用于睾丸癌筛查的标志物、探针组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于睾丸癌筛查的标志物、探针组合物及其应用。本发明专利技术使用所述的标志物，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离DNA的检测，并且本发明专利技术所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，降低了侵入性检测造成的危害，所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度，能够实现实时监测。能够实现实时监测。

【技术实现步骤摘要】
用于睾丸癌筛查的标志物、探针组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种用于睾丸癌筛查的甲基化检测标志物、探针组合物及其应用。

技术介绍

[0002]睾丸癌是发生于睾丸的恶性肿瘤，好发于20
‑
35岁的成年男性，占男性肿瘤1％
‑
1.5％。在我国的发病率大约为2/10万人。睾丸癌晚期多伴有多发转移，总体预后较差，可以手术切除原发灶，进行放、化疗等手段，延长寿命。睾丸癌的诊断的检查手段一般通过影像学检查。目前有超声、CT两种检查方法，通常会选用超声检查，因为超声不仅可以了解肿瘤在睾丸内的情况，还能了解是否有肿物转移，而CT检查可以确诊、鉴别睾丸癌，也可以了解是否有淋巴转移等情况。早期发现是提高患者生存率和治愈率的关键，但目前缺乏准确的更为早期的诊断方法。睾丸癌常用的肿瘤标志物有甲胎蛋白、人绒毛膜促性腺激素和乳酸脱氢酶三种。但这些手段在灵敏性和特异性方面参差不齐。目前，DNA甲基化已被证明具有组织特异性,可用于早期癌症检测，并可根据循环肿瘤DNA(ctDNA)甲基化特征追踪到肿瘤原发部位。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供了一种检测睾丸癌的标志物以及探针组合物，可以用于睾丸癌的筛查，所述标志物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，以及癌症患者的预后检测，降低了侵入性检测造成的危害，具有更高的灵敏度和准确性，且能够实现实施监测。
[0004]本专利技术具体技术方案如下：
[0005]1.一种用于检测睾丸癌的标志物，所述标志物对应的基因为CMAHP。
[0006]2.根据项1所述的标志物，其中，所述标志物包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
[0007]3.一种探针组合物，所述探针组合物包含靶向项1或2所述标志物的甲基化状态的探针。
[0008]4.根据项3所述的探针组合物，其中，所述探针组合物包含靶向高甲基化的所述标志物的第一探针组合物和靶向低甲基化的所述标志物的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的标志物区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的标志物区域杂交。
[0009]5.根据项4所述的探针组合物，其中，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
[0010]优选的，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交。
[0011]6.根据项5所述的探针组合物，其中，n和m均是1
‑
10中的任意整数。
[0012]7.根据项5或6所述的探针组合物，其中，第n
‑
1个探针和第n个探针之间有x1个核
苷酸重叠，优选的，x1为0
‑
100中的任意整数；
[0013]优选的，第m
‑
1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选的，x2为0
‑
100中的任意整数。
[0014]8.根据项5
‑
7中任一项所述的探针组合物，其中，所述第一探针组合物包括如SEQ ID NO:2
‑
3中的一种或两种，所述第二探针组合物包括如SEQ ID NO:4
‑
5中的一种或两种。
[0015]9.标志物在制备用于检测睾丸癌的试剂盒中的用途，所述标志物对应的基因为CMAHP。
[0016]10.根据项9所述的用途，其中，所述标志物的核苷酸序列包含如SEQ ID NO:1所示的序列，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
[0017]11.探针组合物在制备用于检测睾丸癌的试剂盒中的用途，所述探针组合物用于靶向睾丸癌的甲基化后的标志物。
[0018]12.根据项11所述的用途，其中，所述探针组合物为项3
‑
8中任一项所述的探针组合物。
[0019]13.一种用于睾丸癌检测的组合物，所述组合物包括用于检测CMAHP的甲基化状态的核酸。
[0020]14.根据项13所述的组合物，其中，所述标志物包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
[0021]15.根据项13或14所述的组合物，其中，所述核酸包括项3
‑
8中任一项所述的探针组合物。
[0022]16.根据项13或14所述的组合物，其中，所述核酸包括：
[0023]引物，所述引物为所述标志物中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。
[0024]17.根据项13
‑
14以及16中任一项所述的组合物，其中，所述核酸还包括：
[0025]探针，所述探针在中等严紧或严紧条件下与所述标志物中的至少15个核苷酸片段杂交，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。
[0026]18.根据项13
‑
14以及16
‑
17中任一项所述的组合物，其中，所述组合物还包括将标志物的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂，优选的，所述用于检测标志物甲基化的核酸还包括：
[0027]优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
[0028]19.一种试剂盒，其包含用于检测项1或2所述的标志物的试剂或者项3
‑
8中任一项所述的探针组合物或者项13
‑
18中任一项所述的组合物。
[0029]20.一种芯片，其包含项1或2所述的标志物或者项3
‑
8中任一项所述的探针组合物或者项13或14所述的组合物。
[0030]专利技术的效果
[0031]本专利技术的专利技术人利用表观基因组和生物信息学技术，通过分析睾丸癌的基因组甲基化数据，寻找到了多个与睾丸癌相关的甲基化基因，并确定了睾丸癌甲基化基因发生甲基化异常的靶序列，并且通过这个甲基化基因的靶序列，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离DNA的检测。
[0032]本专利技术所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，降低了侵入性检
测造成的危害，所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度，能够实现实时监测。
具体实施方式
[0033]下面对本专利技术做以详细说明。虽然显示了本专利技术的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0034]需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测睾丸癌的标志物，所述标志物对应的基因为CMAHP。2.根据权利要求1所述的标志物，其中，所述标志物包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，优选所述标志物为甲基化后的标志物。3.一种探针组合物，所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化状态的探针。4.根据权利要求3所述的探针组合物，其中，所述探针组合物包含靶向高甲基化的所述标志物的第一探针组合物和靶向低甲基化的所述标志物的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的标志物区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的标志物区域杂交；优选的，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的标志物区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；优选的，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的标志物区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；优选的，n和m均是1
‑
10中的任意整数；优选的，第n
‑
1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选的，x1为0
‑
100中的任意整数；优选的，第m
‑
1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选的，x2为0
‑
100中的任意整数；进一步优选的，所述第一探针组合物包括如SEQ ID NO:2
‑
3中的一种或两种，所述第二探针组合物包括如SEQ ID NO:4
...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴宁宁，韩晓亮，连明，王小奇，张聪，魏闯，李永君，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：