一种胶原蛋白冻干纤维及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物药物制剂领域，涉及一种胶原蛋白冻干纤维及其制备方法和应用。具体而言，本发明专利技术提供了一种胶原蛋白冻干纤维的制备方法，其包括如下步骤：(1)使用pH调节剂调节胶原蛋白原液的pH值至5

【技术实现步骤摘要】
一种胶原蛋白冻干纤维及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物药物制剂领域，具体涉及一种胶原蛋白冻干纤维及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是生物高分子，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，在成人体内含有大约30％胶原蛋白，其存在有28种类型，其中III型胶原蛋白的含量占人体总蛋白质的10％左右，其形态在体内呈细微的原纤维网状，广泛分布在具有伸展性的组织中，如皮肤、血管及内脏等疏松结缔组织。在创伤修复中，如果III型胶原蛋白比例高，则皮肤组织也会更加细腻柔滑，同时III型胶原蛋白在细胞粘附等生理过程中也发挥着重要的作用。此外，III型胶原蛋白分子有较大的亲和力、较弱的抗原性，具有良好的生物相容性和降解安全性，现已被广泛应用于医药领域。
[0003]人体皮肤覆盖于体表，总面积约为1.5
‑
2.0m2，厚度为1
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4mm，是由表皮层、真皮层和皮下组织构成。随着年龄的增加，人体皮肤中的胶原蛋白含量会逐渐减少，同时胶原蛋白的合成能力也在下降，皮肤逐渐失去弹性和光泽，不再柔软，并出现色斑、皱纹，发生老化。由于胶原蛋白是皮肤的主要蛋白质成分，使用胶原蛋白及其水解产物制作而成的护肤品可以有效的减少皮肤皱纹，保湿补水，备受科研学者、制造商青睐。另一方面，随着生活水平的提高，人们对化妆品具有的保湿和美白功能日益关注，天然保湿剂成为国内护肤品的研究热点。然而，现在市面上大多胶原蛋白护肤品都是使用动物类胶原，生物安全性较低，易诱发免疫反应。
[0004]申请号为CN201811438582.6、专利技术名称为“多肽、其生产方法和用途”的专利申请记载了本专利技术的专利技术人在之前研究并生产的重组人源III型胶原蛋白原液，该蛋白和人类皮肤中的III型胶原蛋白序列高度一致，使用时不存在诱发生物免疫的问题，安全性更高。目前该重组人源III型胶原蛋白的用途在申请号为CN202110864279.8、CN202110881466.7、CN202110981458.X和CN202110960230.2四项专利申请中已有记载。为了进一步更好的利用该重组人源III型胶原蛋白，拓宽其应用领域和场景，急需开发一种能够使该蛋白稳定储存和运输的剂型。
[0005]众所周知，蛋白质在温度过高时会变性失活，而且蛋白质溶液养分丰富，容易滋养细菌，导致酸败，所以一般含有蛋白质的制剂都需要低温储藏，且需要添加适当的防腐剂。
[0006]真空冷冻干燥技术可以解决蛋白制剂的储藏和运输问题。真空冷冻干燥技术又称为冻干，此法将需要干燥的制品置于低温下使其所含的水分冻结，然后放在真空环境下干燥，让水分由固体状态直接升华为水蒸气并从制品中排出而使制品干燥。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变，有效保护了许多热敏性药物生物制品有效成份的稳定性。其次，冻干制品在干燥后形态疏松、颜色基本不发生改变，加水后能够快速溶解并恢复原有水溶液的理化特性和生物活性。此外，制品经过冻干后水分含量非常低，使制品的稳定性提高，受污染的机会减小，这不仅方便了运输还延长了制品保存期限。

技术实现思路

[0007]专利技术要解决的问题
[0008]本专利技术中所涉及的重组人源III型胶原蛋白为申请号CN201811438582.6、专利技术名称为“多肽、其生产方法和用途”的专利申请所记载，其自身理化性质不够稳定，过高的温度容易使其变性失活，且极易染菌导致酸败失效。目前并未有关于有效储藏和运输该蛋白的稳定剂型。
[0009]对此，本专利技术拟提供一种胶原蛋白冻干纤维，并提供其制备方法和用途，以满足相关储存和运输要求。通过对冻干程序参数进行优化，极大提高冻干制剂的性状，保证冻干制剂的稳定性。
[0010]用于解决问题的方案
[0011][1]、一种胶原蛋白冻干纤维的制备方法，其包括如下步骤：(1)使用pH调节剂调节胶原蛋白原液的pH值至5
‑
9；(2)冷冻干燥；其中，所述冷冻干燥的程序包括预冻、升华干燥和解析干燥。
[0012][2]、根据[1]所述的制备方法，其特征在于，每1mL所述胶原蛋白原液中含有1
‑
2mg的胶原蛋白；优选地，所述胶原蛋白包含以SEQ ID NO.1所示的序列的n个重复和任选的以SEQ ID NO.2所示的序列，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；更优选地，所述胶原蛋白包含以SEQ ID NO.3所示的序列、或保留SEQ ID NO.3的氨基酸序列的细胞黏附效果并与SEQ ID NO.3的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列、或保留SEQ ID NO.3的氨基酸序列的细胞黏附效果并在SEQ ID NO.3的氨基酸序列中添加、取代或缺失1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列、或由核苷酸序列编码的保留SEQ ID NO.3的氨基酸序列的细胞黏附效果的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码SEQ ID NO.3的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
[0013][3]、根据[1]或[2]所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的程序中的预冻、升华干燥和解析干燥的具体操作条件如下：
[0014]程序温度/℃升温时间/min保持时间/min真空度/Pa预冻
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50～
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2020～6060～300 升华干燥
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40～1020～60300～15000～30解析干燥
‑
20～1060～30060～6000～30
[0015]。
[0016][4]、根据[1]至[3]中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述pH调节剂为磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠。
[0017][5]、一种胶原蛋白冻干纤维，其通过[1]至[4]中任一项所述的制备方法制得。
[0018][6]、一种基于胶原蛋白冻干纤维的溶液，其包括根据[5]所述的胶原蛋白冻干纤维和溶剂；优选地，所述溶剂与所述胶原蛋白冻干纤维的用量比为1mL:(10
‑
20mg)；优选地，所述溶剂为生理盐水。
[0019][7]、根据[6]所述的基于胶原蛋白冻干纤维的溶液，其特征在于，所述溶液中还包括保湿剂；优选的，所述保湿剂为乳酸。
[0020][8]、根据[6]或[7]所述的基于胶原蛋白冻干纤维的溶液的制备方法，其包括如下
步骤：采用溶剂对胶原蛋白冻干纤维进行复溶，不添加或添加所述保湿剂，形成溶液。
[0021][9]、根据[5]所述的胶原蛋白冻干纤维、根据[6]和/或[7]所述的基于胶原蛋白冻干纤维的溶液在制备用于抗皮肤老化的产品中的用途。
[0022][10]、根据[9]所述的用途，其特征在于，所述抗皮肤老化包括提高皮肤含水量、改善皮肤整体色度和/或改善皮肤组织结构；优选地，所述提高皮肤含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶原蛋白冻干纤维的制备方法，其包括如下步骤：(1)使用pH调节剂调节胶原蛋白原液的pH值至5
‑
9；(2)冷冻干燥；其中，所述冷冻干燥的程序包括预冻、升华干燥和解析干燥。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，每1mL所述胶原蛋白原液中含有1
‑
2mg的胶原蛋白；优选地，所述胶原蛋白包含以SEQ ID NO.1所示的序列的n个重复和任选的以SEQ ID NO.2所示的序列，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；更优选地，所述胶原蛋白包含以SEQ ID NO.3所示的序列、或保留SEQ ID NO.3的氨基酸序列的细胞黏附效果并与SEQ ID NO.3的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列、或保留SEQ ID NO.3的氨基酸序列的细胞黏附效果并在SEQ ID NO.3的氨基酸序列中添加、取代或缺失1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列、或由核苷酸序列编码的保留SEQ ID NO.3的氨基酸序列的细胞黏附效果的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码SEQ ID NO.3的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的程序中的预冻、升华干燥和解析干燥的具体操作条件如下：程序温度/℃升温时间/min保持时间/min真空度/Pa预冻
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50～
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【专利技术属性】
技术研发人员：张国梁，何振瑞，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：