新的CD47单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供新的CD47抗体或其免疫活性片段、及药物组合物，该CD47抗体或其免疫活性片段在人体内具有低免疫原性，且引起低水平或不引起红血细胞清除或红细胞凝聚；该药物组合物含有这样的抗体，该抗体能用于治疗CD47介导的疾病或吞噬作用的抑制或血小板的凝聚。疾病或吞噬作用的抑制或血小板的凝聚。

A new monoclonal antibody against CD47 and its application

【技术实现步骤摘要】
新的CD47单克隆抗体及其应用
本申请是申请号201780003451.2，专利技术名称为“新的CD47单克隆抗体及其应用”的专利申请的分案申请。交叉参考的相关申请
[0001]本申请要求2016年10月20日提交的国际申请号为PCT/CN2016/102720，2017年.3月13日提交的国际申请号为PCT/CN2017/076462，2017年4月27日提交的国际申请号为PCT/CN2017/000329的国际申请作为优先权，并将其全部内容并入此文本。

技术介绍

[0002]CD47(分化群47)在20世纪80年代首次被确定为人类卵巢癌的肿瘤抗原。此后，CD47被发现在多种人类肿瘤类型上表达，包括急性髓系白血病(AML)，慢性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)，非霍奇金淋巴瘤(NHL)，多发性骨髓瘤(MM)、膀胱癌，和其它实体肿瘤。高水平的CD47让癌细胞避免吞噬作用，尽管癌细胞表面具有更高水平的钙网蛋白
‑
显性促吞噬信号。
[0003]CD47也称为整联蛋白相关蛋白(IAP)、卵巢癌抗原OA3、Rh
‑
相关抗原和MER6，是一种属于免疫球蛋白超家族的多跨的跨膜受体。它的表达和活性已经与许多疾病和失调相关联。它是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，并带有一个免疫球蛋白样结构域和五个跨膜区，其作为SIRPα的细胞配体，通过信号调节蛋白α(SIRPα)的NH2末端的V样结构域与SIRPα结合。SIRPα主要表达于骨髓细胞，包括巨噬细胞，粒细胞，树突状细胞(DC)，肥大细胞，和它们的前体细胞，包括造血干细胞。
[0004]巨噬细胞通过吞噬作用清除来自血流中的病原体和受损或老化的细胞。细胞表面的CD47与巨噬细胞上的它的受体SIRPα结合，从而抑制巨噬细胞对正常，健康的细胞的吞噬作用。SIRPα通过巨噬细胞抑制宿主细胞的吞噬作用，其中，巨噬细胞上的SIRPα与宿主靶细胞上表达的CD47结合，产生SHP
‑
1介导的抑制信号，该抑制信号负调节吞噬作用。
[0005]与CD47抑制正常细胞的吞噬作用一致的是，有证据表明，CD47在造血干细胞(HSC)和祖细胞在迁移期之前和期间有短暂的上调，且这些细胞上的CD47的水平决定了这些细胞被体内吞噬的概率。
[0006]CD47也在许多癌症上组成性上调，包括骨髓白血病。CD47在骨髓白血病系上的过表达通过允许它逃避吞噬作用而增加了其致病性。已经得出结论，在炎症介导的动员过程中，CD47的上调是为正常HSC提供保护的重要机制，并且白血病祖细胞选择这种能力以逃避巨噬细胞的杀伤。
[0007]某些CD47抗体已显示出可以恢复吞噬作用和防止动脉粥样硬化。请参考，例如，Kojima等，自然，卷36，86
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90(2016年8月4日)。本专利技术提供了一种新的CD47抗体或其免疫活性片段，其在人体中具有低免疫原性，且导致低水平红细胞消耗或无红细胞清除。本领域技术人员知道，这种抗体也可以被称为“抗CD47抗体”。

技术实现思路

[0008]一方面，本专利技术提供了能结合人CD47的分离的单克隆抗体及其免疫活性片段。为简洁起见，这些能结合CD47的分离的单克隆抗体及其免疫活性片段在下文中称为“CD47抗体”。本专利技术所述的CD47抗体能够调节，例如阻断、抑制、减少、拮抗、中和或以其它方式干扰CD47的表达、活性和/或信号转导，或CD47和SIRPα之间的相互作用。非常重要的，本专利技术的CD47抗体通常不引起人红血细胞的显著水平的清除或凝聚，并且令人惊讶地是，在许多情况下，根本不引起人红血细胞的清除或凝聚。另外，本专利技术的CD47抗体表现出有效的抗肿瘤活性。
[0009]在一些实施例中，本专利技术所述的CD47抗体包括(a)可变重(VH)链序列，该序列与选自包括下述序列的组中的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少95％)的一致性：SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:21，SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:31，SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:37，SEQ ID NO:39，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:55，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:59，SEQ ID NO:61，SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:71，SEQ ID NO:73，SEQ ID NO:75，和SEQ ID NO:77；和(b)可变轻(VL)链序列，该序列与选自包括下述序列的组中的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少95％)的一致性：SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:24，SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:40，SEQ ID NO:42，SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:50，SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:60，SEQ ID NO:62，SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:70，SEQ ID NO:72，SEQ ID NO:74，SEQ ID NO:76，和SEQ ID NO:78。
[0010]在一些其它实施例中，本专利技术所述的CD47抗体包括成对的VH/VL链序列，该成对序列与选自包括下述成对序列的组中的成对VH和VL氨基酸序列具有至少90％(例如，至少95％，96％，97％，98％，99％，或99.5％)的一致性：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2(即，1A1)，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4(即，1F8)，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6(即，2A11)，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8(即，2C2)，SEQ ID NO:9和SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能结合人CD47的分离的单克隆抗体或其免疫活性片段，包括：可变重(VH)链序列和可变轻(VL)链序列，其中，可变重(VH)链序列包括三个互补决定区，HCDR1、HCDR2和HCDR3，可变轻(VL)链序列包括三个互补决定区，LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，HCDR1、HCDR2和HCDR3由SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:21，SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:31，SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:37，SEQ ID NO:39，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:55，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:59，SEQ ID NO:61，SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:71，SEQ ID NO:73，SEQ ID NO:75或者SEQ ID NO:77所示的序列通过Kabat方法确定；LCDR1、LCDR2和LCDR3由：SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:24，SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:40，SEQ ID NO:42，SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:50，SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:60，SEQ ID NO:62，SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:70，SEQ ID NO:72，SEQ ID NO:74，SEQ ID NO:76或者SEQ ID NO:78所示的序列通过Kabat方法确定。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其免疫活性片段，所述抗体包括人IgG4重链和人Kappa轻链。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其免疫活性片段，其中，所述HCDR1为RAWMN(SEQ ID NO:108)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:109)，HCDR3为SNRAFDI(SEQ ID NO:110)；所述LCDR1为KSSQSVLYAGNNRNYLA(SEQ ID NO:111)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:112)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:113)；或者所述HCDR1为SYAMS(SEQ ID NO:114)，HCDR2为AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:115)，HCDR3为YSIGRHTFDH(SEQ ID NO:116)；所述LCDR1为TRSSGGIASNFVQ(SEQ ID NO:117)，LCDR2为RDNQRPS(SEQ ID NO:118)，LCDR3为QSYDDHNHWV(SEQ ID NO:119)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:120)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:121)，HCDR3为SNRAFDI(SEQ ID NO:122)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:123)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:124)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:125)；或者所述HCDR1为GYAMT(SEQ ID NO:126)，HCDR2为AITSTGGRTYYADSVKG(SEQ ID NO:127)，HCDR3为ESNFRAFD(SEQ ID NO:128)；所述LCDR1为RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO:129)，LCDR2为LNSNRAS(SEQ ID NO:130)，LCDR3为MQALQIPPT(SEQ ID NO:131)；或者所述HCDR1为DAWMT(SEQ ID NO:132)，HCDR2为VIYSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:133)，HCDR3为GARGHPGQDY(SEQ ID NO:134)；所述LCDR1为TRSSGTIASNFVQ(SEQ ID NO:135)，LCDR2为ENDRRPS(SEQ ID NO:136)，LCDR3为QSYDSSTHGWV(SEQ ID NO:137)；或者所述HCDR1为DYYMS(SEQ ID NO:138)，HCDR2为YTSRFGSDTNYADSVKG(SEQ ID NO:139)，HCDR3为DVHNRDAY(SEQ ID NO:140)；所述LCDR1为SGSSSNIGGNSVS(SEQ ID NO:141)，LCDR2
为RNHQRPS(SEQ ID NO:142)，LCDR3为ATWDFSLSGFV(SEQ ID NO:143)；或者所述HCDR1为SYAMS(SEQ ID NO:144)，HCDR2为AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:145)，HCDR3为ADY(SEQ ID NO:146)；所述LCDR1为RASQDIRNDLD(SEQ ID NO:147)，LCDR2为AASNLQS(SEQ ID NO:148)，LCDR3为QQSYITPPWT(SEQ ID NO:149)；或者所述HCDR1为SYGMS(SEQ ID NO:150)，HCDR2为TISGSGSSTNYADSVKG(SEQ ID NO:151)，HCDR3为GRYYYDSLDAFDI(SEQ ID NO:152)；所述LCDR1为RASQEIRTAYLA(SEQ ID NO:153)，LCDR2为YASSRAT(SEQ ID NO:154)，LCDR3为QQYDTSPPT(SEQ ID NO:155)；或者所述HCDR1为SYAMS(SEQ ID NO:156)，HCDR2为AISGTGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:157)，HCDR3为DKWSSWPTYYFDY I(SEQ ID NO:158)；所述LCDR1为TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO:159)，LCDR2为EDNQRPS(SEQ ID NO:160)，LCDR3为QSYDSSNVI(SEQ ID NO:161)；或者所述HCDR1为SYSMA(SEQ ID NO:162)，HCDR2为AVSNSGVETYYADSVKG(SEQ ID NO:163)，HCDR3为RTRQLLTPREFDY(SEQ ID NO:164)；所述LCDR1为RASQDITRWLA(SEQ ID NO:165)，LCDR2为DASSLQS(SEQ ID NO:166)，LCDR3为QQGSSVPFT(SEQ ID NO:167)；或者所述HCDR1为NYAMS(SEQ ID NO:168)，HCDR2为SVSSAGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:169)，HCDR3为RVNRAFDL(SEQ ID NO:170)；所述LCDR1为RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:171)，LCDR2为GASSRAT(SEQ ID NO:172)，LCDR3为QQYGSSPPMYT(SEQ ID NO:173)；或者所述HCDR1为NAWMS(SEQ ID NO:174)，HCDR2为RIKSKTDGGTTDYAAPVKG(SEQ ID NO:175)，HCDR3为DKSYGYTFDY(SEQ ID NO:176)；所述LCDR1为SGSGSNIGSNSVH(SEQ ID NO:177)，LCDR2为TNNQRPS(SEQ ID NO:178)，LCDR3为ATWDDRLSGPV(SEQ ID NO:179)；或者所述HCDR1为SYWMH(SEQ ID NO:180)，HCDR2为AISGSGAGTYYPDSVKG(SEQ ID NO:181)，HCDR3为DRSLSFGFDI(SEQ ID NO:182)；所述LCDR1为TRSSGSIGSTYVQ(SEQ ID NO:183)，LCDR2为KDDQRPS(SEQ ID NO:184)，LCDR3为QSSDTSNLV(SEQ ID NO:185)；或者所述HCDR1为RYWMS(SEQ ID NO:186)，HCDR2为NIKGDGSQTYYADSVKG(SEQ ID NO:187)，HCDR3为GAAYHINSWLDP(SEQ ID NO:188)；所述LCDR1为RASQSISGNYLA(SEQ ID NO:189)，LCDR2为GAFRRAT(SEQ ID NO:190)，LCDR3为QHYNNFPHT(SEQ ID NO:191)；或者所述HCDR1为HAWMN(SEQ ID NO:192)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:193)，HCDR3为SNRAFDI(SEQ ID NO:194)；所述LCDR1为KSSQSVLYQVNNRNYLA(SEQ ID NO:195)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:196)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:197)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:198)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:199)，HCDR3为SNRAFDI(SEQ ID NO:200)；所述LCDR1为KSSQTVLYPLNNRNYLA(SEQ ID NO:201)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:202)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:203)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:204)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:205)，HCDR3为SNRAFDI(SEQ ID NO:206)；所述LCDR1为KSSQSVLYPGNNRNYLA(SEQ ID NO:207)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:208)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:209)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:210)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:211)，HCDR3为SNRAFDI(SEQ ID NO:212)；所述LCDR1为KSSQSVLYPGNNRNYLA(SEQ ID NO:213)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:214)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:215)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:216)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:217)，HCDR3为GNHSSDI(SEQ ID NO:218)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:
219)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:220)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:221)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:222)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:223)，HCDR3为GAHSSDI(SEQ ID NO:224)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLAW(SEQ ID NO:225)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:226)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:227)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:228)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVKG(SEQ ID NO:229)，HCDR3为GQHSSDI(SEQ ID NO:230)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLAW(SEQ ID NO:231)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:232)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:233)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:234)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVK(SEQ ID NO:235)，HCDR3为SAYAFDA(SEQ ID NO:236)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:237)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:238)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:239)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:240)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVK(SEQ ID NO:241)，HCDR3为SAYAFDS(SEQ ID NO:242)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:243)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:244)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:245)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:246)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVK(SEQ ID NO:247)，HCDR3为SDRASDK(SEQ ID NO:248)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:249)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:250)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:251)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:252)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVK(SEQ ID NO:253)，HCDR3为SAYAFDT(SEQ ID NO:254)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:255)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:256)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:257)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:258)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPVK(SEQ ID NO:259)，HCDR3为GNHSQDI(SEQ ID NO:260)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:261)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:262)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:263)；或者所述HCDR1为NAWMN(SEQ ID NO:264)，HCDR2为RIKRKTDGETTDYAAPV(SEQ ID NO:265)，HCDR3为GQHSQDI(SEQ ID NO:266)；所述LCDR1为KSSQSVLYSSNNRNYLA(SEQ ID NO:267)，LCDR2为QASTRAS(SEQ ID NO:268)，LCDR3为QQYYTPPLA(SEQ ID NO:2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王正毅，方磊，郭炳诗，臧敬五，
申请(专利权)人：天境生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：