DC瘤苗联合单克隆抗体在制备用于癌症治疗的药物组合物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及DC瘤苗联合单克隆抗体在制备用于癌症治疗的药物组合物中的用途。本发明专利技术特异性的制备针对胃癌的DC瘤苗，该瘤苗具有较好的刺激免疫反应，与CLDN18.2单克隆抗体联合应用或者单独使用均可以有效的行使杀伤肿瘤细胞的功能，具有较好的应用价值。具有较好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
DC瘤苗联合单克隆抗体在制备用于癌症治疗的药物组合物中的用途


[0001]本专利技术涉及生物领域，更具体的，涉及一种DC瘤苗联合单克隆抗体在制备用于癌症治疗的药物组合物中的用途。

技术介绍

[0002]CLDJV18.2基因位于人染色体3q22位点。CLDN18.2由261个氨基酸组成，为四次跨膜结构，相对分子质量277不大，其氨基端和羧基端均位于细胞膜内侧。CLDN18.2有2个胞外环结构域，胞外环1是由53个氨基酸构成的4个反向折叠的3片层结构，其中β3与β4之间存在2个高度保守的半胱氨酸，它们之间形成的二硫键有助于分子结构的稳定；胞外环2由31个氨基酸组成，位于跨膜区3和跨膜区4之间。CLDN18.2限制性表达于分化成熟的胃黏膜上皮细胞以及多种肿瘤细胞表面，在胃干细胞区及其他正常组织中不表达。
[0003]CLDN18.2的异常表达与多种癌症的发生发展密切相关。有研究表明，CLDN18.2的表达升高与胆管肿瘤的形成有关，CLDN18.2参与了人体内胆管腺癌细胞的发生、增殖和侵袭过程，在胆管腺癌侵袭前沿细胞表面过表达。此外，在非小细胞肺癌的恶性转化中也有CLDN18.2的异常活化。然而，在Oshima等的研究中，胃癌侵袭的前沿组织中CLDN1&2的表达量降低，揭示了胃癌细胞的增殖和侵袭可能与CLDN18.2的表达下调相关。在病理状态下，Claudin18.2在多种肿瘤中有的表达显著上调，包括80％的胃肠道腺瘤、60％的胰腺肿瘤。此外，CLDN18.2活化还可见于食管癌、卵巢癌和肺腺癌中，因此是具有潜力治疗癌症的热门靶点。
[0004]IMAB362是德国Ganymed公司开发的耙向CLDN18.2的人鼠嵌合单抗，利用重组抗体表达技术在中国仓鼠卵巢细胞中生产。IMAB362可特异性识别细胞表面的CLDM8.2而不结合CLDN18.1，介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody
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dependentcell
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mediatedcytotoxicity，ADCC)和补体依赖的细胞毒作用(complement
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dependentcytotoxicity，CDC)，且具有抑制细胞增殖和介导细胞凋亡等生物学功能。在胰腺癌模型中的研究发现，MAB362能够特异性结合胰腺癌细胞并介导ADCC和CDC使细胞裂解凋亡，裂解能力与细胞表面CLDN18.2表达量呈正相关。而且，化疗药物吉西他滨可上调体外培养的人胰腺癌细胞中CLDN18.2的表达，增强IMAB362诱导的ADCC活性。在来自人胰腺癌细胞系(包括吉西他滨耐药系)的小鼠异种移植瘤中，IMAB362能减缓肿瘤生长，延长小鼠生存时间，并降低转移瘤的发展潜能。
[0005]树突状细胞(DC)在启动免疫反应中发挥关键作用,是机体内最重要、功能最强的专职抗原递呈细胞,因此是抗肿瘤免疫的最好佐剂。近年来许多研究证实,将不同形式肿瘤抗原负载的DC制成疫苗,可以在体内外诱导特异杀伤性T细胞(CTL)的生成,激发人体有效的特异性抗肿瘤免疫功能,并在恶性肿瘤尝试性治疗中取得了令人振奋的疗效。目前,DC介导的瘤苗主要有以下几种
①
抗原肽刺激的DC；
②
肿瘤提取物刺激的DC；
③
肿瘤抗原基因转染的DC；
④
肿瘤细胞与DC的融合细胞；
⑤
抗原肽刺激DC的亚细胞结构疫苗。肿瘤抗原的各种
负载形式均可以有效负载DC。
[0006]肿瘤模型的研究也证明肿瘤抗原基因转导的DC疫苗对已形成的肿瘤有治疗作用。研究了肿瘤抗原基因修饰的DC作为疫苗对表达靶肿瘤抗原的B16/F10黑色瘤的治疗作用,结果发现接种MAGE21基因转导的DC可导致肺转移模型中转移瘤数量减少,动物生存期延长，皮下肿瘤模型中部分可长期治愈。此外，从肿瘤细胞系中分离的肿瘤mRNA可被体外扩增而不会丧失其生物学功能。从黑色瘤B16/F1019细胞系中扩增的mRNA转导鼠DC能够在鼠体内刺激产生CTL反应,对术后肿瘤的转移产生保护性免疫反应。
[0007]但是目前，针对肿瘤DC疫苗的研究还不够多，特别别是将肿瘤DC疫苗与特异性的治疗抗体一起使用的研究也不够多，有待于进一步的开发。

技术实现思路

[0008]本专利技术一方面，本专利技术提供一种特异性的DC瘤苗。
[0009]所述DC瘤苗是将DC成熟细胞与胃癌SNU601细胞株mRNA混合均匀，选择电压700V，脉冲时程为230μs，反应温度为4℃条件下电击细胞，电转染后30min加入含有10％胎牛血清的Alys
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505培养液，置37℃、5.0％CO2培养箱中培养48h即可。
[0010]本专利技术另外一方面，提供了特异性的DC瘤苗在制备治疗癌症的药物组合物中的用途。
[0011]进一步的，所述药物组合物还可以包含其他常用的治疗药物，如抗体，小分子化合物。
[0012]进一步的，通常，治疗有效量的本文所述抗体，小分子或其它化合物或组合物可以在0.01mg/kg至100mg/kg的范围内，以及它们之间的所有值。例如，它可以是0.1mg/kg
‑
100mg/kg，0.1mg/kg
‑
50mg/kg，1mg/kg
‑
50mg/kg等。
[0013]进一步的，通常，治疗有效量的本文所述DC瘤苗，可以在1*106‑
1*10
11
/kg的范围内，以及它们之间的所有值。
[0014]另外一方面，本专利技术还提供了特异性针对CLDN18.2的单克隆抗体，CLDN18.2
‑
19，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：
[0015]DLVMTQTAPSVPVTPGESVSISCRSTWSPCVQPVWYQLYWFLQRPGQSPQLLIYIANNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCKLIFYEASMFGSGTKLEIK
[0016]重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示：
[0017]VKPGGSLKLSCAASYPYKDISKMSWVRQTPDKRLEWVAIRSEMSAWRYYPDSVKGRFTISRDQDKQTLYLQMSSLKSEDTAMYYCMEEAFLDIMCYWGQGTTVTVS。
[0018]进一步的，本专利技术还提供了特异性针对CLDN18.2的单克隆抗体在制备胃癌的药物组合物中的用途。
[0019]在一些方面，本专利技术涉及药物组合物，其包含至少一种如本文所公开的CLDN18.2抗体和药学上可接受的载体。
[0020]药物组合物可以任选地含有一种或多种另外的药物活性成分，例如另一种抗体或药物。本专利技术的药物组合物还可以与例如另一种免疫刺激剂、抗癌剂、抗病毒剂或疫苗组合施用，使得抗CLDN18.2抗体增强对疫苗的免疫反应。药学上可接受的载体可以包括例如药学上可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性针对CLDN18.2的单克隆抗体CLDN18.2
‑
19，其特征在于所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：DLVMTQTAPSVPVTPGESVSISCRSTWSPCVQPVWYQLYWFLQRPGQSPQLLIYIANNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCKLIFYEASMFGSGTKLEIK重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示：VKPGGSLKLSCAASYPYKDISKMSWVRQTPDKRLEWVAIRSEMSAWRYYPDSVKGRFTISRDQDKQTLYLQMSSLKSEDTAMYYCMEEAFLDIMCYWGQGTTVTVS。2.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于治疗胃癌的药物组合物中的用途。3.特异性针对CLDN18.2的单克隆抗体CLDN18.2
‑
19以及DC瘤苗在制备用...

【专利技术属性】
技术研发人员：史皓羽，刘燕武，
申请(专利权)人：南京皓羽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：