新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用。本发明专利技术发现新霉素可以抑制ISKNV病毒在MFF

【技术实现步骤摘要】
新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用


[0001]本专利技术属于水产养殖病害及防治
更具体地，涉及新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，由虹彩病毒科肿大细胞病毒属的病毒引起的病害，严重威胁着世界范围内的鱼类养殖业的发展。肿大细胞病毒会导致感染的细胞肿胀，大小远远大于正常细胞，对鱼类的致死率高达100％，造成严重的经济损失。传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV)是肿大细胞病毒属的代表种，为直径150nm、横截面呈六角形的病毒，对鳜鱼、大口鲈、鲑鱼等数十种海洋和淡水鱼类的危害极大。ISKNV是肿大细胞病毒属首个完成基因组全序列测定的病毒，基因组全长11132bp，GC含量54.78％，含124个潜在的开放阅读框(open reading frame，ORF)，编码含40～1208个氨基酸的蛋白。
[0003]控制病毒性疾病的手段主要有接种疫苗和使用抗病毒药物两种，目前已有关于抗传染性脾肾坏死病毒的疫苗等的报道。例如，中国专利CN102240399A公开了鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF093蛋白的应用，其发现鳜ISKNV ORF093蛋白对鳜虹彩病毒病有较好的免疫预防作用，由ORF093重组蛋白制备的抗血清对鳜虹彩病毒病也有较好的中和效果，可将ORF093蛋白开发成为抗鳜鱼传染性脾肾坏死病毒病新疫苗或新药物。中国专利CN104195119A则公开了一种抗传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒和疫苗及其制备方法。但目前仍未有能够抑制传染性脾肾坏死病毒感染的药物。
[0004]新霉素是一种氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阳性和阴性菌皆有效，但也未见有关新霉素能抑制传染性脾肾坏死病毒感染的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服目前尚未有能够抗传染性脾肾坏死病毒，治疗传染性脾肾坏死病的药物的缺陷和不足，提供新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供新霉素在制备抗肿大细胞病毒的药物中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供新霉素在制备抗传染性脾肾坏死病毒的药物中的应用。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供新霉素在制备抑制传染性脾肾坏死病毒增殖的药物中的应用。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供新霉素在制备抑制传染性脾肾坏死病毒复制的药物中的应用。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种治疗传染性脾肾坏死病的药物。
[0012]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0013]本专利技术通过实验发现，新霉素可以抑制ISKNV在MFF
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1细胞中的增殖，同时，新霉素是在ISKNV复制阶段抑制其增殖，而不是在通过阻止ISKNV入侵阶段来抑制病毒增殖。此外，新霉素处理还可以显著降低ISKNV感染的鳜鱼的死亡率。因此，本专利技术申请保护新霉素在以下方面的应用：
[0014]本专利技术申请保护新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用。
[0015]优选地，本专利技术申请保护新霉素在制备治疗鳜鱼传染性脾肾坏死病药物中的应用，见实施例3。
[0016]本专利技术还申请保护新霉素在制备抗肿大细胞病毒的药物中的应用。
[0017]本专利技术还申请保护新霉素在制备抗传染性脾肾坏死病毒的药物中的应用。
[0018]优选地，新霉素在药物中的浓度为4mg/L～20mg/L，见实施例3。
[0019]本专利技术还申请保护新霉素在制备抑制传染性脾肾坏死病毒增殖的药物中的应用。
[0020]优选地，其抑制传染性脾肾坏死病毒在MFF
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1细胞中的增殖，见实施例1。
[0021]本专利技术还申请保护新霉素在制备抑制传染性脾肾坏死病毒复制的药物中的应用。
[0022]优选地，新霉素的浓度为10μM，见实施例1和2。
[0023]本专利技术还提供一种治疗传染性脾肾坏死病的药物，其含有新霉素及其可接受的药物载体。
[0024]本专利技术具有以下有益效果：
[0025]本专利技术的实验结果表明，新霉素可以抑制ISKNV病毒在MFF
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1细胞中的增殖，抑制ISKNV病毒的复制。此外，新霉素处理还可以显著降低ISKNV感染的鳜鱼的死亡率，在治疗传染性脾肾坏死病方面具有很好的效果。新霉素可用于制备抑制ISKNV增殖和复制的药物，为传染性脾肾坏死病的有效防控提供基础指导，同时为水产养殖中防治肿大细胞病毒感染提供新策略。
附图说明
[0026]图1为新霉素对ISKNV感染的MFF
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1细胞的影响，其中图A为新霉素处理的ISKNV感染的MFF
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1细胞中ISKNV的拷贝数；图B为新霉素处理的ISKNV感染的MFF
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1细胞上清中ISKNV的拷贝数；图C为新霉素对ISKNV的MCP、ORF023和ORF092基因表达的影响。
[0027]图2为新霉素对ISKNV复制的影响，其中图A为新霉素处理细胞的时间策略；图B为对应时间策略下新霉素对ISKNV复制的影响。
[0028]图3为新霉素处理的ISKNV感染的鳜鱼脾脏组织的免疫荧光结果，其中图A为新霉素处理后感染ISKNV的鳜鱼的死亡率统计结果；图B为新霉素对鳜鱼脾脏中ISKNV
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MCP在DNA水平的影响；图C为新霉素对鳜鱼肾脏中ISKNV
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MCP在DNA水平的影响；图D为新霉素对鳜鱼脾脏中ISKNV
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MCP在RNA水平的影响；图E为新霉素对鳜鱼肾脏中ISKNV
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MCP在RNA水平的影响；图F和G为新霉素对鳜鱼脾脏中ISKNV
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MCP蛋白水平的影响。
具体实施方式
[0029]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0030]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0031]实施例1新霉素对ISKNV感染的MFF
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1细胞的影响
[0032](1)药物处理：接种MFF
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1细胞，待细胞粘附并生长至80％汇合后，以MOI＝4的ISKNV感染MFF
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1细胞2h，随后去除病毒液，加入终浓度为10uM的新霉素处理72h后收取细胞及细胞上清液；
[0033](2)DNA提取：分别取细胞及细胞上清液，每250μL的样品液加入4μL的OB蛋白酶、4μL的Linear Acrylamide和250μL的Buffer BL，振荡混匀后65℃孵育10min；随后加入260μL无水乙醇，振本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.新霉素在制备治疗传染性脾肾坏死病药物中的应用。2.新霉素在制备抗肿大细胞病毒的药物中的应用。3.新霉素在制备抗传染性脾肾坏死病毒的药物中的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，新霉素在药物中的浓度为4mg/L～20mg/L。5.新霉素在制备抑制传染性脾肾坏死病毒增殖的药物中的应用。6.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓鹏，邓恒为，何建国，翁少萍，李烨雨，李金伶，何建辉，
申请(专利权)人：南方海洋科学与工程广东省实验室珠海，
类型：发明
国别省市：