PPARγ第166位苏氨酸磷酸化修饰单克隆抗体的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于抗体制备的生物检测技术领域，涉及PPARγ第166位苏氨酸磷酸化修饰单克隆抗体及其制备方法和应用。所述的制备方法为使用磷酸化标记的抗原肽段偶连与KLH蛋白，形成免疫用抗原，通过免疫小鼠、生产杂交瘤细胞以及抗体亲和力筛选等步骤获得可识别PPARγ第166位苏氨酸磷酸化修饰的小鼠单克隆抗体。进一步地，通过在多种应用场景中测试该单克隆抗体的检测效果，确定了该单克隆抗体在实际研究及样本检测中的应用。本检测中的应用。

【技术实现步骤摘要】
hemocyanin)进行化学偶联，得到免疫用抗原；(2)利用步骤(1)中所述的抗原对小鼠进行免疫；(3)收集免疫后小鼠的脾脏细胞，与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合；(4)利用ELISA的方法对(3)所得杂交瘤细胞进行初步筛选得到分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株；(5)对步骤(4)所得杂交瘤细胞进行至少3次亚克隆，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养并保存。(6)杂交瘤细胞分泌的阳性抗体使用Protein G亲和纯化柱进行纯化。
[0009]所述的合成多肽为一种PPARγ蛋白磷酸化抗体的抗原合成肽，所述抗原合成肽的氨基酸序列具有如SEQ ID NO.1所示的序列，磷酸化位点为PPARγ蛋白的第166位苏氨酸。
[0010]所述的小鼠免疫步骤为分步免疫法，即间隔14天为一个免疫周期，共免疫4次。
[0011]所述的骨髓瘤细胞SP2/0融合为化学融合法，即使用PEG-1500作为融合剂进行融合。
[0012]所述的亚克隆方法为有限稀释法。
[0013]所述的亲和纯化法为Protein G亲和纯化柱纯化。
[0014]本专利技术所制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，其特征在于，该抗体可特异性识别PPARγ蛋白第166位苏氨酸磷酸化修饰的单克隆抗体。2.一种杂交瘤细胞，其特征在于可持续稳定的分泌权利要求1中所述的抗体。3.PPARγ蛋白第166位苏氨酸磷酸化修饰的单克隆抗体与其杂交瘤细胞的制备方法。4.用于制备PPARγ蛋白第166位苏氨酸磷酸化修饰的单克隆抗体所使用的磷酸化肽段为KGFFRR(p-T)IRLKLIYDRC及其应用，序列见序列表SEQ ID NO.1所示。5.PPARγ蛋白第166位苏氨酸磷酸化修饰的单克隆抗体的应用。6.根据权利要求5中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈萍萍，杨南飞，蔡成洁，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：