一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法，该方法首先使RDH10

【技术实现步骤摘要】
一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法


[0001]本专利技术属于医药
更具体地，涉及一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法。

技术介绍

[0002]心力衰竭是各类心血管疾病的终末阶段，心力衰竭患者会出现呼吸困难、疲劳、运动耐力差和液体潴留等多种症状，严重影响患者的生活质量。并且，心力衰竭发病隐匿且致死率极高，确诊后的患者五年内存活率甚至低于多种恶性肿瘤。因此，寻找心力衰竭的早期诊断指标及治疗方法，开展针对其发病机制的基础研究尤为重要。
[0003]应用疾病动物模型模拟人类疾病，是寻找人类疾病潜在分子机制和治疗靶点的主要方式。现有的心衰动物模型根据其造模方式及发病机制的不同，可分为以冠状动脉结扎法和堵塞法为主构建的缺血性心肌病心衰模型、以主动脉狭窄法和盐负荷法为主构建的压力负荷型心衰模型、以动静脉瘘法和心脏瓣膜关闭不全法构建的容量前负荷型心衰模型、利用心肌损害药物构建的药源性心衰模型和以特定基因修饰构建的基因修饰心衰模型。虽然这些动物模型的构建已为心力衰竭相关疾病的防治研究提供了极大的帮助，但日益升高的患病率和死亡率表明现有对心力衰竭的研究仍不充分。
[0004]近期，Ni Yang等指出心衰患者的心肌中普遍存在着以视黄酸含量显著降低为主要特征的视黄醇代谢紊乱现象(Yang Ni,Parker Lauren,Yu Jianshi,Jones Jace W,Liu Ting,Papanicolaou Kyriakos N,Talbot C Conover,Margulies Kenneth B,O'Rourke Brian,Kane Maureen,Foster D Brian.Cardiac retinoic acid levels decline in heart failure.[J].JCI insight,2021:)，但心肌视黄醇代谢紊乱与心力衰竭之间的关系尚不清楚，因此亟需构建合适的动物模型以供研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术的不足，旨在提供一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法，为进一步研究心肌视黄醇代谢紊乱与心力衰竭的关系增加可操作性和便利性，为基于心肌视黄醇代谢紊乱的心脏疾病提供复制和研究的工具。
[0006]本专利技术的首要目的是提供RDH10基因心肌特异性敲除在构建基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型中的应用。
[0007]本专利技术的另一目的是提供一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法。
[0008]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0009]本专利技术通过向5周龄的同时带有RDH10
fl/fl
基因和MHY6
‑
iCre基因的小鼠腹腔注射他莫昔芬，受他莫昔芬激活的icre蛋白会对小鼠心肌中RDH10基因进行特异性诱导敲除，可使小鼠在诱导完成后第15周就自发出现了心肌视黄醇代谢紊乱和心力衰竭的现象，成功构
建得到基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型，说明RDH10基因心肌特异性敲除在构建基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型中发挥着至关重要的作用。因此，RDH10基因心肌特异性敲除在构建基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型中的应用应在本专利技术的保护范围之内。
[0010]本专利技术还提供了一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法，该方法首先使RDH10
fl/fl
小鼠与MYH6
‑
iCre小鼠交配，得到同时带有RDH10
fl/fl
基因和MHY6
‑
iCre基因的F2代小鼠；再在F2代小鼠5～6周龄时，对其心肌细胞中RDH10基因进行特异性敲除，持续饲养至左心室射血分数小于60％，即得到所述基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型。
[0011]本专利技术首先通过向5周龄的同时带有RDH10
fl/fl
基因和MHY6
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iCre基因的小鼠腹腔注射他莫昔芬，受他莫昔芬激活的icre蛋白完成了对小鼠心肌中作为视黄醇代谢过程中关键酶的RDH10基因的特异性诱导敲除，在诱导15周后，通过LC
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MS/MS测定小鼠心肌中的视黄醇和视黄酸含量，证明小鼠出现了心肌视黄醇代谢紊乱，再通过心功能和病理的检测，发现小鼠还伴随着心力衰竭，说明本专利技术方法可成功构建得到基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型。
[0012]优选地，所述小鼠为C57BL/6背景小鼠。
[0013]优选地，所述特异性敲除通过他莫昔芬诱导敲除。
[0014]进一步优选地，所述他莫昔芬的配制方法为：先用无水乙醇促溶，再用有机溶剂稀释。所述有机溶剂需使用无毒副作用的有机溶剂。
[0015]更优选地，所述稀释为稀释至10mg/mL。
[0016]更优选地，所述有机溶剂为玉米油。
[0017]优选地，所述他莫昔芬的诱导方式为腹腔注射。
[0018]进一步优选地，所述腹腔注射为：每天以48～52mg/kg
体重
的用量注射一次，连续注射5天。更优选地，所述用量为50mg/kg
体重
。最优选地，所述注射在每天固定时间进行，如每天早上9点。
[0019]优选地，所述敲除在F2代小鼠5周龄时进行。
[0020]优选地，所述成年小鼠心衰模型构建期间，以维持鼠料喂养，自由饮水摄食。所述维持鼠料是日常实验中，实验鼠食用的基础饲料。
[0021]本专利技术具有以下有益效果：
[0022]本专利技术构建的模型小鼠在他莫昔芬诱导完成后的第15周，就自发出现了心肌视黄醇代谢紊乱和心力衰竭的现象，具有成模快的优势，且该模型是通过特异性敲除心肌细胞中的RDH10基因得到的，即该模型小鼠的视黄醇代谢紊乱现象仅存在于心肌中，是完全基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型。该模型的构建为进一步研究心肌视黄醇代谢紊乱与心力衰竭的关系增加可操作性和便利性，为基于心肌视黄醇代谢紊乱的心脏疾病提供了复制和研究的工具，有利于开发针对基于心肌视黄醇代谢紊乱的心力衰竭的诊断方法与治疗药物，对心脏疾病相关研究具有相当的必要性。
附图说明
[0023]图1A是心肌RDH10蛋白免疫印迹结果及其统计图，图1B是心肌RDH10蛋白的组织免
疫荧光染色结果。(统计图中的数据以平均数
±
标准误形式呈现，***表示经统计分析，RDH10心肌特异性敲除组数值与RDH10
fl/fl
组数值相比P值小于0.001)
[0024]图2A是心肌视黄醇含量图，图2B是心肌视黄酸含量图。(统计图中的数据以平均数
±
标准误形式呈现，*表示经统计分析，RDH10心肌特异性敲除组数值与RDH10
fl/fl
组数值相比P值小于0.05)
[0025]图3A是三组小鼠的心脏超声示意图，图3B是小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.RDH10基因心肌特异性敲除在构建基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型中的应用。2.一种基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型的构建方法，其特征在于，首先使RDH10
fl/fl
小鼠与MYH6
‑
iCre小鼠交配，得到同时带有RDH10
fl/fl
基因和MHY6
‑
iCre基因的F2代小鼠；再在F2代小鼠5～6周龄时，对其心肌细胞中RDH10基因进行特异性敲除，持续饲养至左心室射血分数小于60％，即得到所述基于心肌视黄醇代谢紊乱的成年小鼠心衰模型。3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述小鼠为C57BL/6背景小鼠。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡卫斌，吴燕笛，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：