一种基于基因组DNA标准品测定绝对端粒长度的PCR方法技术

本发明专利技术提供了一种基于基因组DNA标准品测定绝对端粒长度的PCR方法，具体来说包括：基因组DNA标准品的制备、基因组DNA样本的制备、端粒和单拷贝基因36B4引物的设计和合成、绝对定量PCR、结果分析，属于分子生物技术领域。本发明专利技术通过选取编码酸性核糖体磷酸蛋白PO的36B4基因为单拷贝基因，作为数据归一化的参考；通过系列稀释的基因组DNA模板验证扩增效率；通过qPCR熔解曲线分析引物扩增的特异性；通过凝胶电泳分析PCR产物的特异性。本发明专利技术使用基因组DNA作为标准品，最大限度地保证了标准品与目标样本扩增效率的一致性，具有准确、高效、低成本和高通量的优点，为端粒长度测定提供了一个简单实用的方法。个简单实用的方法。个简单实用的方法。

【技术实现步骤摘要】
70kb的1301细胞基因组DNA作为标准品，设计并合成端粒和单拷贝基因36B4的特异性引物，通过绝对定量PCR，测定样本的绝对端粒长度。
[0007]上述方法具体包括如下步骤：(1)基因组DNA标准品的制备：1301细胞复苏体外扩增培养至对数增殖期，采用高分子量基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，使用Nanodrop超微量分光光度计测量其纯度，使用Qubit荧光计测量其浓度；(2)基因组DNA样本的制备：取适量全血或细胞，用基因组DNA提取试剂盒提取基因组 DNA，使用Nanodrop超微量分光光度计测量其纯度，使用Qubit荧光计测量其浓度；(3)端粒和单拷贝基因36B4引物的设计和合成：设计并合成端粒和单拷贝基因36B4的引物；(4)绝对定量PCR：PCR反应分为两部分，第一部分为端粒qPCR反应，使用基因组DNA 标准品和端粒引物，检测基因组DNA样本中的端粒总长度，第二部分为单拷贝基因36B4 qPCR反应，使用基因组DNA标准品和36B4引物，检测基因组样本中单拷贝基因的拷贝数，每次反应都包含标准曲线；(5)结果分析：使用仪器自带软件，以系列稀释的标准品CT值对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
~3.23
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106kb，10倍梯度稀释5个浓度，制作标准曲线。8.根据权利要求书2所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：白玉杰，张艳，张晓娟，孙海星，王建辉，林思妮，吴东颖，
申请(专利权)人：山东荆卫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：