用于检测去除了假阳性信号的抗原的方法和试剂盒技术

提供了一种用于检测去除了假阳性信号的抗原的试剂盒。该试剂盒包括基底；可附着在基底上并具有用荧光材料标记的捕获链的捕获抗体；具有用荧光材料标记的检测链并与捕获链的部分或全部碱基序列互补的检测抗体；以及具有能够与捕获链或检测链互补结合以防止检测链和捕获链彼此互补结合的碱基序列的封闭链。和捕获链彼此互补结合的碱基序列的封闭链。

Method and kit for detecting antigen with false positive signal removed

【技术实现步骤摘要】
用于检测去除了假阳性信号的抗原的方法和试剂盒


[0001]本专利技术通常涉及一种用于检测去除了假阳性信号的抗原的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]在现有技术的免疫测定中，一种方法包括使用捕获抗体将抗原固定在基底表面，将用辣根过氧化物酶(HRP)或荧光材料标记的检测抗体与抗原结合，以及经常使用通过HRP引起的缓冲液颜色变化、荧光材料的亮度等来测量抗原的量。然而，检测抗体可以通过非特异性结合与抗原以外的其他位点(诸如基底的表面)结合。因此，由于假阳性信号的存在，可能使测量的抗原量不准确。当样品中存在大量抗原时，这种假阳性信号可以忽略不计，但当存在少量抗原来检测病毒抗原时，可能会出现大的错误等。图1是显示了在现有技术的免疫测定中可能引起假阳性问题的图。
[0003]因此，当存在少量抗原时，需要开发一种具有高灵敏度且无任何假阳性信号的新方法，以减少受试者在收集大量血液时的心理和生理负担并提高诊断的准确性。
[0004][现有技术文献][0005][专利文献][0006](专利文献0001)美国专利公开第20030190760号，名称为“Reducing nonspecific binding in immunoassays perform on polymer solid phase”(2003年10月9日公布)。
[0007](专利文献0002)美国专利第8445293号，名称为“Method to increase specificity and/oraccuracy oflateral flow Immunoassays”(2013年5月21日登记)。

技术实现思路

[0008]本专利技术的一个方面提供了一种用于检测去除了假阳性信号的抗原的试剂盒，其包括基底；可附着在基底上并具有用荧光材料标记的捕获链的捕获抗体；具有用荧光材料标记的检测链并与捕获链的部分或全部碱基序列互补的检测抗体；以及具有能够与捕获链或检测链互补结合以防止检测链和捕获链彼此互补结合的碱基序列的封闭链。
[0009]本专利技术的另一方面提供了一种用于检测去除了假阳性信号的抗原的方法，包括：(a)制备具有用荧光材料标记的捕获链的捕获抗体；(b)制备具有用荧光材料标记的检测链并与捕获链的部分或全部碱基序列互补的检测抗体；(c)使封闭链与捕获链和检测链中的一条或多条互补结合；(e)将捕获抗体附着在基底上；(f)引入包含抗原的样品以诱导抗原、捕获抗体和检测抗体之间的抗原
‑
抗体反应；(g)去除封闭链，使检测链与捕获链互补结合；(h)测量通过检测链与捕获链结合产生的荧光信号。
附图说明
[0010]通过参照附图详细描述本专利技术的示例性实施方案，本专利技术的上述和其他目的、特征和优点对于本领域技术人员将变得更加明显，其中：
[0011]图1是现有技术的免疫分析中可能出现的假阳性问题的示意图；
[0012]图2示出了使用FRET
‑
PAINT技术在检测抗原过程中出现假阳性的问题；
[0013]图3示出了具有互补序列的捕获链和检测链的结合受到引入的封闭链的阻碍；
[0014]图4示出了使用去除链来去除封闭链的过程；和
[0015]图5示出了与检测链形成互补结合的各种封闭链。
具体实施方式
[0016]将简要描述本说明书中使用的术语。
[0017]在本说明书中，术语“生物标志物”包括可用于检查活生物体的正常或病理状况的所有类型的生物材料。
[0018]在本说明书中，术语“FRET”指通过两种相邻荧光材料的共振来传递能量的机制。具体地，该术语是指被光激发的荧光材料的能量转移到另一种相邻的荧光材料的现象，并且可以旨在包括本领域技术人员所认识到的常规FRET的所有含义。
[0019]在本说明书中，术语“FRET效率”是指根据荧光材料之间距离的不同的能量转移效率由利用光激发的荧光材料的能量转移到另一种相邻的荧光材料的现象的值表示，并且可以旨在包括本领域技术人员所认识到的常规FRET效率的所有含义。
[0020]在本说明书中，术语“供体”是指受光激发时能量发生转移的荧光材料，即当两种或更多种荧光材料彼此相邻时，吸收或发射波长相对较短的光的荧光材料。
[0021]在本说明书中，术语“受体”是指在激发态从供体接收能量的荧光材料，即当两种或更多种荧光材料彼此相邻时，吸收或发射波长相对较长的光的荧光材料。
[0022]在本说明书中，术语“链”是指生物聚合物的链或通过模拟生物聚合物合成的聚合物的链。在这种情况下，生物聚合物可以具有单链或双链结构，并且包括核酸或核酸类似物。核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，核酸类似物包括肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、吗啉核酸(MNA)、乙二醇核酸(GNA)、苏糖核酸(TNA)以及类似物。
[0023]在下文中，将参照附图详细描述本专利技术的各个示例性实施方案。然而，应当理解，本专利技术不限于以下公开的实施方案，而是可以以各种形式实施。因此，对示例性实施方案的所有修改、等同和替换都旨在落入本专利技术的范围内。
[0024]本说明书中使用的术语仅用于说明的目的，并不用于限制本专利技术。单数形式“a(一)”、“an(一)”和“the(该)”也旨在包括复数形式，除非上下文另有明确说明。将进一步理解，术语“包括(comprises)”、“包括(comprising)”、“包含(includes)”和/或“包含(including)”，当在本文中使用时，指定所述特征、整数、步骤、操作、元件、组件和/或组的存在，但不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元件、组件和/或它们的组。
[0025]将理解的是，当一个元件被称为在另一个元件“上”时，它可以直接在另一个元件上，或者中间的元件可以存在于它们之间。
[0026]如本文所用的，除非另有说明，否则术语(包括科学和技术术语)具有本领域技术人员通常理解的含义。此外，应理解，常用词典中定义的术语应理解为在其相关领域的上下文中具有一致的含义，且不应被理解为理想化或过于正式的含义，除非本说明书另有明确定义。
[0027]此外，在参考附图描述各个实施方案时，除非另有说明，否则将省略对相同元件的
重复描述。
[0028]随着近来单分子荧光显微技术的发展，可以逐个观察分子。当该技术应用于生物标志物的检测时，灵敏度以fg/mL为单位增加1000倍(Nature 473,484
‑
488,2011)。在常用的荧光成像中，使用将荧光材料固定在待观察的分子中并利用荧光信号区分不同类型的生物标志物的方法。在这种情况下，使用固定不同颜色的荧光材料并通过颜色差异区分生物标志物类型的方法，但使用常规的图像传感器仅可分别观察3至4种类型的荧光材料。因此，当使用单分子荧光显微技术时，以fg/mL为单位的灵敏度比传统方法提高了1000倍，但要检测的生物标志物的类型仍然限制在3到4种。
[0029]同时，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测去除了假阳性信号的抗原的试剂盒，其特征在于，包括：基底；捕获抗体，其附着到所述基底上并具有用荧光材料标记的捕获链；检测抗体，其具有用荧光材料标记的检测链并与所述捕获链的部分或全部碱基序列互补；和封闭链，其具有能够与所述捕获链或所述检测链互补结合以防止所述检测链和所述捕获链彼此互补结合的碱基序列。2.如权利要求1所述的试剂盒，还包括去除链，所述去除链与所述封闭链互补并且通过与所述封闭链结合而能够去除所述封闭链。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述去除链的长度比所述封闭链的长度短。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭链还包含与所述捕获链和所述检测链均不互补的附加碱基序列。5.如权利要求1的试剂盒，其特征在于，当所述检测链与所述捕获链互补结合时，所述捕获链的荧光材料和所述检测链的荧光材料彼此形成FRET对。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述捕获链的荧光材料和所述检测链的荧光材料在所述捕获链和所述检测链的某些碱基、3'
‑
或5'
‑
末端或骨架上用作彼此的供体或受体。7.如权利要求5所述的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：李钟真，
申请(专利权)人：JL美迪乐博斯公司，
类型：发明
国别省市：