一种从川芎中提取分离纯化4种苯酞内酯的方法技术

本发明专利技术涉及一种从川芎中提取、分离纯化4种苯酞内酯的方法，是以川芎药材为原料，经过下述步骤：（1）川芎苯酞内酯的提取；（2）粗提物的组成分析；（3）超临界流体色谱分离分析川芎苯酞内酯的条件优化；（4）超临界流体色谱分离纯化川芎苯酞内酯；（5）化合物的纯度检测及结构鉴定。本发明专利技术使用半制备型超临界流体色谱对川芎苯酞内酯进行分离纯化，一次分离耗时20分钟，得到4种高纯度的成分，经鉴定分别是洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、瑟丹酸内酯和Z

A method for extracting, separating and purifying four kinds of phthalide lactones from Ligusticum Chuanxiong

【技术实现步骤摘要】
一种从川芎中提取分离纯化4种苯酞内酯的方法


[0001]本专利技术属于化工领域，具体是涉及一种从川芎中提取分离纯化4种苯酞内酯的方法。

技术介绍

[0002]川芎为伞形科藁本属植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，性温，味辛，归肝、胆、心包经，具有活血行气、祛风止痛的功效，用于胸痹心痛、胸胁刺痛、跌扑肿痛、月经不调、经闭痛经、腹痛、头痛、风湿痹痛等症的治疗，为中医常用的活血化瘀药。川芎含有苯酞内酯、萜烯、生物碱、多糖等多种类型的化学成分，其中以苯酞内酯的含量最高。苯酞内酯具有解痉、平喘、抗惊、镇痛、抗血小板凝聚、松弛子宫和气管平滑肌、抑制中枢神经、抗实验性脑缺血等多种生理活性。已报道的苯酞内酯有洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、瑟丹酸内酯及Z
‑
藁本内酯等。
[0003]川芎中苯酞内酯的纯化方法主要有硅胶柱层析法及大孔吸附树脂法。硅胶柱层析法的操作过程繁琐，回收率较低，经常使用氯仿、苯等毒性较强的有机溶剂，所得产品中有机溶剂残留较为严重；大孔吸附树脂法的分离效率较低，通常用于样品的粗分离。
[0004]因此，建立一种高效快速的提取、分离纯化川芎中苯酞内酯的方法对于深化川芎的药理作用研究及完善质量控制体系均具有重要的意义。
[0005]超临界流体色谱是以超临界流体为流动相的色谱分离分析技术，它集合了气相色谱法和液相色谱法的优点，不仅能够分析气相色谱不宜分析的高沸点、低挥发性的组分，而且比液相色谱法具有更快的分析速率和更高的柱效。超临界流体色谱常用超临界CO2为流动相，必要时添加少量的极性改性剂，CO2无色、无味、无毒、价廉易得，CO2经减压后可挥发除去，因此，用该方法纯化所得的产品有机溶剂残留量极低，产品的后处理操作简单，成本低。目前，超临界流体色谱已用于天然产物、药物、表面活性剂、农药等物质的分离和分析。但是，尚未见该技术用于纯化川芎苯酞内酯的报道。
[0006]本专利技术使用超临界流体色谱对川芎苯酞内酯进行了半制备型分离和纯化，提供了一种高效、快速、简便、绿色环保的从川芎中提取、分离纯化4种苯酞内酯的新方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种高效、快速、简便、绿色环保的从川芎中提取、分离纯化 4种苯酞内酯的方法。
[0008]本专利技术的方案如下：
[0009]从川芎中提取、分离纯化4种苯酞内酯的方法，其步骤为：
[0010](1)川芎苯酞内酯的提取：将川芎药材粉碎，用溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物；
[0011](2)粗提物的组成分析：使用分析型高效液相色谱仪对川芎粗提物的组成进行了分离分析，条件如下：色谱柱为YMC
‑
Pack ODS
‑
AQ柱(250mm
×
4.6mm I.D.,5μm)，流动相为甲
醇
‑
水，乙腈
‑
水，甲醇
‑
0.1％甲酸或乙腈
‑
0.1％甲酸，流速为1.0mL/min，柱温为 25℃，检测波长为280nm；
[0012](3)超临界流体色谱分离分析川芎苯酞内酯的条件优化：使用分析型超临界流体色谱仪对川芎苯酞内酯的分离分析条件进行了优化，条件如下：色谱柱为YMC
‑
Pack Diol
‑
NP 柱、YMC
‑
Pack ODS
‑
AQ柱或YMC
‑
Pack NH2柱，流动相为超临界CO2，改性剂为甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈，改性剂在流动相中的体积比呈阶梯式上升，流动相的流速为2.5
‑
4.5 mL/min，分离压力为11
‑
15MPa，分离温度为35
‑
55℃，检测波长为280nm；
[0013](4)超临界流体色谱分离纯化川芎苯酞内酯：用半制备型超临界流体色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，最佳条件如下：色谱柱为YMC
‑
Pack Diol
‑
NP柱(250mm
×
10 mm I.D.,5μm)，流动相为超临界CO2，改性剂为甲醇，甲醇在流动相中的体积比呈阶梯式上升，流动相的流速为15
‑
25mL/min(优选为20mL/min)，分离压力为13MPa，分离温度为50℃，检测波长为280nm；根据色谱图手动收集目标组分馏分，自然挥发除去溶剂；
[0014](5)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤(2)，经核磁共振波谱分析4种化合物分别是Z
‑
藁本内酯、瑟丹酸内酯、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H。
[0015]前述方法中，步骤(1)提取方法为冷浸、超声或加热回流(优选加热回流)，提取溶剂为水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯和石油醚(优选乙醇)。
[0016]前述方法中，步骤(1)提取用乙醇
‑
水溶液的浓度为30
‑
95％(优选80％)，提取溶剂的用量为6倍量
‑
15倍量(优选10倍量)。
[0017]前述方法中，步骤(1)提取时间为1
‑
2小时(优选1.5小时)，提取次数为2
‑
5次(优选3次)。
[0018]前述方法中，步骤(2)流动相的组成为甲醇
‑
0.1％甲酸(65:35，V/V)。
[0019]前述方法中，步骤(3)中色谱柱为YMC
‑
Pack Diol
‑
NP柱(250mm
×
4.6mm I.D.,5μm)，改性剂为甲醇。
[0020]前述方法中，步骤(3)中，对于Z
‑
藁本内酯和瑟丹酸内酯而言，甲醇在流动相中的体积比为0.5％
‑
3.0％(优选1.5％)，对于洋川芎内酯I和洋川芎内酯H而言，甲醇在流动相中的体积比为4％
‑
9％(优选6％)。
[0021]前述方法中，步骤(3)中流动相的流速为3.5mL/min，分离压力为13MPa，分离温度为50℃。
[0022]本专利技术从川芎中提取、分离纯化4种苯酞内酯。首先，用80％乙醇加热回流提取使苯酞内酯类成分溶出，同时使强极性成分不被溶出；接下来，使用高效液相色谱法对粗提物的组成进行了分离分析，确定了4种目标化合物；然后，用分析型超临界流体色谱仪对分离条件进行了优化，包括色谱柱、改性剂的种类及在流动相中的体积比、流动相的流速、分离压力及分离温度，建立了最佳分离方法；紧接着，将分离从分析型规模放大到用半制备型规模，使用半制备型超临界流体色谱仪对提取物中的成分进行分离纯化，一次分离可以得到4种化合物；最后，用高效液相色谱法对化合物的纯度进行测定，根据核磁共振波谱分析对化合物的结构进行鉴定。该方法所得目标化合物纯度高，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从川芎中提取、分离纯化4种苯酞内酯的方法，其特征在于，步骤为：（1）川芎苯酞内酯的提取：将川芎药材粉碎，用溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物；（2）粗提物的组成分析：使用分析型高效液相色谱仪对川芎粗提物的组成进行了分离分析，条件如下：色谱柱为YMC
‑
Pack ODS
‑
AQ柱（250 mm
×
4.6 mm I.D., 5 μm），流动相为甲醇
‑
水，乙腈
‑
水，甲醇
‑
0.1%甲酸或乙腈
‑
0.1%甲酸，流速为1.0 mL/min，柱温为25℃，检测波长为280 nm；（3）超临界流体色谱分离分析川芎苯酞内酯的条件优化：使用分析型超临界流体色谱仪对川芎苯酞内酯的分离分析条件进行了优化，条件如下：色谱柱为YMC
‑
Pack Diol
‑
NP柱、YMC
‑ꢀ
Pack ODS
‑
AQ柱或YMC
‑
Pack NH2柱，流动相为超临界CO2，改性剂为甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈，改性剂在流动相中的体积比呈阶梯式上升，流动相的流速为2.5
‑
4.5 mL/min，分离压力为11
‑
15 MPa，分离温度为35
‑
55℃，检测波长为280 nm；（4）超临界流体色谱分离纯化川芎苯酞内酯：用半制备型超临界流体色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，最佳条件如下：色谱柱为YMC
‑
Pack Diol
‑
NP柱（250 mm
×
10 mm I.D., 5 μm），流动相为超临界CO2，改性剂为甲醇，甲醇在流动相中的体积比呈阶梯式上升，流动相的流速为15
‑
25 mL/min（优选为20...

【专利技术属性】
技术研发人员：李爱峰，宋雅倩，于琳琳，柳仁民，孙爱玲，
申请(专利权)人：聊城大学，
类型：发明
国别省市：