【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，尤其涉及一种用于肺癌早期筛查的标志物、探针组合物及其应用。
技术介绍
1、肺癌是全球发病率最高、死亡率最高的癌症之一。晚期转移性肺癌的5年生存率为6％，局部尚未扩散肺癌的5年生存率为59％。肺癌增值进展速度慢，并且不容易发现和诊断。目前对于肺癌的早期诊断方法包括x射线、ct检测、痰细胞学检查等病理诊断方法以及其它生化指标的检测如：癌胚抗原(cea)、鳞状细胞癌抗原(scc)、神经元特异性烯醇化酶(nse)等，目前的筛查方法仅针对高风险患者，但低风险患者病例却正在上升，一般发现都已到中晚期。而dna的甲基化作为重要的表观遗传修饰，已被证明可用于肿瘤的早期发现，并且具有组织特异性，可根据循环肿瘤dna(ctdna)甲基化特征追踪到肿瘤原发部位。为了实现肺癌的早期诊断目标，急需一种针对肺癌早期筛查的分子标志物，以及特异性强、灵敏度高的检测方法。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供了一种检测肺癌早期的标志物以及探针组合物，可以用于肺癌早期的筛查，所述的标志物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，以及癌症患者的预后检测，降低了侵入性检测造成的危害，并且具有更高的灵敏度和准确性，能够实现实时监测。
2、本申请具体技术方案如下：
3、1.一种用于检测肺癌早期的标志物，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：map4k4、pigf、epha6、hla-h、khdrbs2、pou4f1、lrfn5、ush1g、lmtk3、hcn2、bage3和r
4、2.根据项1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如seq idno:1-12所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
5、3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向项1或2所述标志物甲基化的探针。
6、4.根据项3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域杂交；
7、优选地，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
8、优选地，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
9、优选地，n和m均是1-10中的任意整数；
10、优选地，第n-1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选地，x1为0-100中的任意整数；
11、优选地，第m-1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选地，x2为0-100中的任意整数；
12、进一步优选地，所述第一探针组合物包括如seq id no:13-36中的一种或两种，所述第二探针组合物包括如seq id no:37-60中的一种或两种。
13、5.标志物在制备用于检测肺癌早期的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：map4k4、pigf、epha6、hla-h、khdrbs2、pou4f1、lrfn5、ush1g、lmtk3、hcn2、bage3和rs1。
14、6.根据项5所述的用途，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如seq id no:1-12所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物；
15、优选地，所述探针组合物用于靶向肺癌早期的甲基化后的标志物；
16、优选地，所述探针组合物为项3或4所述的探针组合物。
17、7.一种用于肺癌早期检测的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测选自下述标志物对应的基因中的任一种甲基化的核酸：map4k4、pigf、epha6、hla-h、khdrbs2、pou4f1、lrfn5、ush1g、lmtk3、hcn2、bage3和rs1。
18、8.根据项7所述的组合物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如seq idno:1-12所示的一种。
19、9.根据项7或8所述的组合物，其特征在于，所述核酸包括项3或4所述的探针组合物；
20、优选地，所述核酸包括：
21、引物，所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个cpg二核苷酸序列；
22、优选地，所述核酸还包括：
23、探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷酸片段杂交，所述片段包含至少一个cpg二核苷酸序列；
24、优选地，所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂；
25、优选地，所述用于检测标志物的靶序列甲基化的核酸还包括：
26、优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
27、10.一种试剂盒，其特征在于，其包含用于检测项1或2所述的标志物的试剂或者项3或4所述的探针组合物或者项7-9中任一项所述的组合物。
28、11.一种芯片，其特征在于，其包含项1或2所述的标志物或者项3或4所述的探针组合物或者项7或8所述的组合物。
29、专利技术的效果
30、本申请的专利技术人利用表观基因组和生物信息学技术，通过分析肺癌早期的基因组甲基化数据，寻找到了多个与肺癌早期相关的甲基化基因，并确定了肺癌早期甲基化基因发生甲基化异常的靶序列，并且通过这个甲基化基因的靶序列，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离dna的检测。
31、本申请所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，降低了侵入性检测造成的危害，所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度，能够实现实时监测。
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1.一种用于检测肺癌早期的标志物，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：MAP4K4、PIGF、EPHA6、HLA-H、KHDRBS2、POU4F1、LRFN5、USH1G、LMTK3、HCN2、BAGE3和RS1。
2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-12所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化的探针。
4.根据权利要求3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域杂交；
5.标志物在制备用于检测肺癌早期的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：MAP4K4、PIGF、EPHA6、HLA-H、KHDRBS2、POU4F1、LRFN5、USH1G、LMTK3、HCN2、BAGE
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-12所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物；
7.一种用于肺癌早期检测的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测选自下述标志物对应的基因中的任一种甲基化的核酸：MAP4K4、PIGF、EPHA6、HLA-H、KHDRBS2、POU4F1、LRFN5、USH1G、LMTK3、HCN2、BAGE3和RS1。
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-12所示的一种。
9.根据权利要求7或8所述的组合物，其特征在于，所述核酸包括权利要求3或4所述的探针组合物；
10.一种试剂盒，其特征在于，其包含用于检测权利要求1或2所述的标志物的试剂或者权利要求3或4所述的探针组合物或者权利要求7-9中任一项所述的组合物。
11.一种芯片，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组合物或者权利要求7或8所述的组合物。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测肺癌早期的标志物，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：map4k4、pigf、epha6、hla-h、khdrbs2、pou4f1、lrfn5、ush1g、lmtk3、hcn2、bage3和rs1。
2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如seq idno:1-12所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化的探针。
4.根据权利要求3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域杂交；
5.标志物在制备用于检测肺癌早期的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：map4k4、pigf、epha6、hla-h、khdrbs2、pou4f1、lrfn5、ush1g、lmtk3、hcn2、...
【专利技术属性】
技术研发人员：李永君，郭媛媛，吴宁宁，刘栓平，杨亚东，彭勇飞，魏闯，王翠翠，周光朋，吴振，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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