暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法技术

本发明专利技术公开了一种暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法。本发明专利技术的技术方案中，首先在暗纹东方鲀养殖过程中投喂经抗生素处理过的饲料；其次选取暗纹东方鲀肠道中肠部位；然后通过优化暗纹东方鲀肠上皮细胞高效分离培养技术和细胞原代培养条件，得到了纯度较高、生长良好的暗纹东方鲀肠上皮细胞；最后利用皮质醇刺激暗纹东方鲀肠上皮细胞以建立氧化应激模型。本发明专利技术为暗纹东方鲀应用于发育生物学、免疫学、毒理与环境检测等方面的研究提供有力的研究材料。究提供有力的研究材料。究提供有力的研究材料。

【技术实现步骤摘要】
暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法


[0001]本专利技术属于水产养殖领域，尤其涉及一种暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法。

技术介绍

[0002]暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)是一种溯河洄游型鱼类，大部分时间在海洋中度过，其适宜生长温度范围为23
‑
32℃，为我国长江三鲜之一，主要分布在中国近海区域及长江中下游。近年来暗纹东方鲀在中国的养殖规模也在逐渐扩大。根据《中国渔业统计年鉴》记录，2020年中国淡水养殖河鲀量超2.6万吨，其中，暗纹东方鲀的养殖量较大。鱼类的肠道是重要的渗透、酸碱调节器官，鱼体的消化能力和吸收功能依靠着肠道健康。而暗纹东方鲀养殖规模扩大的过程中，重金属、化学药品使用、外源性饲料的持续投喂等导致养殖水体污染问题日益加重，已经严重威胁到暗纹东方鲀的肠道健康，如出现炎症、肠壁变薄、肠道弹性、肠道寄生虫等问题，一旦肠道出现以上问题，肠道的消化吸收能力变弱，将严重限制饲料价值的发挥，无形中拉高了养殖成本降低了养殖效益。
[0003]原代肠上皮细胞体外培养为研本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将暗纹东方鲀幼鱼在盐水中养殖7
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10d，期间投喂含新霉素和氨苄青霉素饲料，幼鱼取样前禁食；步骤2、幼鱼取样麻醉后无菌解剖摘取中段肠道，置于自配的清洗液中，去除肠系膜，纵向剪开肠道，刮去内容物，用自配的清洗液清洗2
‑
3遍，放入无菌离心管中剪成体积为0.5～0.8mm3肠组织块；步骤3、向肠组织块中加入0.5～1ml胶原酶Ⅳ消化液，金属浴消化，每隔5～10min取出吹打一次，加入提前配好28℃预温过的完全培养基终止消化，100目筛网过滤后于1000rpm，低温离心后向沉淀中加适量完全培养基，用移液枪反复轻轻吹打混匀，补足完全培养基后进行培养；步骤4、培养后吸除培养基，添加含皮质醇的完全培养基刺激肠上皮细胞24h建立氧化应激模型。2.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法，其特征在于，步骤1中，所述暗纹东方鲀幼鱼，体长为5
±
0.5cm。3.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法，其特征在于，步骤1中，期间投喂的饲料中含新霉素和氨苄青霉素浓度为10～20U/kg和15～20U/kg，两者比例关系为2～4：3～4。4.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法，其特征在于，步骤1中，所述盐水浓度为8
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10ppt，禁食时间为24

【专利技术属性】
技术研发人员：王涛，马思思，尹绍武，孙亦如，张莹，刘雨曦，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：