一种细胞保存液及其在保存CIK细胞中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种细胞保存液，包括基础培养基和添加在培养基中的以下成分：磷酸二氢钾、右旋糖酐

【技术实现步骤摘要】
一种细胞保存液及其在保存CIK细胞中的应用


[0001]本专利技术涉及一种细胞保存液，尤其涉及一种细胞保存液及其在保存CIK细胞中的应用。

技术介绍

[0002]随着恶性肿瘤对人类生存健康的威胁日益严重，各种治疗的新药物、新方法层出不穷，其中免疫细胞治疗成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。肿瘤的过继性细胞免疫治疗是指向肿瘤患者转输具有抗肿瘤活性的免疫细胞(特异性和非特异性的)直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀肿瘤细胞，可作为手术、放疗、化疗的补充，以提高疗效和改善患者的生存质量，免疫细胞的质量影响着治疗的效果。
[0003]CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine
‑
Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，具有一定的免疫特性，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。CIK细胞增殖能力强，增殖能力强，主要效用细胞CD3
+
CD56
+
可增殖1000倍。杀伤活力强，远优于传统的LAK细胞和细胞因子γ干扰素、白细胞介素2等。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。
[0004]在肿瘤的过继细胞免疫治疗过程中，对CIK细胞的需求量较大，体外制备的CIK细胞需要经过扩增以收集自足够数量的细胞。通常采用自体外周血或者脐血制备CIK，但是CIK细胞培养周期较长，易污染，培养成本较高。因此培养收集的CIK细胞的保存较为重要，不仅要求成分安全，易于操作，而且经保存后的细胞的活性要不受影响。因此有必要提供一种细胞保存液，实现CIK细胞在体外的保存，降低患者的治疗成本。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种细胞保存液，成分安全，不影响CIK细胞活性，有效降低细胞的保存成本
[0006]本专利技术的目的之二在于细胞保存液在保存CIK细胞的应用。
[0007]本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：
[0008]一种细胞保存液，包括基础培养基和添加在培养基中的以下成分：磷酸二氢钾、右旋糖酐
‑
40、透明质酸钠、肉苁蓉多肽、沙蒿多糖、大豆磷脂、IL
‑
2。
[0009]优选地，各成分在培养基的终浓度为：磷酸二氢钾10
‑
15mg/mL、右旋糖酐
‑
40 5
‑
10mg/mL、透明质酸钠8
‑
12μg/mL、肉苁蓉多肽15
‑
20μg/mL、沙蒿多糖0.5
‑
1mg/mL、大豆磷脂1
‑
5mg/mL、IL
‑
2 200
‑
300IU/mL。
[0010]优选地，各成分在培养基的终浓度为：磷酸二氢钾12mg/mL、右旋糖酐
‑
40 8mg/mL、透明质酸钠10μg/mL、肉苁蓉多肽18μg/mL、沙蒿多糖0.7mg/mL、大豆磷脂3mg/mL、IL
‑
2 250IU/mL。
[0011]优选地，所述肉苁蓉多肽的分子量为：500
‑
1000Da。
[0012]优选地，所述基础培养基为RPMI
‑
1640培养基。
[0013]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：
[0014]上述保存液的应用，在保存CIK细胞中的应用。
[0015]优选地，保存温度为2
‑
6℃。
[0016]优选地，所述CIK细胞在保存液中的密度为1
‑6×
107个/mL。
[0017]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种细胞保存液，成分安全稳定，通过磷酸二氢钾、右旋糖酐
‑
40、透明质酸钠、肉苁蓉多肽、沙蒿多糖、大豆磷脂、IL
‑
2等成分的协同作用，为CIK细胞提供稳定的外环境，帮助CIK细胞在2
‑
6℃条件下保持活性，并且在保存48h后CIK细胞活率还在90％以上，经保存后的CIK细胞仍具有较好的杀伤活性，充分满足临床及科研的使用需求，进一步降低成本，为患者减轻治疗负担。本专利技术还提供了一种上述保存液在CIK细胞保存中的应用方法，操作简便，易于实现，有助于商业化推广应用。
附图说明
[0018]图1为本专利技术实施例1，对比例1至对比例7中CIK细胞在保存60h后的杀伤活性。
具体实施方式
[0019]下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0020]实施例1
[0021]一种细胞保存液，包括RPMI
‑
1640培养基和添加在培养基中的以下成分：磷酸二氢钾、右旋糖酐
‑
40、透明质酸钠、肉苁蓉多肽、沙蒿多糖、大豆磷脂、IL
‑
2；各成分在培养基的终浓度为：磷酸二氢钾12mg/mL、右旋糖酐
‑
40 8mg/mL、透明质酸钠10μg/mL、分子量为500
‑
1000Da的肉苁蓉多肽18μg/mL、沙蒿多糖0.7mg/mL、大豆磷脂3mg/mL、IL
‑
2 250IU/mL。
[0022]上述细胞保存液在保存CIK细胞中的应用，包括以下过程：取保存液分装在2mL冷存管中，每管1.5mL，预冷至2℃，加入待保存的CIK细胞，细胞密度为3
×
107个/mL，继续在2℃条件下保存。
[0023]实施例2
[0024]一种细胞保存液，包括RPMI
‑
1640培养基和添加在培养基中的以下成分：磷酸二氢钾、右旋糖酐
‑
40、透明质酸钠、肉苁蓉多肽、沙蒿多糖、大豆磷脂、IL
‑
2；各成分在培养基的终浓度为：磷酸二氢钾10mg/mL、右旋糖酐
‑
40 5mg/mL、透明质酸钠8μg/mL、分子量为500
‑
1000Da肉苁蓉多肽15μg/mL、沙蒿多糖0.5mg/mL、大豆磷脂1mg/mL、IL
‑
2 200IU/mL。
[0025]上述细胞保存液在保存CIK细胞中的应用，包括以下过程：取保存液分装在2mL冷存管中，每管1.5mL，预冷至4℃，加入待保存的CIK细胞，细胞密度为1
×
107个/mL，继续在4℃条件下保存。
[0026]实施例3
[0027]一种细胞保存液，包括RPMI
‑
1640培养基和添加在培养基中的以下成分：磷酸二氢钾、右旋糖酐
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞保存液，其特征在于，包括基础培养基和添加在培养基中的以下成分：磷酸二氢钾、右旋糖酐
‑
40、透明质酸钠、肉苁蓉多肽、沙蒿多糖、大豆磷脂、IL
‑
2。2.根据权利要求1所述细胞保存液，其特征在于，各成分在培养基的终浓度为：磷酸二氢钾10
‑
15mg/mL、右旋糖酐
‑
40 5
‑
10mg/mL、透明质酸钠8
‑
12μg/mL、肉苁蓉多肽15
‑
20μg/mL、沙蒿多糖0.5
‑
1mg/mL、大豆磷脂1
‑
5mg/mL、IL
‑
2 200
‑
300IU/mL。3.根据权利要求1所述细胞保存液，其特征在于，各成分在培养基的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张帅军，郝瑞，
申请(专利权)人：张帅军，
类型：发明
国别省市：