Prrc2b在制备治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Prrc2b在制备治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。本发明专利技术的实验证明，Prrc2b是一种新的m6A结合蛋白，调控少突胶质细胞命运决定，Prrc2b基因敲除可以导致髓鞘化不足或脱髓鞘，因此Prrc2b可以作为治疗脱髓鞘疾病的药物靶点。另外，本发明专利技术还公开了Prrc2b在构建髓鞘损伤或脱髓鞘动物模型中的应用。髓鞘损伤或脱髓鞘动物模型中的应用。髓鞘损伤或脱髓鞘动物模型中的应用。

【技术实现步骤摘要】
Prrc2b在制备治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及Prrc2b在制备治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。

技术介绍

[0002]髓鞘是包裹在神经纤维外周的一层髓磷脂蛋白，它可以包裹轴突使轴突间相互绝缘，避免干扰；髓鞘间形成的郎飞结可以使动作电位在轴突上进行“跳跃式传导”，加速信号传递；此外，髓鞘包裹在轴突周围还可以起到保护的作用。
[0003]在轴突损伤情况下可以帮助轴突再生。当髓鞘受损或发育不良就会引起一些髓鞘相关疾病，如多发性硬化、视神经脊髓炎等，而且研究发现多种神经系统疾病都伴随着髓鞘丢失，如阿尔兹海默症、抑郁症和脑创伤等。在大脑中负责髓鞘形成的细胞主要是少突胶质细胞(OL，oligodendrocyte)，少突胶质细胞由神经祖细胞发育为少突胶质前体细胞(OPC，oligodendrocyte precursor cell)接着经过增殖分化为少突胶质细胞，在体内少突胶质细胞继续分化为髓鞘化的少突胶质细胞包裹到轴突周围，进而形成髓鞘。因此，少突胶质细胞的正常发育对于髓鞘的正常发育具有重要的意义。
[0004]截止目前，研究已经发现多种因素可以影响少突胶质细胞发育分化的进程，包括表观遗传、基因和环境等，其中表观遗传中又包含了多种影响因素，如DNA甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑等。近年来mRNA甲基化修饰在少突胶质细胞发育中的作用逐渐成为研究热点，但是对于它的研究结果目前还比较少，将其作为干预靶点去调控少突胶质细胞分化，进而调控髓鞘形成，达到治疗脱髓鞘相关疾病的目的具有重要的临床价值。
[0005]mRNA甲基化中的N
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6甲基腺苷修饰是真核生物中一种普遍存在的修饰方式，可调控mRNA可变剪切、降解和翻译，这些过程的发生需要相应m6A结合蛋白的识别作用。我们研究中发现了一种新的m6A结合蛋白—Prrc2b，它是否参与调控少突胶质细胞的发育分化并不清楚，能否将其作为治疗脱髓鞘相关疾病的干预靶标需要进一步探索。已经有报道证实Prrc2A可以调控髓鞘化，作为其同源蛋白Prrc2b是否对少突胶质细胞的命运决定起作用并不清楚。本申请的研究聚焦于Prrc2b能否调控OPC发育分化，进而作为治疗脱髓鞘疾病的靶标。

技术实现思路

[0006]本申请借助液相色谱质谱检测(LC
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MS/MS)系统以及RNA m6A甲基化测序技术(MeRIP
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seq)证实Prrc2b是一个新的m6A结合蛋白。之后采用动物模型研究发现Prrc2b作为一个m6A结合蛋白敲除后影响了少突胶质细胞的命运决定，且对动物造成了病理性损伤从而影响了动物的行为。因此，Prrc2b可以作为一个干预靶点，调控少突胶质细胞发育分化，进而达到治疗脱髓鞘疾病的目的。
[0007]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了m6A修饰结合蛋白在构建髓鞘损伤或脱髓鞘动物模型中的应用。
[0008]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了m6A修饰结合蛋白在制备修复髓鞘损伤、
促进髓鞘形成或髓鞘再生的药物中的应用。
[0009]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了m6A修饰结合蛋白在制备治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。
[0010]所述m6A修饰结合蛋白包括YTH结构域蛋白，真核起始因子(eIF)、核不均一核糖蛋白(hnRNP)。
[0011]在本专利技术的具体实施方案中，所述m6A修饰结合蛋白指的是Prrc2b。
[0012]进一步，本专利技术所述药物包括促进Prrc2b的试剂。
[0013]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种髓鞘损伤或脱髓鞘疾病动物模型的构建方法，所述构建方法包括抑制Prrc2b表达。
[0014]抑制Prrc2b表达的试剂不受限制，只要是可以抑制Prrc2b表达水平或抑制Prrc2b功能活性即可。
[0015]有效抑制基因表达的方法主要有：基因敲除、反义核苷酸技术和RNAi技术。
[0016]基因敲除方法包括CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶(ZFN)技术、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术。
[0017]反义寡核酸技术是应用反义寡核苷酸类药物通过Waston
‑
Crick碱基配对与细胞内核酸(DNA或RNA)特异结合形成杂交分子，从而在转录和翻译水平抑制特定基因表达的基因治疗技术。
[0018]将与mRNA序列对应的正义和反义RNA组成的双链RNA导入细胞，可以使RNA降解和基因沉默，这种转录后基因沉默(post
‑
transcriptional gene silencing,PTGS)被称为RNAi。常用的RNAi技术使用的试剂包括shRNA和siRNA。
[0019]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种RNA上m6A修饰的识别方法，所述识别方法包括检测Prrc2b蛋白与待检测RNA的相互作用。
[0020]进一步，所述识别方法包括：
[0021]1)提取RNA；
[0022]2)Prrc2b蛋白与待检测RNA孵育；
[0023]3)检测Prrc2b蛋白与待检测RNA的相互作用；
[0024]4)若Prrc2b与待检测RNA结合，则判断待检测RNA上含有m6A修饰。
[0025]更进一步，所述识别方法还包括：将与Prrc2b结合RNA进行测序，确定m6A修饰位点。
[0026]进一步，检测Prrc2b蛋白与待检测RNA的相互作用的方法包括RIP、RNA pull
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down。
[0027]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种修复髓鞘损伤、促进髓鞘形成或髓鞘再生的方法，所述方法包括施用促进Prrc2b的试剂。
[0028]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种治疗脱髓鞘疾病的方法，所述方法包括给有需要者施用促进Prrc2b的试剂。
[0029]本专利技术的促进Prrc2b的试剂不受限制，只要所述试剂能够促进Prrc2b或涉及Prrc2b上游或下游途径的物质的表达或活性，且对于修复髓鞘损伤、促进髓鞘形成或髓鞘再生、或治疗脱髓鞘疾病有效的药物即可。
[0030]本专利技术的所述药物可以包括裸基因序列、含有基因序列的表达载体、促进性
miRNA、转录调控因子或靶向小分子化合物等等。
[0031]本专利技术的药物可以通过本领域任何已知的方式配制药物组合物来使用。这种组合物包含活性成分，加上一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂，这依赖于给药方式及所设计的剂量形式。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羟基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剐、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.m6A结合蛋白的应用，所述应用包括以下任一项：1)在构建髓鞘损伤或脱髓鞘动物模型中的应用；2)在制备修复髓鞘损伤或促进髓鞘再生的药物中的应用；3)在制备治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述m6A结合蛋白是Prrc2b。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物包括促进Prrc2b的试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括促进Prrc2b或涉及Prrc2b上游或下游途径的物质的表达或活性的试剂。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括裸基因序列、含有基因序列的表达载体、促进性miRNA、转录调控因子或靶向小分子化合物。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁增强，王树坤，张莹，李硕硕，孔祥熙，吴荣，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：