一种荧光免疫探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种荧光免疫探针及其制备方法和应用。所述制备量子点荧光免疫探针的方法包括：将量子点

A fluorescent immunoprobe and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种荧光免疫探针及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种荧光免疫探针及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]免疫标记技术是指用可显色发光的物质作为指示剂，通过共价或非共价键标记抗原或抗体进行抗原抗体反应，借助荧光分析仪、酶联免疫分析仪、灰度检测仪器等仪器对实验结果进行定性定量测定。痕量分析化学方面产生了重大突破，将放射性同位素示踪与免疫反应相结合建立了放射免疫分析法。此后免疫检测技术不断发展并突破，如酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定。
[0003]在荧光免疫探针的合成过程中，通常需要将蛋白质(抗原或抗体等)和标记材料进行偶联，为了使得二者之间偶联的稳定性更高，通常需要将二者过夜反应等，时间较长，导致生产周期较长，成本较高，此外，若标记材料尺寸较小，由于空间位阻等因素，材料表面可能只能偶联上一到两分子抗原/抗体，不利于提高检测灵敏度，如CN113671171A公开了一种信号放大量子点荧光免疫探针的制备方法，包括以下步骤：利用缩合剂将羧基量子点荧光微球活化，加入亲和素、酪蛋白进行反应，形成量子点荧光微球
‑
亲和素复合物；连接活化生物素和抗体，得到生物素化抗体；将生物素化抗体和量子点荧光微球
‑
亲和素复合物混合进行一次反应，加入量子点荧光微球
‑
亲和素复合物，再加入生物素化抗体进行二次反应，多次循环标记，制得信号放大的量子点荧光免疫探针，但其制备周期较长。
[0004]此外，在荧光免疫探针的合成过程中，反应体系的pH值、温度和反应缓冲液类型等都会影响探针的稳定性和反应效率，控制不当可能会产生严重的沉淀或偶联效率低下，因此，需要充分考虑各因素影响，精准控制反应过程，而如何实现精准控制，有效提高制备方法兼容性，提供一种能够快速制备高灵敏度荧光免疫探针的方法，是荧光检测领域亟需解决问题之一。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种荧光免疫探针及其制备方法和应用，所述方法能够快速制备高灵敏度的量子点荧光免疫探针，有效解决目前量子点荧光免疫探针制备周期长、灵敏度低等问题。
[0006]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种制备量子点荧光免疫探针的方法，所述方法包括：
[0008]将量子点
‑
链霉亲和素偶联物、生物素化抗体和硼酸盐缓冲液混合，振荡反应，得到所述量子点荧光免疫探针。
[0009]本专利技术中，通过链霉亲和素和生物素的反应体系，结合使用硼酸盐缓冲液以及高速振荡反应制备量子点荧光免疫探针，能够有效解决反应效率低以及反应过程易产生聚集的问题，从而显著缩短制备周期，量子点
‑
链霉亲和素偶联物和生物素化抗体完成反应仅需5min～1h，制备高灵敏度的量子点荧光免疫探针。
[0010]优选地，所述量子点
‑
链霉亲和素偶联物和生物素化抗体的摩尔比为1:(1～10)，包括但不限于1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
[0011]本专利技术中，发现控制量子点
‑
链霉亲和素偶联物和生物素化抗体的摩尔比为1:(1～10)，能够显著提高所制备量子点荧光免疫探针的灵敏度和稳定性。
[0012]优选地，所述硼酸盐缓冲液中含有牛血清白蛋白。
[0013]本专利技术中，发现使用含有牛血清白蛋白的硼酸盐缓冲液，能够显著提高反应效率，同时提高所制备量子点荧光免疫探针的灵敏度和稳定性，降低背景信号。
[0014]优选地，所述硼酸盐缓冲液中牛血清白蛋白的质量百分比为0.1％～5％，包括但不限于0.2％、0.4％、0.5％、0.8％、1％、2％、2.5％、3％、4％、4.2％、4.4％、4.6％、4.8％或4.9％。
[0015]优选地，所述硼酸盐缓冲液的pH为6～9，包括但不限于6.0、6.4、6.8、7.2、7.5、8、8.2、8.5或8.9。
[0016]优选地，所述振荡反应在振荡器中进行，所述振荡器的转速为200～500rpm，包括但不限于201rpm、202rpm、203rpm、204rpm、205rpm、206、207rpm、210rpm、220rpm、230rpm、260rpm、300、350、380、400、410、420、430、440rpm、450rpm、460rpm、470rpm、480rpm或490rpm。
[0017]优选地，所述振荡反应的温度为20～30℃(例如可以是21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃或29℃)，时间为5min～1h(例如可以是6min、7min、8min、10min、12min、15min、20min、0.6h、0.7h、0.8h、0.9h或1h)。
[0018]优选地，所述制备量子点荧光免疫探针的方法还包括制备量子点
‑
链霉亲和素偶联物的步骤。
[0019]优选地，所述量子点
‑
链霉亲和素偶联物的制备方法包括。
[0020]利用缩合剂将量子点活化，加入链霉亲和素，得到量子点
‑
链霉亲和素偶联物。
[0021]优选地，所述量子点
‑
链霉亲和素偶联物的制备方法包括以下步骤：
[0022](1
‑
1)向量子点溶液中加入偶联液和缩合剂，超声处理，离心去除上清保留沉淀；
[0023](1
‑
2)向(1
‑
1)中沉淀加入偶联液，然后加入链霉亲和素，进行振荡反应；
[0024](1
‑
3)向(1
‑
2)所得溶液中加入封闭液，进行反应；
[0025](1
‑
4)将(1
‑
3)所得溶液离心去除上清保留沉淀，用保存液复溶，得到量子点
‑
链霉亲和素偶联物。
[0026]优选地，所述缩合剂包括N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1
‑
乙基
‑3‑
(3
‑
二甲胺丙基)碳二亚胺(EDC)、NN
’‑
羰基二咪唑、4
‑
(4,6
‑
二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐中的一种或两种以上的组合。
[0027]优选地，所述偶联液包括含有吐温的硼酸盐溶液，所述偶联液的pH为6.5～8(例如可以是6.6、6.8、6.9、7、7.2、7.5、7.8或7.9)。
[0028]优选地，所述偶联液包括含0.01％～0.1％吐温20(例如可以是0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％或0.09％)的1～5mM(例如可以是1.1、1.2mM、1.3mM、1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备量子点荧光免疫探针的方法，其特征在于，所述制备量子点荧光免疫探针的方法包括：将量子点
‑
链霉亲和素偶联物、生物素化抗体和硼酸盐缓冲液混合，振荡反应，得到所述量子点荧光免疫探针。2.根据权利要求1所述的制备量子点荧光免疫探针的方法，其特征在于，所述量子点
‑
链霉亲和素偶联物和生物素化抗体的摩尔比为1:(1～10)；优选地，所述硼酸盐缓冲液中含有牛血清白蛋白；优选地，所述硼酸盐缓冲液的pH为6～9；优选地，所述振荡反应在振荡器中进行，所述振荡器的转速为200～500rpm；优选地，所述振荡反应的温度为20～30℃，时间为5min～1h。3.根据权利要求1或2所述的制备量子点荧光免疫探针的方法，其特征在于，所述制备量子点荧光免疫探针的方法还包括制备量子点
‑
链霉亲和素偶联物的步骤；优选地，所述量子点
‑
链霉亲和素偶联物的制备方法包括：利用缩合剂将量子点活化，加入链霉亲和素，得到量子点
‑
链霉亲和素偶联物；优选地，所述量子点
‑
链霉亲和素偶联物的制备方法包括以下步骤：(1
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1)向量子点溶液中加入偶联液和缩合剂，超声处理，离心去除上清保留沉淀；(1
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2)向(1
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1)中沉淀加入偶联液，然后加入链霉亲和素，进行振荡反应；(1
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3)向(1
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2)所得溶液中加入封闭液，进行反应；(1
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4)将(1
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3)所得溶液离心去除上清保留沉淀，用保存液复溶，得到量子点
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链霉亲和素偶联物。4.根据权利要求3所述的制备量子点荧光免疫探针的方法，其特征在于，所述缩合剂包括N
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羟基琥珀酰亚胺、1
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乙基
‑3‑
(3
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二甲胺丙基)碳二亚胺、N,N
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羰基二咪唑、4
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(4,6
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二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐中的一种或两种以上的组合；优选地，所述偶联液包括含有吐温的硼酸盐溶液，所述偶联液的pH为6.5～8；优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴语鹃，李启航，胡晓祥，郑钧元，曾雨萍，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：