一种构建比格犬重症哮喘模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种构建比格犬重症哮喘模型的方法。所述方法包括如下步骤：S1.致敏：将含有甲苯二异氰酸酯的致敏液加至成年比格犬的耳部，间隔一周后，在比格犬的相同部位进行相同处理；S2.激发：步骤S1结束后的1～8周内，使比格犬吸入含有甲苯二异氰酸酯的雾化激发液，每周2次。本发明专利技术利用成年比格犬构建重症哮喘的动物模型，以特定的过敏原致敏比格犬，并使用特定的雾化法及雾化方案进行激发，构建的动物模型成功表现出典型的重症哮喘病症，具备剧烈的哮喘症状以及显著的病理改变，而且造模的操作简便、耗费时间短，具有很好的应用优势。具有很好的应用优势。具有很好的应用优势。

【技术实现步骤摘要】
一种构建比格犬重症哮喘模型的方法


[0001]本专利技术涉及医学
，具体涉及一种构建比格犬重症哮喘模型的方法。

技术介绍

[0002]重症哮喘即重度哮喘，WHO在2010年确定重症哮喘的定义：是指哮喘症状严重，伴有一些慢性疾病症状，病情波动，常发生急性加重，且用药物未能控制的状态。在哮喘病患者中，重症哮喘患者的占比高达10％以上。重症哮喘患者不能像大部分哮喘患者那样可以通过接受吸入激素及支气管扩张剂治疗即得到有效控制，重症患者即使全身应用激素仍无法控制其症状，其生活质量差且疾病负担重，是哮喘研究中的重要课题方向。构建稳定可靠的重症哮喘动物模型，是探索重症哮喘治疗方法的关键。
[0003]目前未有专门的重症哮喘动物模型，已有的哮喘模型多是以使用小鼠、豚鼠建立的小动物模型，成本低、造模周期短，广泛应用于哮喘发病机制和治疗药物研究。但是，小动物哮喘模型症状维持时间短，症状不显著，有自愈趋势，无法形成有效的重症哮喘模型，并且由于动物体型较小，难以用于呼吸介入等非药物性治疗哮喘技术(如支气管热成形术)的临床前研究。
[0004]目前也有用比格犬建立的大动物模型(DOI:10.1080/08958370304474)，比格犬具有与人类结构高度相似气管结构，但是该比格犬哮喘模型存在造模成功率低(50～60％)、造模周期长(需8个月时间)、哮喘病理改变不典型(如3mg/mL支气管激发剂刺激下气道阻力仅增加约1倍)等问题，也无法用于重症哮喘的研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了填补重症哮喘动物模型的技术空白，以及克服现有技术中比格犬哮喘模型造模成功率低、周期长、哮喘病理改变不典型的问题，提供了一种操作简便、耗时短的构建具有具备典型哮喘症状以及病理改变的比格犬重症哮喘模型的方法。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0007]一种构建比格犬重症哮喘模型的方法，包括如下步骤：
[0008]S1.致敏：将致敏液加至成年比格犬的耳部，间隔一周后，在比格犬的相同部位进行相同处理；所述致敏液为含v/v％＝0.1％～0.4％的甲苯二异氰酸酯溶液；
[0009]S2.激发：步骤S1结束后的1～8周，使比格犬吸入雾化的激发液，每周2次；所述激发液为含v/v％＝0.1％～0.6％的甲苯二异氰酸酯溶液。
[0010]优选地，步骤S1中，所述致敏液为含v/v％＝0.2％～0.3％的甲苯二异氰酸酯溶液。
[0011]更优选地，步骤S1中，所述致敏液为含v/v％＝0.27％的甲苯二异氰酸酯溶液。
[0012]优选地，步骤S2中，所述激发液为含v/v％＝0.2％～0.5％的甲苯二异氰酸酯溶液。
[0013]更优选地，步骤S2中，所述激发液为含v/v％＝0.27％～0.45％的甲苯二异氰酸酯
溶液。
[0014]优选地，步骤S2中，步骤S1结束后的1～8周内使用的激发液浓度依次递增。
[0015]更优选地，所述依次递增具体是：步骤S1结束后的1～2周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.2％～0.3％；步骤S1结束后的3～4周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.3％～0.4％；步骤S1结束后的5～8周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.4％～0.6％。
[0016]最优选地，所述依次递增具体是：步骤S1结束后的1～2周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.27％；步骤S1结束后的3～4周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.36％；步骤S1结束后的5～8周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.45％。
[0017]优选地，步骤S1中，所述致敏液含有体积比为(450～550):(500～700):3的聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯。
[0018]更优选地，步骤S1中，所述致敏液含有体积比为500:600:3的聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯。
[0019]优选地，步骤S2中，所述激发液含有体积比为(250～350):(700～900):(3～5)的聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯。
[0020]更优选地，步骤S2中，所述激发液含有体积比为300:800:(3～5)的聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯。
[0021]最优选地，步骤S2中，所述步骤S1结束后的1～2周，通过雾化使比格犬吸入聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯体积比为300:800:3的激发液；步骤S1结束后的3～4周，通过雾化使比格犬吸入聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯体积比为300:800:4的激发液；步骤S1结束后的5～8周，通过雾化使比格犬吸入聚醚醇、植物油和甲苯二异氰酸酯体积比为300:800:5的激发液。
[0022]另外，上述植物油可为橄榄油、花生油等。
[0023]传统的卵清蛋白、豚草粉等过敏原致敏机制单一，往往需要在比格犬刚出生时进行早期致敏，并筛选过敏体质的比格犬，才能达到适宜的造模效果，且难以造出重症模型。本专利技术以含有甲苯二异氰酸酯的特定致敏液和激发液作为过敏原，采用两次致敏结合短期内(8周)多次特定给药激发，可以直接使用成年比格犬造模，不需要筛选过敏体质的比格犬进行造模，且造模步骤简化，可以有效的减少时间成本和动物饲养成本，可在较短的造模周期内构建稳定的比格犬重症哮喘模型。所述比格犬重症哮喘模型构建成功的判定标准为：比格犬有明显咳喘症状，并伴有大量气道分泌物咳出；在未受到呼吸道刺激的情况下，比格犬可出现明显的哮喘急性发作症状，呼吸困难，发绀，支气管镜下可见双肺气管明显痉挛缩窄，并伴有大量分泌物；血清及肺泡灌洗液检测提示为以中性粒细胞为主的混合型粒细胞炎症；气道反应性明显增加；肺组织病理学检测提示出现明显气道重构现象。
[0024]另外，本专利技术上述构建比格犬重症哮喘模型的方法中，优选地动物及给药量如下：
[0025]优选地，所述成年比格犬的年龄为8月龄～12月龄。
[0026]更优选地，所述成年比格犬的年龄为10月龄。
[0027]优选地，所述成年比格犬的体重为10～15kg。
[0028]更优选地，所述成年比格犬的体重为10kg。
[0029]优选地，所述成年比格犬的耳部为外耳。
[0030]更优选地，所述成年比格犬的耳部为耳廓。
[0031]优选地，步骤S1中，所述致敏液与比格犬的体积质量比为(150～200μL):10kg；步骤S2中，所述激发液与比格犬的体积质量比为(10mL～15mL):10kg。
[0032]更优选地，步骤S1中，所述致敏液与比格犬的体积质量比为200μL:10kg；步骤S2中，所述激发液与比格犬的体积质量比为10mL:10kg。
[0033]优选地，步骤S2中，所述雾化的时间为2h～2.5h。
[0034]更优选地，步骤S2中，所述雾化的时间为2h。
[0035]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建比格犬重症哮喘模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.致敏：将致敏液加至成年比格犬的耳部，间隔一周后，在比格犬的相同部位进行相同处理；所述致敏液为含v/v％＝0.1％～0.4％的甲苯二异氰酸酯溶液；S2.激发：步骤S1结束后的第1～8周期间，使比格犬吸入雾化的激发液，每周2次；所述激发液为含v/v％＝0.1％～0.6％的甲苯二异氰酸酯溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，步骤S1结束后的第1～8周内使用的激发液浓度依次递增。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述依次递增具体是：步骤S1结束后的1～2周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.1％～0.3％；步骤S1结束后的3～4周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.3％～0.4％；步骤S1结束后的5～8周内使用的激发液中甲苯二异氰酸酯浓度为v/v％＝0.4％～0.6％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述致敏液含有体积比为(450...

【专利技术属性】
技术研发人员：李时悦，陈迪非，苏柱泉，罗钰龙，姚利红，周子青，刘经纬，郭祖源，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：