一种检测循环肿瘤细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种检测循环肿瘤细胞的方法及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术提供了一种检测循环肿瘤细胞的方法，先使用分别偶联有寡核苷酸A、B的抗体A、B对待测样本中的循环肿瘤细胞进行标记，然后使用核酸外切酶对经标记的循环肿瘤细胞进行消化，再对经消化的循环肿瘤细胞进行细胞裂解和核酸提取，最后以双链探针和肿瘤核酸标志物为靶标对提取而得的核酸体系进行qPCR，并根据qPCR的结果，判断待测样本中循环肿瘤细胞的数量和类型，抗体A、B能够与循环肿瘤细胞表面的特异性抗原特异性结合，寡核苷酸A、B能够组成一对末端互补的邻位探针，邻位探针经延伸后形成能够与循环肿瘤细胞表面的特异性抗原特异性结合的双链探针。细胞表面的特异性抗原特异性结合的双链探针。细胞表面的特异性抗原特异性结合的双链探针。

【技术实现步骤摘要】
一种检测循环肿瘤细胞的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种检测循环肿瘤细胞的方法及其应用，属于分子生物学


技术介绍

[0002]循环肿瘤细胞（CTC）是从原发肿瘤灶脱落并释放到外周血液循环中的肿瘤细胞，大部分CTC在进入外周血后会发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者死亡风险，造成临床上高达90%的癌症相关死亡率。
[0003]从外周血中分离CTC的可能性使得CTC可作为转移性肿瘤的“液体活检”，并以非侵入性的方式提供癌症相关信息。临床研究表明，癌症患者外周血中的CTC计数与其疾病相关，可以指示疾病进展并评估治疗反应（具体可见参考文献“Cohen, S. J. et al. Relationship of circulating tumor cells to tumor response,progression
‑
free survival, and overall survival in patients with metastatic colorectal cance本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：标记步骤：同时使用偶联有寡核苷酸A的抗体A和偶联有寡核苷酸B的抗体B对待测样本中的循环肿瘤细胞进行标记，得到经标记的循环肿瘤细胞；所述抗体A和抗体B能够与循环肿瘤细胞表面的特异性抗原特异性结合；所述寡核苷酸A和寡核苷酸B能够组成一对末端互补的邻位探针；所述邻位探针经DNA聚合酶延伸后形成能够与循环肿瘤细胞表面的特异性抗原特异性结合的双链探针；延伸步骤：使用DNA聚合酶对经标记的循环肿瘤细胞进行延伸，使得分别通过抗体A和抗体B标记在循环肿瘤细胞表面的寡核苷酸A和寡核苷酸B形成双链探针，得到经延伸的循环肿瘤细胞；消化步骤：使用核酸外切酶对经延伸的循环肿瘤细胞进行消化，去除未形成双链探针的寡核苷酸A和寡核苷酸B，得到经消化的循环肿瘤细胞；提取步骤：对经消化的循环肿瘤细胞进行核酸提取，释放双链探针，得到核酸体系；或者，对经消化的循环肿瘤细胞进行核酸提取，释放双链探针和肿瘤核酸标志物，得到核酸体系；检测步骤：以双链探针为靶标对核酸体系进行荧光定量PCR，并根据荧光定量PCR的结果，判断待测样本中循环肿瘤细胞的数量和类型；或者，以双链探针和肿瘤核酸标志物为靶标对核酸体系进行多重荧光定量PCR，并根据多重荧光定量PCR的结果，判断待测样本中循环肿瘤细胞的数量和类型。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在标记步骤之前，所述方法还包括富集步骤；所述富集步骤为：对待测样本中的循环肿瘤细胞进行富集。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在消化步骤与裂解步骤之间，所述方法还包括清洗步骤；所述清洗步骤为：使用清洗液对经消化的循环肿瘤细胞进行清洗。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记步骤为：将偶联有寡核苷酸的抗体与待测样本混合后，于20~30℃下孵育30~60min进行标记，得到经标记的循环肿瘤细胞。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消化步骤为：将核酸外切酶与经延伸的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金泽，周连群，李豪，张威，李传宇，姚佳，郭振，张芷齐，李超，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：