本发明专利技术公开了一种用于除皱的生物细胞肽组合物及其制备方法，本发明专利技术由胶原蛋白肽与大豆卵磷脂形成脂质体，以月桂基葡糖苷作为脂质体双层膜之间的边缘激活剂，由大豆卵磷脂诱导脂质体的高径向曲率，从而增加脂质体的形变能力，增加和胶原蛋白肽的结合能力，进而提高结构的完整性，提升了胶原蛋白肽的抗氧化性。此外，本发明专利技术在酶解过程中使用负载了枯草杆菌蛋白酶的载酶纳米二氧化硅将鳕鱼胶原蛋白酶解为胶原蛋白肽，载酶纳米二氧化硅表面的有机分子链含有供酶自由旋转移动的醚键，能够提高固定化酶的水解效率；并且载酶纳米二氧化硅具有磁性，可以在酶解结束后通过磁场收集，无需灭活，为酶的二次利用创造了条件。为酶的二次利用创造了条件。
【技术实现步骤摘要】
用于除皱的生物细胞肽组合物及其制备方法
[0001]本专利技术涉及多肽的制备
，尤其涉及一种用于除皱的生物细胞肽组合物及其制备方法。
技术介绍
[0002]胶原蛋白是构成结缔组织细胞外基质的主要结构蛋白，由于其高度的生物相容性和生物可降解性，使其具有良好的细胞适应能力，广泛应用于组织再生、制药、食品和化妆品等生物行业。胶原蛋白与其他类型的生物材料相比，其免疫原性相对较低；因此，为了进一步在生物技术中利用胶原蛋白，它常经蛋白质酶解工序加工成胶原蛋白肽。胶原蛋白肽分子量低，对水的溶解度好，具有愈合伤口、骨再生、抗皮肤老化等多种功能。胶原蛋白酶解后成为小分子量的多肽，与高分子量的天然胶原蛋白相比，更容易渗透到皮肤深层。它们在成纤维细胞生长、胶原蛋白表达和表皮强胶原纤维形成中可以发挥重要作用。此外，它们是通过增加角质层的含水量来改善皮肤功能的关键分子成分。因此，胶原蛋白肽被广泛应用于化妆品中，以维持皮肤稳态和修复受损皮肤层，达到去皱的效果。通过酶解从深海鱼类胶原蛋白中提取的胶原蛋白肽，其分子量比从陆生动物中提取的胶原蛋白肽要低，更有利于皮肤的吸收及利用。
[0003]专利CN 202110938911.9公开了一种高纯度小分子鱼皮胶原蛋白肽的制备方法以及鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂，以鱼皮为原料，将鱼皮经预处理、胃蛋白酶提取胶原蛋白、调节等电点、双水相萃取纯化胶原蛋白、碱性蛋白酶酶解成胶原蛋白肽、葡聚糖凝胶分离得到小分子鱼皮胶原蛋白肽。专利CN 201410274645.4提供了一种酶法制备具有促进伤口愈合活性的海洋胶原蛋白肽的方法，由酶法结合膜分离技术从海鲈鱼加工副产物中制备具有伤口愈合作用的高活性的生物活性。上述专利都没有对酶的回收利用进行优化改进，实际生产中可能出现酶的使用率低下，当酶的采购价格较高时会增加胶原蛋白肽的生产成本等技术问题。
技术实现思路
[0004]有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所解决的技术问题是：(1)制备一种用于除皱的生物细胞肽组合物，所述用于除皱的生物细胞肽组合物结构稳定，具有良好的抗氧化能力；(2)制备一种载酶粒子，为酶的回收创造条件，解决酶利用率较低的技术问题；(3)解决载酶粒子中酶固定化后运动受阻，难以与底物充分接触进行酶解反应的技术问题。
[0005]脂质体具有无毒、可生物降解和生物相容性佳的优先，能够将有效成分输送到体内，广泛应用于制药和化妆品的生产之中。然而专利技术人发现，脂质体不易溶于水，其在水中的低稳定性通过促进磷脂的氧化和水解降低了结构的完整性，导致通过皮肤层的渗透性低。为了解决这一技术问题，专利技术人使用胶原蛋白肽粉、大豆卵磷脂、月桂基葡糖苷制备了一种用于除皱的生物细胞肽组合物；所述生物细胞肽组合物由胶原蛋白肽与大豆卵磷脂形成脂质体，以月桂基葡糖苷作为脂质体双层膜之间的边缘激活剂，由大豆卵磷脂诱导脂质
体的高径向曲率，从而增加脂质体的形变能力，增加和胶原蛋白肽的结合能力，进而提高结构的完整性，提升了胶原蛋白肽的抗氧化性。
[0006]一种用于除皱的生物细胞肽组合物的制备方法，包括下述步骤：通过载酶纳米二氧化硅对鳕鱼胶原蛋白进行酶解，离心取上清液冷冻干燥得到胶原蛋白粉；将胶原蛋白粉、大豆卵磷脂、月桂基葡糖苷溶于乙醇中摇匀，去除乙醇，得到脂质体；将脂质体经超声处理分散于水中，冷冻干燥，得到所述用于除皱的生物细胞肽组合物；
[0007]所述载酶纳米二氧化硅为枯草杆菌蛋白酶在戊二醛活化下与纳米二氧化硅表面有机分子链端的氨基结合制备得到；所述有机分子链含有供酶自由旋转移动的醚键。
[0008]优选的，一种用于除皱的生物细胞肽组合物的制备方法，包括下述步骤：
[0009](1)使用氢氧化钠水溶液对鳕鱼皮进行碱处理；将碱处理产物置于酒石酸水溶液中，沉淀、过滤得滤液、冷冻干燥，得到鳕鱼胶原蛋白粉；
[0010](2)将纳米四氧化三铁、硅酸钠、甲苯经分散于水中，形成混合乳液；向所述混合乳液中加入硝酸水溶液，进行第一级反应；第一级反应结束后继续加入乙醇，进行第二级反应，第二级反应结束后经过滤得滤饼、醇洗、水洗、干燥，得到多孔纳米二氧化硅；
[0011](3)无氧条件下，将所述多孔纳米二氧化硅和环氧丁基三甲氧基硅烷分散于乙醇，进行硅烷化反应，反应结束后过滤得滤饼、醇洗、水洗、干燥，得到硅烷化多孔纳米二氧化硅；将所述硅烷化多孔纳米二氧化硅和聚醚胺分散于水中，进行脱氢偶联反应，反应结束后过滤得滤饼、醇洗、水洗、干燥，得到氨基化多孔纳米二氧化硅；
[0012](4)将所述氨基化多孔纳米二氧化硅和戊二醛分散于磷酸盐缓冲液中，进行活化反应，活化反应结束后经过滤得滤饼、磷酸盐缓冲液洗涤，得到活化多孔纳米二氧化硅；将所述活化多孔纳米二氧化硅再次分散于磷酸盐缓冲液中，继续加入枯草杆菌蛋白酶，进行固定化反应，反应产物经过滤得滤饼、磷酸盐缓冲液洗涤、冷冻干燥，得到载酶纳米二氧化硅；
[0013](5)将所述鳕鱼胶原蛋白粉分散于水，加入所述载酶纳米二氧化硅并进行水解，水解产物经离心得上清液、冷冻干燥，得到胶原蛋白肽粉；
[0014](6)将所述胶原蛋白肽粉、大豆卵磷脂、月桂基葡糖苷溶于乙醇中摇匀，去除乙醇，得到脂质体；将脂质体经超声处理分散于水中，冷冻干燥，得到所述用于除皱的生物细胞肽组合物。
[0015]鳕鱼胶原蛋白水解为胶原蛋白肽的过程需要酶的参与，传统的水解工艺一般直接加入酶，水解完成后将酶经过灭活后分离。所述加工方式中酶的利用是一次性的，使用率低下，当酶的采购价格较高时会增加胶原蛋白肽的生产成本。因此，将酶负载于具有磁性的载体制成可回收利用的固定化酶是一种可行的途径。针对这一技术问题，专利技术人将具有磁性的纳米四氧化三铁与二氧化硅结合，制备了一种具有磁性的多孔纳米二氧化硅；所述多孔纳米二氧化硅比表面积大，能够提高酶的负载效率；酶和多孔纳米二氧化硅结合后形成的载酶颗粒可以在酶解结束后通过磁场收集，无需灭活，为酶的二次利用创造了条件。
[0016]在实际的使用中专利技术人观察到，相比于游离态的酶，固定化酶的水解效率较低，最终多肽得率不及游离态酶。产生这种现象的原因可能在于，将酶负载于载体后，由于表面拥挤受到空间阻碍或无法自由旋转，酶难以和底物充分接触并进行反应。为了解决这一技术问题，专利技术人做出改进，对多孔纳米二氧化硅粒子进行烷硅化及脱氢偶联处理，在二氧化硅
表面引入有机分子链，所述有机分子链含有醚键，醚键内聚能低，并易旋转，可以为酶的运动提供合适的空间条件；同时有机分子链的链端为氨基，可在戊二醛活化下与酶反应并连结，达到酶的固定化。采用上述方法制备的载酶纳米二氧化硅中，酶通过能够灵活运动旋转的长分子链与二氧化硅颗粒相连，固定的同时大大增加了与底物的接触能力，从而提升了酶解的效率。
[0017]进一步优选的，一种用于除皱的生物细胞肽组合物的制备方法，包括下述步骤，以重量份计：
[0018]S1在0～4℃温度下，使用65～80份浓度为3.5～8wt％的氢氧化钠水溶液对7.5～20份鳕鱼皮进行碱处理；将碱处理产物置于45～6本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于除皱的生物细胞肽组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：通过载酶纳米二氧化硅对鳕鱼胶原蛋白进行酶解，离心取上清液冷冻干燥得到胶原蛋白粉；将胶原蛋白粉、大豆卵磷脂、月桂基葡糖苷溶于乙醇中摇匀，去除乙醇，得到脂质体；将脂质体经超声处理分散于水中，冷冻干燥，得到所述用于除皱的生物细胞肽组合物；所述载酶纳米二氧化硅为枯草杆菌蛋白酶在戊二醛活化下与纳米二氧化硅表面有机分子链端的氨基结合制备得到；所述有机分子链含有供酶自由旋转移动的醚键。2.根据权利要求1所述的一种用于除皱的生物细胞肽组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)使用氢氧化钠水溶液对鳕鱼皮进行碱处理；将碱处理产物置于酒石酸水溶液中，沉淀、过滤得滤液、冷冻干燥，得到鳕鱼胶原蛋白粉；(2)将纳米四氧化三铁、硅酸钠、甲苯经分散于水中，形成混合乳液；向所述混合乳液中加入硝酸水溶液，进行第一级反应；第一级反应结束后继续加入乙醇，进行第二级反应，第二级反应结束后经过滤得滤饼、醇洗、水洗、干燥，得到多孔纳米二氧化硅；(3)无氧条件下，将所述多孔纳米二氧化硅和环氧丁基三甲氧基硅烷分散于乙醇，进行硅烷化反应，反应结束后过滤得滤饼、醇洗、水洗、干燥，得到硅烷化多孔纳米二氧化硅；将所述硅烷化多孔纳米二氧化硅和聚醚胺分散于水中，进行脱氢偶联反应，反应结束后过滤得滤饼、醇洗、水洗、干燥，得到氨基化多孔纳米二氧化硅；(4)将所述氨基化多孔纳米二氧化硅和戊二醛分散于磷酸盐缓冲液中，进行活化反应，活化反应结束后经过滤得滤饼、磷酸盐缓冲液洗涤，得到活化多孔纳米二氧化硅；将所述活化多孔纳米二氧化硅再次分散于磷酸盐缓冲液中，继续加入枯草杆菌蛋白酶，进行固定化反应，反应产物经过滤得滤饼、磷酸盐缓冲液洗涤、冷冻干燥，得到载酶纳米二氧化硅；(5)将所述鳕鱼胶原蛋白粉分散于水，加入所述载酶纳米二氧化硅并进行水解，水解产物经离心得上清液、冷冻干燥，得到胶原蛋白肽粉；(6)将所述胶原蛋白肽粉、大豆卵磷脂、月桂基葡糖苷溶于乙醇中摇匀，去除乙醇，得到脂质体；将脂质体经超声处理分散于水中，冷冻干燥，得到所述用于除皱的生物细胞肽组合物。3.根据权利要求2所述的一种用于除皱的生物细胞肽组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤，以重量份计：S1在0～4℃温度下，使用65～80份浓度为3.5～8wt％的氢氧化钠水溶液对7.5～20份鳕鱼皮进行碱处理；将碱处理产物置于45～60份浓度为0.15～0.35wt％的酒石酸水溶液中，沉淀、过滤得滤液、冷冻干燥，得到鳕鱼胶原蛋白粉；S2将1.75～3份纳米四氧化三铁、4～6份硅酸钠、6～10份甲苯经分散于16～20份水中，形成混合乳液；向所述混合乳液中加入10～16份浓度为1～1.5mol/L的硝酸水溶液，进行第一级反应；第一级反应结束后继续加入7.5～12份乙醇，进行第二级反应，第二级反应结束后经过滤得滤饼、醇洗、水...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁云凤，王秀萍，
申请(专利权)人：丁云凤，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。