供了一种复合酶制剂，所述复合酶制剂含有所述的发酵液或由所述的发酵液制得的酶液。
[0015]可选地，取黑曲霉PL
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L2发酵液，10000r/min离心20min，保留上清液；冰浴条件下向粗酶液中加入50％
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80％的硫酸铵粉末，4℃条件下沉淀12
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24h得粗酶液中的蛋白，得到沉淀物；所得沉淀物用Tris
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HCl缓冲液复溶，4℃条件下透析得到粗酶液。
[0016]可选地，所述发酵液或者酶液中包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和β
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甘露聚糖酶。
[0017]采用上述技术方案，饲料大部分由谷类植物原料制成，饲料的营养物质储存在细胞内，粉粹饲料只能破坏部分细胞壁，大部分仍在细胞内。黑曲霉产的果胶酶可作用于细胞之间的果胶，使细胞之间相互分离，纤维素酶与半纤维素酶(甘露聚糖酶、木聚糖酶)作用细胞壁，使细胞壁破裂，淀粉、蛋白质从细胞内释放出来，分别再经淀粉酶、糖化酶、蛋白酶的作用，成为可溶性的葡萄糖、氨基酸等小分子被肠壁吸收，从而可增强动物肠道对营养物质的消化吸收能力。
[0018]第四方面，本申请还提供了一种动物饲料添加剂或动物饲料，所述动物饲料添加剂或动物饲料含有所述的黑曲霉(Aspergillus niger)PL
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L2、或所述的发酵液或酶液、或所述的复合酶制剂。
[0019]采用上述技术方案，可以提高饲料的利用率，可增加养殖效益，还可减少动物排泄量，继而减少环境污染。
[0020]第五方面，本申请还提供了所述的黑曲霉(Aspergillus niger)PL
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L2在分泌复合酶或制备复合酶制剂中的应用，所述复合酶制剂包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和β
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黑曲霉（Aspergillus niger）PL
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L2，其特征在于，所述黑曲霉PL
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L2保藏编号为CGMCC No. 40501。2.一种发酵液，其特征在于，所述发酵液由权利要求1所述的黑曲霉（Aspergillus niger）PL
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L2发酵制得。3.根据权利要求2所述的发酵液，其特征在于，所述发酵为液体发酵制得。4.一种复合酶制剂，其特征在于，所述复合酶制剂含有权利要求2或3任一所述的发酵液或由权利要求2或3任一所述的发酵液制得的酶液。5.根据权利要求4所述的复合酶制剂，其特征在于，所述发酵液或酶液中包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和β
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甘露聚糖酶。6.一种动物饲料添加剂或动物饲料，其特征在于，所述动物饲料添加剂或动物饲料含有权利要求1所述的黑曲霉（Aspergillus niger）PL
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L2、或权利要求2
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3任一所述的发酵液或酶液、或权利要求4
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5任一所述的复合酶制剂。7.权利要求1所述的黑曲霉（Aspergil...

【专利技术属性】
技术研发人员：邬奇修，陈秀秀，孙洪浩，高改林，韩业东，吕福军，
申请(专利权)人：辽宁波尔莱特农牧实业有限公司，
类型：发明
国别省市：