改善的凝血组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于生产用于分析物测试如用于病理学测试和其它生物测定的高质量血清样品的改善的凝血组合物。特别地，本发明专利技术涉及凝血酶原激活剂连同稳定剂如胶体一起用于生产高质量血清样品。本发明专利技术还涉及用于制备凝血组合物、管、试剂盒的相关方法以及诊断、预后和监测对治疗的反应性的方法。测对治疗的反应性的方法。测对治疗的反应性的方法。

【技术实现步骤摘要】
改善的凝血组合物
[0001]本专利技术是申请日为2015年10月23日、申请号为201580057842.3、专利技术名称为“改善的凝血组合物”的分案申请。


[0002]本专利技术涉及用于生产用于分析物测试的高质量血清样品的改善的凝血组合物。特别地，本专利技术涉及凝血酶原激活剂连同稳定剂如胶体一起的应用，用于生产用于分析物测试的高质量血清样品，如用于病理学测试和其它生物测定。本专利技术还涉及用于制备凝血组合物、管、试剂盒的相关方法以及诊断、预后(prognosis)和监测对治疗的反应性的方法。
[0003]相关申请的引证
[0004]不适用。
[0005]关于联邦资助的研究的声明
[0006]不适用。

技术介绍

[0007]通常通过允许血液样品凝固然后离心样品来生产血清，以从血清分离血块，包括细胞。塑料管(代替玻璃)现在通常被使用并要求前凝血剂，还称为凝血激活剂，以增强凝血过程。前凝血剂使用内在或外在途径来实现血块形成。
[0008]通过内在途径的血块形成是表面依赖性的，由此较大密度的激活表面位点会增强凝血时间。通常，硅质物质如玻璃、二氧化硅、高岭土、膨润土和硅藻土用于塑料管以加速血块形成，其是通过内在途径来实现接触激活。然而，通过内在途径的凝血是相对缓慢的，通常需要30至60分钟。
[0009]通过外在途径的凝血激活涉及通过添加外在于血液并以浓度依赖性方式涉及生化反应的物质所引发的凝固。通过外在途径进行操作的凝血激活剂包括鞣花酸、凝血酶、蛇毒液成分和促凝血酶原激酶。虽然这些凝血激活剂在10至20分钟内产生快速凝血，但形成的血块经常是胶质的并且不容易从血清分离。
[0010]对于分析物测试，血清通常优先于血浆，除非需要紧急结果，在这种情况下，对于血清管的凝血时间被认为太长。即使借助于现有前凝血剂，在大多数商业管中，由制造商推荐的最低要求的凝血时间对于来自正常患者的血液样品是30分钟，以及对于来自采用抗凝血治疗剂如肝素的患者的样品则更长(通常60分钟或更长时间)。对于来自紧急情况(应急部门、重症监护室、手术室等)的样品来自导管实验室的样品，时间太，因而血浆，其可以产生得更快，通常优先于血清。
[0011]通过在含有抗凝剂的管中收集血液，接着在收集之后可以立即进行的离心以分离细胞来形成血浆，因而获得用于分析的血浆。在这些管中，肝素锂是最常用的抗凝剂。柠檬酸盐、氟化钠/草酸钾和EDTA是其它抗凝剂，其用于一些管以产生用于少量的其它分析物的估计的血浆。在制备血清样品中的凝固过程消耗纤维蛋白原并在血纤维蛋白的网络内截留血小板和其它细胞。在离心之后，通过在收集装置中的血清分离器，或通过将血清等分到辅
助容器来从血块分离血清，以防止与细胞的接触。这种分离允许样品长时间保持稳定。如果不立即分析样品，或如果需要再分析或附加分析，则这种稳定性是特别重要的。
[0012]对于一些血清样品，在推荐的等待时间之后，凝固仍然是不完整的。在进行抗凝血治疗的患者中或在收集自抗凝滴管或插管的样品中，在样品中不完全凝血或潜伏凝血的问题是特别普遍的。为了凝固，这样的血液可能需要比制造商建议的等待时间更长的时间，或实际上在标准血清管(例如，来自被完全肝素化的心脏手术患者的血液)中可能永远不会完全凝固。
[0013]如果在凝血完成以前离心血清样品，则随着剩余的纤维蛋白原被转换为血纤维蛋白，在血清中可以继续凝血，从而导致血块、微小凝块或血纤维蛋白串的形成能够，其引起分析仪或分析物特有的问题。由于缺乏在血液收集之后肝素锂管的及时反转，在样品制备期间在血浆管中还可能发生微小凝块和纤维蛋白原串的形成。虽然肝素会防止血块形成，但在接触之后它不能崩解血块。因此，血块将保持在管中，而不管与肝素的进一步接触。同样在其他抗凝管(例如EDTA)中，也可能发生凝血。在血小板聚集期间，由于来自血小板的α颗粒的血小板因子4(PL4)的刺激，肝素锂血浆管还可以允许不溶性血纤维蛋白的形成，从而中和肝素。
[0014]另外，其他患者因素如疾病状态和用药都可以减小肝素活性的功效并导致增加的血纤维蛋白形成。随着时间的推移，主要是由于PL4活性，在储存的肝素锂血液样品中肝素活性会降低。当血浆储存在低温下时，会增强不溶性血纤维蛋白的形成。
[0015]即使最小的血块也能够产生临床上显着性误差和/或引起自动分析仪阻塞。确实，随着时间的推移，随着在新的自动化分析仪中的使用量正在不断减少加上越来越多的用抗凝剂的患者，这个问题变得越来越普遍。分析仪的阻塞意味着实验室工作流程被中断，并且分析仪受制于停机时间并要求清洗以及可能需要受影响部件的更换。因此，为了准确性，必须通过眼睛或使用自动检测系统(如果可用来确保它们没有血纤维蛋白丝条或血块)来手动检查样品。如果存在不溶物的丝条或血块，则样品需要子采样到新容器并在测试分析之前再离心。呈现反复潜伏凝血的样品可能需要转移到肝素锂管以停止正在进行的凝血。这些操作需要额外的时间。此外，并不总是检测到血纤维蛋白丝条或血块(例如它们甚至可能发生在分析仪采样之后)，以及相应的采样误差可能导致基于不准确的结果来作出患者护理决策。
[0016]在血浆管中获得的样品，具体地肝素锂血浆，还可能被细胞污染。当离心时，肝素锂凝胶管在血浆的底部的凝胶的顶部上总是会出现小“血沉棕黄层样层”。此层含有血纤维蛋白、细胞和细胞基质。在离心期间，快速凝胶运动会在血浆中留下一些细胞。在离心期间，快速凝胶和血细胞运动会引起凝胶在细胞和血浆之间形成阻挡层并在血浆中留下一些细胞。如果混合血浆样品(例如在子采样或处理期间)，它会变得混浊，这是由于含细胞的材料和血纤维蛋白的悬浮，其会降低样品完整性。此外，血小板聚集体可以形成，其还可以含有血纤维蛋白和/或白细胞。这些聚集体可以足够大到肉眼可见以及已被称为“白色颗粒物”，这是由于它们的典型的白色，并对以上讨论的不完全凝血提出类似的问题。因此在样品中细胞的存在可能影响分析物浓度。可以通过细胞活性来减少某些分析物(例如葡萄糖)以及可以通过渗漏或细胞分解来增加其它分析物(例如乳酸脱氢酶、钾或磷酸盐)。
[0017]虽然在血清或血浆管中测得的分析物的浓度一般没有区别，但存在一些例外。使
用肝素的血浆管不适用于肝素分析或基于细胞的测定。肝素锂血浆管不适用于锂分析。对于附加测试或重新测试，血浆可能是不可靠的，这是由于在2
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8℃下的长期储存之后细胞的存在和不溶性血纤维蛋白形成。此外，一些血清或血浆管可能产生分析物水平的不准确的结果，这是由于在管内与前凝血剂或抗凝剂的相互作用。
[0018]还是可取的是，减少需要测试的样品量，特别地在危重患者、接受输血的患者、以及婴儿中，以减少从患者采集的血液的容积。因此最佳的是，利用在单采血管中采取的样品，能够运行所有必要的测试。为了实现此目标，已经使用非常小的样品容积(例如2μL)开发了测试方法，以致通常一个血清或血浆管用于至少21项测试，但可以用于50
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60或甚至70
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80项测试，其取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制备血清样品的凝血组合物，其中，所述凝血组合物包含凝血酶原激活剂和胶体。2.根据权利要求1所述的凝血组合物，其中，所述凝血酶原激活剂源自或可源自蛇毒液。3.根据权利要求1或2所述的凝血组合物，其中，所述凝血酶原激活剂是源自或可源自蛇毒液的A组金属蛋白酶凝血酶原激活剂。4.根据权利要求1至3中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血酶原激活剂源自或可源自锯鳞蝰的毒液。5.根据权利要求1至4中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血酶原激活剂是Ecarin。6.根据权利要求1至5中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血酶原激活剂包含SEQ ID NO:1、53、54、55、56或57中阐述的氨基酸序列。7.根据权利要求1至6中任一项所述的凝血组合物，其中，所述胶体是明胶类胶体。8.根据权利要求1至7中任一项所述的凝血组合物，其中，所述胶体是在盐水中的4％w/v琥珀酰明胶。9.根据权利要求1至6中任一项所述的凝血组合物，其中，所述胶体是白蛋白类胶体。10.根据权利要求1至9中任一项所述的凝血组合物，进一步包含表面活性剂。11.根据权利要求10所述的凝血组合物，其中，所述表面活性剂是亲水性表面活性剂。12.根据权利要求1至11中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血组合物包含约1:100至约1:800范围内的凝血酶原激活剂与胶体的比率。13.根据权利要求1至12中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血组合物包含约0.2μg至约10μg凝血酶原激活剂。14.根据权利要求1至13中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血组合物保持稳定和活性持续长达18个月的时期。15.根据权利要求1至14中任一项所述的凝血组合物，其中，当在高于室温下储存时，所述凝血组合物保持稳定和活性持续长达18个月的时期。16.根据权利要求1至15中任一项所述的凝血组合物，其中，在照射杀菌之后，所述凝血组合物保持稳定和活性持续长达18个月的时期。17.根据权利要求1至16中任一项所述的凝血组合物，其中，将所述凝血组合物干燥至容器的内表面上。18.根据权利要求17所述的凝血组合物，其中，在高于室温的温度下发生所述干燥。19.根据权利要求1至18中任一项所述的凝血组合物，其中，所述凝血组合物能够在5分钟或更少时间内从血清分离凝血细胞。20.一种用于制备根据权利要求1至9或12至19中任一项所述的凝血组合物的方法，其中，所述方法包括：(a)提供凝血酶原激活剂和胶体，以及可选的表面活性剂；(b)使所述胶体和可选的所述表面活性剂接触容器的内表面；以及(c)在高于室温的温度下，将所述凝血酶原激活剂干燥至所述容器的内表面由此制备凝血组合物。
21.一种包含根据权利要求1至19中任一项所述的凝血组合物的容器。22.根据权利要求21所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵孔南，保罗，
申请(专利权)人：Q塞拉有限公司，
类型：发明
国别省市：