用于大麻素合成的酶及其制备和使用方法技术

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于大麻素合成的酶及其制备和使用方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2019年10月1日提交的美国临时专利申请序列号62/909,227、2019年11月27日提交的美国临时专利申请序列号62/941,689和2019年12月1日提交的美国临时专利申请序列号62/942,198的权益和优先权，将其通过援引并入本文。序列表的引用
[0002]本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过援引以其全文并入本文。

[0003]本申请涉及分子生物学，并且更特别地涉及用于大麻素合成的酶。

技术介绍

[0004]大麻素化合物作用于大麻素受体的其他靶标，并显著影响大脑中神经递质的释放。大麻素化合物(如用于医疗目的的大麻二酚)的使用已在全球扩大，并且其立法也越来越被接受。因此，大麻素类化合物正在成为一类新型药物。然而，在生产大麻素化合物方面仍然存在许多挑战，所述大麻素化合物传统上是从植物中提取和纯化的。此外，很难使用目前已知的方法来生产多种大麻素类似物。因此，需要合成和生产大麻素化合物的新途径。
专利...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种生产大麻萜酚酸(CBGA)或其类似物的方法，所述方法包括以下步骤：使异源表达的异戊二烯基转移酶与香叶基二磷酸酯(GPP)和酸反应。2.如权利要求1所述的方法，其中所述异戊二烯基转移酶具有异戊二烯基转移酶活性和/或香叶基焦磷酸酯:橄榄醇酸酯香叶基转移酶(GOT)活性。3.如权利要求1所述的方法，其中所述异戊二烯基转移酶具有与天然CBGAS的活性相比合成能力提高并且副产物形成减少的活性；或具有与NphB野生型相比改善的用于形成CBGA的反应速率。4.如权利要求1所述的方法，其中所述异戊二烯基转移酶具有大于12μg/mL的CBGA的反应速率。5.如权利要求1所述的方法，其中所述酸选自由以下组成的组：苔色酸(OSA)、丙基雷锁辛酸(DVA)和橄榄醇酸(OLA)、芹菜素、黄豆苷元、染料木素、柚皮素、橄榄醇、橄榄醇酸(OA)和白藜芦醇。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述异戊二烯基转移酶与选自由SEQ ID No:01
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103、198
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335组成的组的氨基酸序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性，或所述异戊二烯基转移酶由与选自由SEQ ID No:104
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197、336
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583组成的组的核酸序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性的核苷酸序列表达。7.如权利要求6所述的方法，其中所述氨基酸序列是SEQ ID No:01、02、85或179。8.一种生产大麻素的方法，所述方法包括以下步骤：a)使异源表达的异戊二烯基转移酶与异戊二烯基基团供体和酸反应以生产大麻萜酚酸(CBGA)或其类似物；和b)使所述CBGA或其类似物与大麻素合酶反应以形成大麻素的酸性形式。9.如权利要求8所述的方法，其中所述异戊二烯基转移酶具有与天然CBGAS的活性相比合成能力提高并且副产物形成减少的活性。10.如权利要求8所述的方法，其中所述异戊二烯基转移酶具有大于12μg/mL的CBGA的反应速率。11.如权利要求8所述的方法，其中所述酸选自由以下组成的组：苔色酸(OSA)、丙基雷锁辛酸(DVA)和橄榄醇酸(OLA)、芹菜素、黄豆苷元、染料木素、柚皮素、橄榄醇、橄榄醇酸(OA)、白藜芦醇、丁酸、戊酸、己酸和庚酸。12.如权利要求8
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11中任一项所述的方法，其中所述酶与选自由SEQ ID NO:01
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335组成的组的序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性；或所述酶由与SEQ ID No:104
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583的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性的核苷酸序列表达。13.一种工程化以生产CBGA的重组微生物，其中所述微生物过表达与选自由SEQ ID NO:01
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335组成的组的序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性的酶。14.一种工程化以生产CBGA的重组微生物，其中所述微生物包含至少一种异源核苷酸序列或其密码子简并核苷酸序列，所述异源核苷酸序列与选自由SEQ ID No:104
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197、336
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583组成的组的核酸序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性。
15.一种具有大麻萜酚酸合酶(CBGAS)活性的分离的多肽；其中所述多肽包含与选自由SEQ ID NO:01
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335组成的组的氨基酸序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性的氨基酸序列；或所述多肽由核苷酸序列表达，所述核苷酸序列与选自由SEQ ID NO:104
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583组成的组的核苷酸序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性。16.如权利要求15所述的分离的多肽，其中所述多肽在微生物宿主中表达，所述微生物宿主选自由以下组成的组：大肠杆菌、解脂耶氏酵母和酿酒酵母。17.如权利要求15所述的分离的多肽，其中所述多肽在大麻属物种中表达。18.一种用于生产CBGA的酶的用途，其中所述酶与选自由SEQ ID NO:01
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335组成的组的序列的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性，或所述酶由与选自由SEQ ID No:104
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583组成的组的全部或片段具有至少约80％、85％、90％或95％序列同一性的核苷酸序列表达。19.一种重组多肽，所述重组多肽包含与SEQ ID NO:246具有至少95％同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含对保守氨基酸的至少一个氨基酸取代。20.如权利要求19所述的重组多肽，其中所述至少一个氨基酸取代选自由以下组成的组：Y46W、Y46A、Y46L、Y46C、Y46D、Y46E、Y46F、Y46G、Y46H、Y46I、Y46K、Y46P、Y46M、Y46N、Y46Q、Y46R、Y46S、Y46T、Y46V、Q51G、Q51A、Q51C、Q51D、Q51E、Q51F、Q51G、Q51H、Q51I、Q51K、Q51L、Q51M、Q51N、Q51P、Q51R、Q51S、Q51T、Q51V、Q51W、Q51Y、L55V、L55F、L55A、L55Q、L55W、L...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉约姆，
申请(专利权)人：杭州恩和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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