一种对温度耐受性强的裂解酶、制备方法及应用技术

本发明专利技术属于新的抗生素替代品技术领域，公开了一种对温度耐受性强的裂解酶Lys22、制备方法及应用，所述对温度耐受性强的裂解酶带有6个组氨酸标签，所述裂解酶的编码序列为SEQ ID NO：1；所述对温度耐受性强的裂解酶Lys22的制备方法包括：人工合成氨基酸编码序列，将双限制性内切酶消化回收后插入原核表达载体pET

【技术实现步骤摘要】
一种对温度耐受性强的裂解酶、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于新的抗生素替代品
，尤其涉及一种对温度耐受性强的裂解酶、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]目前，抗生素耐药是目前世界上共同面临的难题，寻找新的抗生素替代物迫在眉睫。很多细菌能形成生物膜，生物膜是细菌及其代谢物形成的一种群体结构，有助于细菌的粘附、定植，生物膜使细菌对外部环境及抗菌药物的耐受增大数百倍。
[0003]肠球菌属是广泛存在于自然界、人及动物肠道中的一种革兰染色阳性球菌，肠球菌是常见的医院内感染菌，可以引起机体多器官系统感染。肠球菌耐药严重，治疗困难，耐万古霉素的肠球菌位列WHO2017年发布的亟待开发新抗菌药物的细菌名录中的第三位。肠球菌形成生物膜是其耐药性形成的重要原因之一。在肠球菌引起的医院内感染中，粪肠球菌(Enterococcus faecalis)所占比例最高。而且在食品工业中，特别是发酵类奶制品生产中，大量肠球菌滋生除了可导致食品变质外，还可生大量生物胺，过量生物胺可以引起偏头痛等多种疾病和症状。
[0004]葡萄球菌属细菌也本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对温度耐受性强的裂解酶Lys22，其特征在于，所述对温度耐受性强的裂解酶Lys22带有6个组氨酸标签，所述裂解酶Lys22的编码序列为SEQ ID NO：1。2.一种应用如权利要求1所述的对温度耐受性强的裂解酶Lys22的制备方法，其特征在于，所述对温度耐受性强的裂解酶Lys22的制备方法包括以下步骤：步骤一，利用人工合成方法获得氨基酸的编码序列，并将双限制性内切酶消化回收后插入原核表达载体pET
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28a(+)质粒中；步骤二，通过热休克法将质粒转化入表达蛋白的工程细菌大肠杆菌BL21中，筛选阳性克隆，并将所述阳性克隆进行菌落PCR扩增及测序验证插入序列的正确性；步骤三，将阳性克隆菌株接种于卡那霉素的LB液体中培养至对数期，加入IPTG，诱导，将得到的培养液离心，得上清液；步骤四，将所述上清液经0.22微米滤膜过滤后，再用100KDa的超滤管过滤、离心，收集滤液；之后，将得到的滤液用10KDa的超滤管进行离心，浓缩；之后用Ni
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NTA纯化，纯化后的蛋白经过SDS
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PAGE进行验证。3.如权利要求2所述的对温度耐受性强的裂解酶Lys22的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的筛选阳性克隆包括：利用含有50μg/mL卡那霉素的固体LB平板上筛选阳性克隆。4.如权利要求2所述的对温度耐受性强的裂解酶Lys22的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：史红艳，胡南南，贾玉玺，张宇思，张娜，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：