一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法技术

本发明专利技术涉及一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法，采用十六酰胺键合硅胶进行分离，十六酰胺键合硅胶键合相为十六酰氯，同硅胶脱一分子的氯化氢即可，收率高，原料便宜，且酰胺可以同时提供形成氢键作用的正电荷和负电荷位点，这样有可能和目标物形成多种氢键，因氢键是较强的分子之间作用力，增加固定相和组分之间的氢键作用可以实现更好的分离选择性，故本发明专利技术重点合成了十六酰胺键合硅胶填料，用于大极性组分的分离。极性组分的分离。极性组分的分离。

A method of separating salidroside with silica gel bonded filler

【技术实现步骤摘要】
一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法


[0001]本专利技术属于红景天苷的分离纯化领域，具体涉及一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法。

技术介绍

[0002]大孔吸附树脂是一种具有大孔结构的高分子材料，具有吸附效率高、可再生等优点，因此大孔吸附树脂被广泛用于大极性小分子化合物的分离红景天中高纯度红景天苷制备工艺。但大孔吸附树脂分离和再生周期长、需要使用大量的试剂进行洗脱，使得样品浓度低、对树脂进行再生时同样也需要大量试剂，制备液相色谱是根据各组分经过固定相时与固定相发生的相互作用力不同而在固定相中滞留时间不同，各组分按极性、诱导偶极、氢键及配位等与固定性作用力的强弱顺序离开色谱柱,从而达到分离提纯的目的，且极性分子能够较快出来，这恰巧可以改善大孔吸附树脂的劣势。

技术实现思路

[0003]为解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
[0004](1)键合十六酰胺键合硅胶的制备：将氨乙基甲基二乙氧基硅烷和的硅胶置于甲苯中，加热使甲苯回流，得到氨基化硅胶，过滤干燥后备用，将上述氨基化硅胶置于甲苯中，加入十四酰氯，加热使甲苯回流，得到十六酰胺键合硅胶；
[0005](2)使用步骤(1)制备的十六酰胺键合硅胶的色谱柱采用色谱柱法分离红景天苷样品，设置条件为：色谱柱固定相为48g，上样量为固定相的12.5％，流动相为水
‑
甲醇，体积比为97：3，流速4ml/min，设置自动收集1min/管，将收集的馏分进行检测。
>[0006]优选的是，所述键合十六酰胺键合硅胶的分子式为：
[0007][0008]在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，制备色谱条件中的色谱柱为：的十六酰胺键合硅胶填料，20
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45μm，DAC100。
[0009]在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，制备色谱条件中的流动相：A: 水B:乙醇9
‑9‑
50min；95
‑
95
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10min；9
‑9‑
10min。
[0010]在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，制备色谱条件中的检测波长： 280nm。
[0011]在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，制备色谱条件中的流速： 300ml/min。
[0012]在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，制备色谱条件中的进样方式：泵进，流速：150ml/min,
[0013]进样量：以计算出来的发酵液粗提物全部进样为准。收集方式：废液管收集，每次接受450mL左右。
[0014]在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，馏分检测：根据制备色谱图，所有出峰均进行检测，进样量为3
‑
5μl；保持进样量一致，结果分析：将各馏分分析结果以试管和相关组分峰面积作图，绘制拟合曲线；馏分处理：以拟合曲线中，红景天苷的峰的左右两个峰脚间的部分对流分进行合并，50℃下旋蒸至100ml.取50ul，稀释10倍进液相色谱分析，剩余所有含有红景天苷的流份合并到一起，记为流份1。
[0015]本专利技术的有益效果为：由于红景天苷的色谱分析方法采用的是反相C18分析方法，所以人们很容易想到用C18作为分离材料进行分离纯化，但是红景天苷的极性非常大，很难在常规的反相色谱柱上进行有效的保留，分离选择性很差。我们根据相似相溶原理，我们在反相填料的键合相中内嵌入一个极性基团，如酯基、醛基、脲基、酰胺基或各种含氮或氧的杂环极性集团，这样使得该填料同红景天苷极性分子基团的作用力除了反相范德华力之外，增加了极性偶极作用，也就是相似相溶性，样品在固定性的溶解性增强了，根据各个组分的溶解性的差异，而作用力大小的差异而实现分离。
[0016]十六酰胺键合硅胶，键合相为十六酰氯，同硅胶脱一分子的氯化氢即可，收率高，原料便宜，且酰胺可以同时提供形成氢键作用的正电荷(H)和负电荷(O 和N)位点，这样有可能和目标物形成多种氢键，因氢键是较强的分子之间作用力，增加固定相和组分之间的氢键作用可以实现更好的分离选择性。
附图说明
[0017]图1为红景天苷样品HPLC分析图；
[0018]图2为峰面积拟合曲线；
[0019]图3为馏分合并分析图。
具体实施方式
[0020]为了更进一步了解本专利技术的
技术实现思路
，下面将结合具体实施例详细阐述本专利技术。
[0021]大孔吸附树脂是一种具有大孔结构的高分子材料，具有吸附效率高、可再生等优点，因此大孔吸附树脂被广泛用于大极性小分子化合物的分离红景天中高纯度红景天苷制备工艺，但大孔吸附树脂分离和再生周期长、需要使用大量的试剂进行洗脱，使得样品浓度低、对树脂进行再生时同样也需要大量试剂，制备液相色谱是根据各组分经过固定相时与固定相发生的相互作用力不同而在固定相中滞留时间不同，各组分按极性、诱导偶极、氢键及配位等与固定性作用力的强弱顺序离开色谱柱,从而达到分离提纯的目的，且极性分子能够较快出来，这恰巧可以改善大孔吸附树脂的劣势，大极性化合物在C18键合固定相上作用力非常弱，导致样品保留很弱，上样量低，选择性差，即使使用亲水型C18 键合相，纯水为流动相，也无法产生更多的保留强度；本专利技术设计了三款极性基团嵌入C18键合相，用以增加键合相的极性，增加对极性化合物的保留作用：
[0022]乙基十六烷基醚键合硅胶和十六酯基键合硅胶的结构式如下所示：
[0023][0024]乙基十六烷基醚键合硅胶
[0025][0026]十六酯基键合硅胶
[0027]这两款硅胶是将醚键嵌入或酯键嵌入C18键合相，均仅仅具有负电荷位点 (O)，形成的氢键种类单一，且硅胶键合原料比较贵；
[0028]而十六酰胺键合硅胶的分子式如下所示：
[0029][0030]十六酰胺键合硅胶，键合相为十六酰氯，同硅胶脱一分子的氯化氢即可，收率高，原料便宜，且酰胺可以同时提供形成氢键作用的正电荷(H)和负电荷(O 和N)位点，这样有可能和目标物形成多种氢键。
[0031]因氢键是较强的分子之间作用力，增加固定相和组分之间的氢键作用可以实现更好的分离选择性，故本专利技术重点合成了十六酰胺键合硅胶填料，用于大极性组分的分离。
[0032]1.以分离提纯红景天苷为例进行实验
[0033]1.1建立分析方法确认样品
[0034]分析方法参照了李笑等人建立的使用HPLC测定红景天原液中红景天苷的方法，测得样品分析图见图1，可知样品中主要含红景天苷和酪醇。
[0035]1.2键合十六酰胺键合硅胶
[0036]将4g氨乙基甲基二乙氧基硅烷和10g 5μm 100A的硅胶置于200ml甲苯中，加热使甲苯回流，反应12小时，得到氨基化硅胶。过滤干燥后备用。
[0037]将上述氨基化硅胶置于甲苯中，加入十四酰氯，加热使甲苯回流，反应12 小时，得到十六酰胺键合硅胶；
[0038]1.3分离提纯...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法，按照先后顺序包括以下步骤：(1)键合十六酰胺键合硅胶的制备：将氨乙基甲基二乙氧基硅烷和的硅胶置于甲苯中，加热使甲苯回流，得到氨基化硅胶，过滤干燥后备用，将上述氨基化硅胶置于甲苯中，加入十四酰氯，加热使甲苯回流，得到十六酰胺键合硅胶；(2)使用步骤(1)制备的十六酰胺键合硅胶的色谱柱采用色谱柱法分离红景天苷样品，设置条件为：色谱柱固定相为48g，上样量为固定相的12.5％，流动相为水
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甲醇，体积比为97：3，流速4ml/min，设置自动收集1min/管，将收集的馏分进行检测。2.根据权利要求1所述的一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法，其特征在于，所述键合十六酰胺键合硅胶的分子式为：3.根据权利要求1所述的一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法，其特征在于，步骤(2)中，制备色谱条件中的色谱柱为：的十六酰胺键合硅胶填料，20
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45μm，DAC100。4.根据权利要求1所述的一种硅胶键合填料分离红景天苷的方法，其特征在于，步骤(2)中，制备色谱条件中的流动相：A:水B:乙醇9
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50min；95
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【专利技术属性】
技术研发人员：王洪宇，张慧君，汪群杰，
申请(专利权)人：天津中科博蕴生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：