CAR-T细胞组合物及其使用方法技术

本发明专利技术提供了嵌合抗原受体T细胞(CART)组合物及其使用方法。一个实施方案提供了一种包含8F8嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体T细胞组合物。另一个实施方案提供了一种包含6G11嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体T细胞组合物。又一个实施方案提供了一种包含12D7嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体T细胞组合物。本发明专利技术所公开的CART可用于治疗癌症，例如肝细胞癌。例如肝细胞癌。例如肝细胞癌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CAR
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T细胞组合物及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月21日提交的美国临时专利申请62/903,776的优先权和权益，该临时专利申请全文以引用方式并入本文。
[0003]关于美国联邦政府资助的研究的声明
[0004]本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的CA168912的政府资助下进行的。美国政府拥有本专利技术的某些权利。


[0005]本专利技术的方面一般涉及免疫疗法，特别是涉及抗体和嵌合抗原受体T细胞以及它们的使用方法。

技术介绍

[0006]每年有850,000例新发肝癌病例，使其成为全球第六大最常见的癌症(1)。大多数(80％
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90％)肝癌是肝细胞癌(HCC)。虽然由于乙型肝炎病毒(HBV)疫苗接种，HCC发病率在亚洲已经趋于平稳(2)，但由于肥胖症/糖尿病，发达国家HCC发病率显著增加(3,4)。根据美国疾病控制中心的数据，肝癌的发病率在过去的20年中增加了一倍，成为了增长最快的癌症。肝癌的治疗选择是有限的。虽然肝切除术是治愈性的，但大多数HCC在晚期才被诊断出来，已经无法进行手术。此外，缺乏辅助治疗导致约70％的5年复发率(5)，这使肝癌成为成年男性癌症死亡的第二大原因(1)。因此，迫切需要新的疗法。
[0007]免疫疗法在治疗恶性肿瘤方面具有很大的潜力(6
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10)。检查点阻断已显示出对HCC的治疗效果(9,11)，但它需要肿瘤浸润T细胞的存在，而肿瘤浸润T细胞并不总是存在(12)。产生肿瘤特异性T细胞的一种方法是用特异性T细胞受体(TCR)重定向患者的自体T细胞(13,14)。然而，TCR的主要组织相容性复合体(MHC)限制性限制了其应用。一种独立于MHC的方法是利用嵌合抗原受体(CAR)基因来改造T细胞以靶向肿瘤表面抗原。CAR将单克隆抗体(mAb)的高亲和力和特异性与TCR信号传导结合，可激活T细胞并介导独立于MHC的对肿瘤细胞的强而特异性的杀伤(15,16)。用CAR基因改造的T细胞(CART)已被证明在治疗血液学癌症中具有强大的抗肿瘤作用(16
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18)。
[0008]CART也被深入研究用于治疗包括HCC在内的实体瘤(19)。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是硫酸肝素(HS)蛋白聚糖家族的成员，通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚附着在细胞膜上(20,21)，并参与wnt/β
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连环蛋白信号传导(22,23)。大约70％
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80％的HCC肿瘤细胞(但不是正常的肝细胞)表达GPC3。其水平与患者生存率低有关(24)。因此，GPC3可能是HCC免疫疗法的重要靶标(25)。已测试了几种hGPC3
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特异性mAb(GC33、YP7、HN3和MDX
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1414)的抗肿瘤作用(26
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28)。但是只有GC33已经进入临床试验(29)，没有显著的抗肿瘤益处(30)。目前，有几个小组正在研究GC33衍生的CART的抗肿瘤作用(31
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33)，它们的抗肿瘤益处仍有待评估。同时，从不同的mAb(尤其是靶向hGPC3的不同区域的那些mAb)开发的CART是否会产生不同的抗肿瘤作用尚不清楚。此外，尽管GC33 mAb已在临床试验中被证明是安全的，但最近的一
项研究表明，在34个非HCC肿瘤组织中，有7个组织经GC33染色呈阳性(34)。因此，需要针对HCC免疫疗法产生更多具有高特异性和高有效性的CART。
[0009]本专利技术的一个目的是提供抗体组合物及其使用方法。
[0010]本专利技术的另一个目的是提供嵌合抗原受体T细胞组合物及其使用方法。
[0011]本专利技术的又一个目的是提供用于治疗癌症的方法和组合物。

技术实现思路

[0012]本专利技术提供了嵌合抗原受体T细胞(CART)组合物及其使用方法。一个实施方案提供了一种包含8F8嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体T细胞组合物。另一个实施方案提供了一种包含6G11嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体T细胞组合物。又一个实施方案提供了一种包含12D7嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体T细胞组合物。本专利技术所公开的CART可用于治疗癌症，例如肝细胞癌。
[0013]其他实施方案涉及用于产生CART的抗体。一个实施方案提供了一种具有mAb 6G11可变轻链和mAb 6G11可变重链的重组单克隆抗体。另一个实施方案提供了一种具有mAb 8F8可变轻链和mAb 8F8可变重链的重组单克隆抗体。又一个实施方案提供了一种包含mAb 12D7可变轻链和mAb 12D7可变重链的重组单克隆抗体。
[0014]一个实施方案提供了一种包含本专利技术所公开的抗体和/或CART的药物组合物。
[0015]另一个实施方案提供了一种治疗肝癌的方法，该方法通过向对其有需要的受试者施用有效量的6G11、8F8或12D7嵌合抗原受体T细胞来治疗癌症，例如肝细胞癌。
[0016]一个实施方案提供了一种治疗对其有需要的受试者的肝细胞癌的方法，该方法包括以下步骤：从该受试者中分离T细胞；用包含6G11
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CAR核酸序列的载体转染这些分离的T细胞；任选地在细胞培养物中扩增这些转染的细胞；以及向该受试者施用有效量的这些转染的细胞以治疗肝细胞癌。
[0017]一个实施方案提供了一种治疗对其有需要的受试者的肝细胞癌的方法，该方法包括以下步骤：从该受试者中分离T细胞；用包含8F8
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CAR核酸序列的载体转染这些分离的T细胞；任选地在细胞培养物中扩增这些转染的细胞；以及向该受试者施用有效量的这些转染的细胞以治疗肝细胞癌。
[0018]一个实施方案提供了一种治疗对其有需要的受试者的肝细胞癌的方法，该方法包括以下步骤：从该受试者中分离T细胞；用包含12D7
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CAR核酸序列的载体转染这些分离的T细胞；任选地在细胞培养物中扩增这些转染的细胞；以及向该受试者施用有效量的这些转染的细胞以治疗肝细胞癌。
[0019]一个实施方案提供了一种嵌合抗原受体免疫细胞，该嵌合抗原受体免疫细胞包含与SEQ ID NO:1、2或3具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的核酸。
附图说明
[0020]图1A是通过酶联免疫吸附(ELISA)测定鉴定的22种hGPC3
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特异性mAb的表。提供了它们的Ig类别、对HepG2细胞的染色以及与hGPC3的N片段或C片段的结合。灰色阴影的mAb没有对HepG2细胞染色。图1B是示出5种mAb对HepG2肿瘤细胞的代表性免疫荧光染色的一组显微照片。图1C是表达hGPC3的N片段和C片段的质粒图。图1D是示出用hGPC3
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N或hGPC3
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C质粒
转染并用指示的mAb进行细胞内染色的293细胞的一组图。门由未转染的亲本293T细胞设置。图1E是示出用指示的hG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体T细胞组合物，所述嵌合抗原受体T细胞组合物包含8F8嵌合抗原受体T细胞。2.一种嵌合抗原受体T细胞组合物，所述嵌合抗原受体T细胞组合物包含6G11嵌合抗原受体T细胞。3.一种嵌合抗原受体T细胞组合物，所述嵌合抗原受体T细胞组合物包含12D7嵌合抗原受体T细胞。4.一种重组单克隆抗体，所述重组单克隆抗体包含与mAb 6G11可变轻链具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的可变轻链和与mAb 6G11可变重链具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的可变重链。5.一种重组单克隆抗体，所述重组单克隆抗体包含与mAb 8F8可变轻链具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的可变轻链和与mAb 8F8可变重链具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的可变重链。6.一种重组单克隆抗体，所述重组单克隆抗体包含与mAb 12D7可变轻链具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的可变轻链和与mAb 12D7可变重链具有85％、90％、95％、99％或100％序列同一性的可变重链。7.一种治疗肝癌的方法，所述方法包括向对其有需要的受试者施用...

【专利技术属性】
技术研发人员：何玉凯，L，
申请(专利权)人：奥古斯塔大学研究所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：