抗ROR1抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供抗ROR1抗体和使用所述抗体的方法。本发明专利技术所述的抗ROR1抗体可用于诊断和治疗与ROR1异常表达相关的疾病。疗与ROR1异常表达相关的疾病。疗与ROR1异常表达相关的疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗ROR1抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医学或生物制药
，具体涉及一种抗ROR1抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1,ROR1)属于受体酪氨酸激酶家族，该家族包括ROR1和ROR2。两种ROR受体在胎儿和胚胎发育过程中大量表达，但在健康成人的组织中表达程度降低。已知ROR1和ROR2通过激活平面细胞极性(planar cell polarity,PCP)和来自非典型Wnt信号的Ca
2+
途径来调节多种细胞过程，包括细胞分裂、增殖、迁移和趋化性。两种ROR受体具有共同的分子结构，由细胞外结构域(extracellular domain,ECD)、跨膜结构域和细胞内结构域(intracellular domain,ICD)组成，其中ECD由免疫球蛋白样、富半胱氨酸结构域(Ig
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like,cysteine rich domain)和克林格结构域(Kringle domain)组成，ICD由酪氨酸激酶样结构域和两个位于ICD末端富含脯氨酸的结构域两侧的丝氨酸/苏氨酸结构域组成。尽管还需要对不同细胞模型中的ROR同源或异源二聚化机制进行更多研究，来自非典型Wnt途径的Wnt5a已被证明会与ROR1和ROR2结合，并诱导受体异二聚化。除此之外，其他Wnt配体已被证明在各种细胞环境中能够与ROR1或ROR2相互作用，例如TCF3r/>‑
PBX1 B细胞急性淋巴细胞白血病中的Wnt16
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ROR1相互作用。
[0003]尽管ROR1在正常胚胎和胎儿发育过程中表达，但其在大多数成熟组织中不表达，仅在脂肪组织中可观察到低水平的ROR1表达，以及在胰腺、肺和部分中间B细胞中有较低程度的表达。然而，在许多血液瘤和恶性实体瘤中观察到ROR1的表达，例如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)，以及卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤和结直肠癌。肿瘤细胞中ROR1的高表达有助于提高细胞存活率、增殖率、迁移率和趋化性，Wnt5a配体的结合导致ROR1受体二聚化和各种衔接蛋白的募集，触发下游Rho/Rac1 GTPases、PI3K/AKT和Hippo
‑
YAP/TAZ途径的激活，最终导致肿瘤进展及对化疗药物产生耐药性。
[0004]肿瘤转移和耐药是癌症治疗面临的挑战，最近，有力的证据表明ROR1的表达与癌症干细胞(CSC)、上皮间质转化(EMT)和耐药性有关，成为肿瘤转移和复发的关键因素。有趣的是，在乳腺癌等肿瘤中，ROR1蛋白表达上调促进YAP/TAZ转录和/或多梳复合蛋白BMI
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1的表达，从而促进肿瘤发生，这表明由Wnt5a
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ROR1参与的非典型Wnt途径能够导致肿瘤恶性转变(Karvonen et al.,Cells,2019 Aug 2；8(8))。
[0005]ROR1在癌症发展和转移中的重要作用促使研究人员探索ROR1在癌症中的功能，开发针对ROR1的靶向癌细胞的免疫疗法。因此，ROR1是一个肿瘤相关/肿瘤特异性抗原，抗ROR1单克隆抗体可做为有潜力的抗癌疗法。针对ROR1最重要的策略之一是开发针对该受体的单克隆抗体，该抗体已被证明具有良好的临床前功效。
[0006]综上所述，本领域需要更有效的治疗方法可以有效抑制ROR1活性同时对人类不良反应较弱的抗ROR1抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种特异性结合ROR1和/或有效抑制ROR1活性的抗ROR1抗体或其抗原结合片段。
[0008]本专利技术基于抗ROR1抗体，该抗体可用于靶向表达ROR1的细胞以达到治疗和诊断目的。
[0009]第一部分，本专利技术提供了包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的多肽序列选自：
[0010]a.SEQ ID Nos：2、3、4、6、7、8；或
[0011]b.SEQ ID Nos：16、17、18、20、21、22；或
[0012]c.SEQ ID Nos：30、31、32、34、35、36；
[0013]其中，抗体或其抗原结合片段特异性结合受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)，优选人ROR1；以及
[0014]任一上述多肽序列还包括由1
‑
5(或1、2、3)个氨基酸任选地添加、删除、修饰和/或取代形成，并且能够保留ROR1结合亲和力的衍生序列。
[0015]本专利技术还提供了包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的多肽序列选自：
[0016]a.SEQ ID Nos：9、10、11、12、13的第1
‑
2位氨基酸(DA)、14；或
[0017]b.SEQ ID Nos：23、24、25、26、27的第1
‑
2位氨基酸(DA)、28；或
[0018]c.SEQ ID Nos：37、38、39、40、41的第1
‑
2位氨基酸(DA)、42；
[0019]其中，抗体或其抗原结合片段特异性结合受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)，优选人ROR1；以及
[0020]任一上述氨基酸序列还包括由1
‑
5(或1、2、3)个氨基酸任选地添加、删除、修饰和/或取代形成，并且能够保留ROR1结合亲和力的衍生序列。
[0021]在优选的实施方案中，本专利技术的抗体重链还包括重链恒定区和/或轻链还包括轻链恒定区。
[0022]在优选的实施方案中，本专利技术衍生抗体对ROR1的亲和力F1与相应非衍生抗体对ROR1的亲和力F0之比(F1/F0)为0.5
‑
2，优选为0.7
‑
1.5，更优选为0.8
‑
1.2。
[0023]在优选的实施方案中，本专利技术抗体的3个HCDR和3个LCDR中添加、删除、修饰和/或取代的氨基酸数目为1
‑
5个(例如1
‑
3个，优选为1
‑
2个，更优选为1个)。
[0024]在优选的实施方案中，本专利技术的抗体的重链可变区进一步包含人或人源化框架，和/或抗体的轻链可变区进一步包含人或人源化框架。
[0025]在优选的实施方案中，本专利技术的抗体是双链抗体或单链抗体。
[0026]在优选的实施方案中，本专利技术的抗体是全长抗体蛋白或抗原结合片段。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的多肽序列选自以下组别：a.SEQ ID Nos：2、3、4、6、7、8；或b.SEQ ID Nos：16、17、18、20、21、22；或c.SEQ ID Nos：30、31、32、34、35、36；其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合ROR1；以及所述多肽序列包括由1
‑
5个氨基酸任选地添加、删除、修饰和/或取代形成，并且能够保留ROR1结合亲和力的衍生序列。2.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的多肽序列选自以下组别：a.SEQ ID Nos：9、10、11、12、13的第1
‑
2位氨基酸、14；或b.SEQ ID Nos：23、24、25、26、27的第1
‑
2位氨基酸、28；或c.SEQ ID Nos：37、38、39、40、41的第1
‑
2位氨基酸、42；其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合ROR1；以及所述多肽序列包括由1
‑
5个氨基酸任选地添加、删除、修饰和/或取代形成，并且能够保留ROR1结合亲和力的衍生序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，抗体重链还包括重链恒定区和/或轻链还包括轻链恒定区。4.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区包含人或人源化框架区，和/或抗体的轻链可变区包含人或人源化框架区。5.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是双链抗体或单链抗体。6.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。7.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段的多肽序列选自以下组别：a.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：5的多肽序列的轻链可变区；或b.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：19的多肽序列的轻链可变区；或c.具有SEQ ID NO：29的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：33的多肽序列的轻链可变区。8.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。9.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是能够结合ROR1的免疫球蛋白样结构域或克林格结构域的ROR1特异性抗体。10.根据权利要求1
‑
9中任一项的抗体，其特征在于，所述ROR1特异性抗体选自以下组别：(i)单链抗体、单链可变区片段、缺乏铰链区的单价抗体或微型抗体；或(ii)Fab、Fab'或F(ab')2片段；或
(iii)完整抗体；或(iv)包含人IgG Fc结构域的抗体。11.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包含：(1)权利要求1
‑
10中任一项的抗体或其抗原结合片段；和(2)辅助表达和/或纯化的可选标签序列。12.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1
‑
10中任一项的单克隆抗体或抗原结合片段，或权利要求11的重组蛋白。13.一种载体，其特征在于，所述载体包含编码权利要求1
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10中任一项的单克隆抗体或抗原结合片段，或权利要求11的重组蛋白的分离核酸。14.根据权利要求13所述的载体，其特征在于，所述载体包含细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、慢病毒或逆转录病毒。15.一种工程化宿主细胞，其特征在于，所述工程化宿主细胞的基因组中包含权利要求12的核酸，或包含权利要求13的载体。16.一种抗体偶联物，包含：(1)选自本发明第一部分的抗体或其抗原结合片段，或本发明第五方面中的重组蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：范国煌，王建飞，
申请(专利权)人：南京艾美斐生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：