一种弯曲菌增菌培养液及其制备方法、应用技术

本申请适用于生物技术领域，提供了一种弯曲菌增菌培养液及其制备方法、应用，其中，所述弯曲菌增菌培养液，包括以下重量份数的原料：脑浸液10

【技术实现步骤摘要】
一种弯曲菌增菌培养液及其制备方法、应用


[0001]本申请属于生物
，尤其涉及一种弯曲菌增菌培养液及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是重要的食源性病原菌，在欧美等发达国家，空、结肠弯曲菌 的感染位居食源性病原菌感染的首位，也是导致食物中毒的重要病原。发展中国家，空、结 肠弯曲菌的感染通常是发达国家的100倍。
[0003]空、结肠弯曲菌感染导致的胃肠道疾病称为弯曲菌病。人弯曲菌病的主要 病原是空肠弯曲菌，占80％以上，结肠弯曲菌约占15％
‑
20％，剩下的为空、结 肠弯曲菌以外的其它弯曲菌菌种。除胃肠炎外，空肠弯曲菌的感染可以导致格 林
‑
巴利综合征(GBS)。针对空、结肠弯曲菌的检测和监测是防控感染和诊断 治疗的重点。细菌的分离培养是确定病原菌感染或则污染的金标准。
[0004]空、结肠弯曲菌属于革兰氏阴性菌，体外培养营养条件苛刻，属于苛养菌。目前空、结 肠弯曲菌分离培养的方法分为直接培养和增菌培养。由于体外生长条件苛刻，增菌培养是有 效的培养方法。目前常用的弯曲菌的增菌液主要有Bolton增菌液和Preston增菌液两大类。 这两类增菌液主要是在基础液体培养基(包括肉蛋白胨、白蛋白水解物、酵母提取物等)中 加入促生长的裂解的马血或者羊血和抗生素。两种增菌液的不同主要表现为抗生素种类的差 异：Bolton增菌液的抗生素主要包括头孢哌酮钠、万古霉素、三甲氧苄氨嘧啶和两性霉素B 或者放线菌酮，4种；Preston增菌液主要是将Bolton增菌液中的两种抗生素头孢哌酮钠和万 古霉素更换为多粘菌素B和利福平。目前这两类增菌液都不能很好地促进弯曲菌的增殖同时 抑制弯曲菌外杂菌的生长。应用这两类增菌液增菌后，即使后期再使用选择性固体培养基的 培养，也很难从食品样品尤其是污染的禽肉、奶蛋以及腹泻患者中分离到弯曲菌。

技术实现思路

[0005]本申请实施例的目的在于提供一种弯曲菌增菌培养液，旨在解决现有的增菌液存在不能 很好地促进弯曲菌的增殖同时抑制弯曲菌外杂菌的生长，检出的灵敏度和特异度较低的问题。
[0006]本申请实施例是这样实现的，一种弯曲菌增菌培养液，包括以下重量份数的原料：
[0007]脑浸液10
‑
15份、牛脑心提取物6
‑
7份、示蛋白胨8
‑
12份、葡萄糖1
‑
3份、金属盐6.5
‑
12.5 份、血50份、烟酸0.001
‑
0.002份、去氧胆酸钠0.5
‑
1.5份、吐温0.0001
‑
0.0005份以及抗生素 0.05
‑
0.1份。
[0008]本申请实施例的另一目的在于一种弯曲菌增菌培养液的制备方法，包括：
[0009]按照所述的弯曲菌增菌培养液的配方称取各原料，备用；
[0010]将脑浸液、牛脑心提取物、示蛋白胨、葡萄糖、金属盐、烟酸、去氧胆酸钠以及吐温溶 于去离子水中，经高压处理后，得混合液体；
[0011]在所述混合物中加入血以及抗生素进行均匀混合，制成弯曲菌增菌培养液。
[0012]本申请实施例的另一目的在于一种所述的弯曲菌增菌培养液在弯曲菌检测中的应用。
[0013]本申请实施例提供的弯曲菌增菌培养液，通过科学优化培养液组成成分，得以显著提高 微需氧的弯曲菌的生长速度，在有弯曲菌和杂菌同时污染的样本的检测中，能够获得弯曲菌 的培养和单菌落；本申请提高了弯曲菌嗜营养的“活菌”的运动能力，大大提高了样本中空、 结肠弯曲菌的检出限，由原来的104‑
107CFU，到100CFU；同时，使用过程中仅需少量的增 菌培养液，用量远远少于现有增菌液。
附图说明
[0014]图1是本申请实施例提供的ICDC
‑
CAMPY增菌液基础组合与Bolton增菌液基础组合中 弯曲菌的生长差异曲线图；
[0015]图2是本申请实施例提供的增菌液不同组分对于弯曲菌的生长影响柱状图；
[0016]图3是本申请实施例提供的不同时间ICDC
‑
CAMPY增菌液组合弯曲菌增殖特征曲线图；
[0017]图4是本申请实施例提供的弯曲菌(左)及杂菌(右)活菌打点计数示意图；
[0018]图5是本申请实施例提供的污染的禽肉样品Bolton(Preston)增菌液培养结果示意图；
[0019]图6是本申请实施例提供的污染的禽肉样品ICDC
‑
CAMPY增菌培养结果示意图；
[0020]图7是本申请实施例提供的污染的牛奶样品Bolton(Preston)增菌液培养结果示意图；
[0021]图8是本申请实施例提供的污染的牛奶样品ICDC
‑
CAMPY增菌培养结果示意图；
[0022]图9是本申请实施例提供的污染的蛋清Bolton(Preston)增菌液培养结果示意图；
[0023]图10是本申请实施例提供的污染的蛋清样品ICDC
‑
CAMPY增菌培养结果示意图。
具体实施方式
[0024]为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行 进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定 本申请。
[0025]目前已有的Bolton和Preston两类增菌液需要增菌后与同样含有选择性抗生素的固体培 养基结合使用，可以部分地分离到弯曲菌，但是检出的灵敏度和特异度显著低于本申请实施 例提供的弯曲菌增菌培养液。尤其是对于样品(或者标本)中杂菌的污染较高时，增菌液的 培养基营养成分不足以促进弯曲菌的生长，由于弯曲菌生长缓慢，杂菌增长快、抑制剂不能 很好抑制杂菌，导致培养检出率低或者不能检出弯曲菌。应用上述方法，我国弯曲菌的食品 安全的监测以及感染性腹泻的病原监测中，大部分地区食品样品以及腹泻患者的标本中检测 不到弯曲菌。
[0026]鉴于上述现状，本申请实施例提供了一种新的高效率的空、结肠弯曲菌增菌液以及增菌 培养方法，显著提高我国样品及标本中弯曲菌的检出率。
[0027]具体地，本申请实施例提供了一种弯曲菌增菌培养液(命名为ICDC
‑
CAMPY)，包括
以 下重量份数的原料：
[0028]脑浸液10
‑
15份、牛脑心提取物6
‑
7份、示蛋白胨8
‑
12份、葡萄糖1
‑
3份、金属盐6.5
‑
12.5 份、血50份、烟酸0.001
‑
0.002份、去氧胆酸钠0.5
‑
1.5份、吐温0.0001
‑
0.0005份以及抗生素 0.05
‑
0.1份。
[0029]本申请ICDC
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种弯曲菌增菌培养液，其特征在于，包括以下重量份数的原料：脑浸液10
‑
15份、牛脑心提取物6
‑
7份、示蛋白胨8
‑
12份、葡萄糖1
‑
3份、金属盐6.5
‑
12.5份、血50份、烟酸0.001
‑
0.002份、去氧胆酸钠0.5
‑
1.5份、吐温0.0001
‑
0.0005份以及抗生素0.05
‑
0.1份。2.根据权利要求1所述的弯曲菌增菌培养液，其特征在于，所述金属盐包括以下重量份数的原料：氯化钠4
‑
6份、磷酸氢二钠2
‑
5份、丙酮酸钠0.25
‑
0.5份、焦亚硫酸钠0.25
‑
0.5份、硫酸亚铁0.15
‑
0.3份。3.根据权利要求1所述的弯曲菌增菌培养液，其特征在于，所述血为去纤维羊血、兔血、胎牛血清中的一种。4.根据权利要求1所述的弯曲菌增菌培养液，其特征在于，所述抗生素包括以下重量份数的原料：万古霉素0.01
‑
0.02份、两性霉素B 0.01
‑
0.015份，利福平0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张茂俊，顾一心，葛安山，杜庆宝，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：