【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程。更具体地，涉及一种溶杆菌apec-like结构域蛋白及其在细菌结合中的应用。
技术介绍
1、溶杆菌是溶杆菌属(lysobacter)的微生物，常习居于植物、农作物土壤和淡水中，同时也在一些极端生境中存在，如升流式厌氧污泥层。溶杆菌属的细菌对包括其他细菌、真菌、单细胞藻类和线虫等微生物具有拮抗活性，因为溶杆菌能分泌多种胞外水解酶裂解微生物，多作为生防菌在植物病害防治中有重要应用。此外，溶杆菌属细菌被认为是产生新型抗生素的重要资源库，其产生的次生代谢产物在拮抗植物病原物和生物防治中有重要作用，目前鲜有溶杆菌结构域蛋白与其他细菌相互作用的相关研究报道。
2、apec(apextrin c-terminal)是一类约有200个氨基酸的新型蛋白质结构域，含有apec结构域的蛋白称为acp(apec containing protein)。现有技术最初发现该蛋白参与海胆(heliocidaris erythrogramma)的胚胎发育，称为顶端胞外基质蛋白(apextrin)。随后发现acp也参与了珊瑚(acropora millepora)的胚胎发育和幼虫定居。而在贻贝(mytilusgalloprovincialis)中发现的acps(apelb和apelp)，其表达量在囊胚和滋养体阶段最高。此外，acp作为一种模式识别蛋白，参与了低等无脊椎动物的先天性免疫，通过特异性识别肽聚糖介导细胞内的细菌识别以及nf-κb通路的激活。
3、可见现有公开的acp分子应用于无脊椎动物的功能研究，中国专利
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是克服现有溶杆菌结构域蛋白与其他细菌相互作用的不足，提供一种溶杆菌apec-like结构域蛋白及其在细菌结合中的应用。
2、本专利技术的第一个目的是提供一种溶杆菌细菌结合蛋白的apec-like结构域。
3、本专利技术的第二个目的是提供一种溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like。
4、本专利技术的第三个目的是提供lysoacp-like蛋白的核苷酸。
5、本专利技术的第四个目的是提供溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白的应用。
6、本专利技术的第五个目的是提供一种细菌和/或真菌清除制剂或结合、凝集制剂。
7、本专利技术的第六个目的是提供一种细菌清除试剂盒。
8、本专利技术的第七个目的是提供一种结合和/或凝集细菌和/或真菌的方法。
9、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
10、本专利技术首次在细菌中克隆得到一个溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like，测序结果显示由该基因编码的蛋白质是由n端信号肽和c端apec结构域组成的，并以文昌鱼acp1的apec结构域序列作为输入序列，使用位置特异性迭代blast(psi-blast)，经过分析得知溶杆菌lysoacp-like基因全长1011bp，编码336个氨基酸，其基因dna序列如seq idno.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示，lysoacp-like蛋白具有四个保守半胱氨酸以及三个dxed基序，与无脊椎动物中的apec具有相似特征。
11、本专利技术提供一种溶杆菌细菌结合蛋白的apec-like结构域，其氨基酸序列如seqid no.4所示，编码apec-like结构域的核苷酸序列如seq id no：3所示。
12、本专利技术将lysoacp-like克隆到大肠杆菌表达载体pet32a(+)，构建表达质粒pet32a(+)-lysoacp-like，以硫氧还蛋白为融合表达伴体，该系统使表达的lysoacp-like包涵体在硫氧还蛋白的帮助下通过变复性正确折叠成为可溶的蛋白，制备的重组蛋白编码311个氨基酸，等电点为4.75，分子量为35.14道尔顿。lysoacp-like蛋白可以通过表达载体pet32a(+)在大肠杆菌中表达。研究显示，lysoacp-like重组蛋白能很好地结合细菌和真菌，具有广谱的结合能力；还具有凝集细菌和真菌的能力，可以通过对细菌的结合和凝集作用，用于结合和去除细菌。
13、因此，本专利技术提供溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白的以下应用：
14、以非疾病诊断为目的在结合和/或凝集细菌和/或真菌中的应用。
15、在制备细菌和/或真菌清除剂或结合、凝集剂中的应用。
16、在制备细菌感染性疾病治疗药物中的应用。特别地，溶杆菌产生的小分子活性物质wap-8294a对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)引起的细菌性传染病有显著的治疗效果；而lysobactin可以阻碍细菌肽聚糖的合成来抑制细菌活性，结合本专利技术对细菌和/或真菌清除制剂或结合作用，因此可将其用于制备细菌感染性疾病治疗药物。
17、本专利技术提供一种细菌和/或真菌清除制剂或结合、凝集制剂，含溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白。
18、本专利技术提供一种细菌清除试剂盒，含含溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白。
19、本专利技术还提供一种结合和/或凝集细菌和/或真菌的方法，采用含溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白的试剂对细菌和/或真菌进行处理。
20、进一步优选地，所述细菌为金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、粪场球菌(enterococcus faecium)、大肠杆菌(escherichia coli)、鳗弧菌(vibro anguillarum)、副溶血弧菌(vibro paraheamolyticus)和/或醋酸钙不动杆菌(acinetobactercaloacetius)中的一种或多种；真菌为酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)。
21、本专利技术具有以下有益效果：
22、本专利技术首次克隆得到细菌溶杆菌lysoacp-like蛋白，其中片段apec-like的结构域与无脊椎动物中的apec具有相似特征，保留了四个保守半胱氨酸以及三个dxed基序。研究显示溶杆菌lysoacp-like重组蛋白能很好地结合多种细菌和真菌，具有广谱的结合活性能力，同时还能凝集细菌，能够用于凝集和去除细菌，还有助于机体对病原菌的清除。因此，溶杆菌lysoacp-like重组蛋白能用于结合并清除细菌以及用于细菌感染性疾病治疗药物的制备，为结合并凝集细菌产品和药剂开发提供了新的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种溶杆菌细菌结合蛋白的ApeC-like构域，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。
2.一种溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like，其特征在于，所述LysoACP-like蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种编码权利要求2所述LysoACP-like蛋白的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.权利要求2所述溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like或其重组蛋白在非疾病诊断为目的的结合和/或凝集细菌和/或真菌中的应用。
5.权利要求2所述溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like或其重组蛋白在制备细菌和/或真菌清除剂或结合、凝集剂中的应用。
6.权利要求2所述溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like或其重组蛋白在制备细菌感染性疾病治疗药物中的应用。
7.一种细菌和/或真菌清除制剂或结合、凝集制剂，其特征在于，含溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like或
8.一种细菌清除试剂盒，其特征在于，含溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like或其重组蛋白。
9.一种结合和/或凝集细菌和/或真菌的方法，其特征在于，采用含溶杆菌ApeC-like结构域蛋白LysoACP-like或其重组蛋白的试剂对细菌和/或真菌进行处理。
10.根据权利要求4～6所述应用、或权利要求7所述制剂、或权利要求8所述试剂盒、或权利要求9所述方法，其特征在于，所述细菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter caloacetius)、粪肠球菌(Enterococcus faecium)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鳗弧菌(Vibro anguillarum)或副溶血弧菌(Vibroparaheamolyticus)中的一种或多种；真菌为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
...【技术特征摘要】
1.一种溶杆菌细菌结合蛋白的apec-like构域，其特征在于，其氨基酸序列如seq idno.4所示。
2.一种溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like，其特征在于，所述lysoacp-like蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.一种编码权利要求2所述lysoacp-like蛋白的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.1所示。
4.权利要求2所述溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白在非疾病诊断为目的的结合和/或凝集细菌和/或真菌中的应用。
5.权利要求2所述溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白在制备细菌和/或真菌清除剂或结合、凝集剂中的应用。
6.权利要求2所述溶杆菌apec-like结构域蛋白lysoacp-like或其重组蛋白在制备细菌感染性疾病治疗药物中的应用。
7.一种细菌和/或真菌清除制剂或结合、凝集制剂，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄盛丰，韩广坤，李进，刘书敏，陈生晖，欧阳继华，胡家旋，
申请(专利权)人：南方海洋科学与工程广东省实验室珠海，
类型：发明
国别省市：
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