一种MLL-AF4融合基因阳性人源化动物模型构建方法及应用技术

本发明专利技术提供了MLL

【技术实现步骤摘要】
一种MLL
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AF4融合基因阳性人源化动物模型构建方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及人源化动物模型的构建方法及应用，具体而言，涉及基于一种MLL
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AF4融合基因阳性人源化动物模型构建方法及应用。

技术介绍

[0002]MLL(mixed lineage leukemia)基因异常是急性白血病中一种十分常见的染色体异常，其中由t(4；11)(q21；q23)易位而形成的MLL
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AF4融合基因是急性淋巴细胞白血病中第二大常见的染色体异常，是一个独立的预后不良因素，MLL
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AF4融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病患者对常规化疗耐药，即使行异基因造血干细胞移植也容易复发，往往预后差、复发率高、死亡率高。该类白血病发病机制尚不清楚，且缺乏有效的治疗手段。
[0003]白血病小鼠模型是白血病发病机制研究以及药理学实验研究必不可少的重要工具。然而，目前较为成熟的MLL
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AF4融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病小鼠模型较少，且主要局限于MLL
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AF4基因转染或者以细胞系构建的急性淋巴细胞白血病小鼠模型。这些建模方法较为复杂，且不能完全模拟病人体内的真实环境。因此，本领域存在对能够满足研发需求，并且构建方法更加简便易行的MLL
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AF4融合基因阳性的白血病小鼠模型的需求。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，在第一个方面，本专利技术的目的在于提供一种MLL
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AF4 融合基因阳性人源化动物模型的构建方法，所述方法包括将MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞注入免疫缺陷的动物体内。
[0005]在具体的实施方案中，本专利技术的所述免疫缺陷的动物为白消安预处理的动物。
[0006]在具体的实施方案中，本专利技术的所述免疫缺陷的动物为重度免疫缺陷的动物。
[0007]在具体的实施方案中，本专利技术的所述骨髓单个核细胞经尾静脉注射给免疫缺陷的动物。
[0008]在具体的实施方案中，本专利技术的所述外周血单个核细胞经腹腔注射给免疫缺陷的动物。
[0009]在具体的实施方案中，本专利技术的所述免疫缺陷的动物为免疫缺陷的小鼠、大鼠或猕猴。
[0010]在具体的实施方案中，本专利技术的方法包括：(1)细胞注射前用白消安对重度免疫缺陷动物进行预处理；(2)用淋巴细胞分离液分离出MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞；(3)取 2.4
×
106个骨髓单个核细胞和2.32
×
106个外周血单个核细胞分别经尾静脉和腹腔注射给所述重度免疫缺陷的动物体内。
[0011]在本专利技术的第二个方面，本专利技术的目的在于提供一种MLL
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AF4融合基因阳性人源化动物的组织、体液、细胞及其破碎物或提取物，其特征在于，所述 MLL
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AF4融合基因阳性人源化动物是使用第一方面所述的构建方法构建的。
[0012]在本专利技术的第三个方面，本专利技术的目的在于提供使用第一方面所述的构建方法构
建的MLL
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AF4融合基因阳性人源化动物或其组织、体液、非干细胞的细胞及其破碎物或提取物在急性淋巴细胞白血病致病机理研究以及药物或疫苗研发中的应用。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的方法构建的动物模型为白血病临床前药物试验、基因治疗及白血病发病机制研究提供可靠的实验工具，并且具有以下优点：
[0014](1)利用病人来源的MLL
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AF4融合基因阳性白血病细胞构建MLL
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AF4 融合基因阳性人源化的白血病动物模型方法较为简便；
[0015](2)构建的动物模型能够稳定、真实模拟病人体内的疾病状态和环境，这对研究MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的发病机制以及靶向治疗具有重大意义，也是开展以MLL
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AF4为靶点的基因编辑治疗的必须前提条件。
附图说明
[0016]图1A是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型与对照组小鼠的脾脏和肝脏的对比照片；
[0017]图1B是患有MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的病人的骨髓涂片以及采用本专利技术的方法构建的小鼠模型和对照组小鼠的外周血涂片；
[0018]图1C是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型的照片；
[0019]图2A是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型和对照组小鼠的肝脏组织病理学表现；
[0020]图2B是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型和对照组小鼠的脾脏组织病理学表现；
[0021]图2C是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型和对照组小鼠的肾脏组织病理学表现；
[0022]图2D是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型和对照组小鼠的肺脏组织病理学表现；
[0023]图2E是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型和对照组小鼠的脑组织病理学表现。
[0024]图3A是患有MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的病人骨髓cDNA PCR扩增后琼脂糖电泳结果；
[0025]图3B是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型的外周血cDNA PCR扩增后琼脂糖电泳结果；
[0026]图3C是采用本专利技术的方法构建的小鼠模型的骨髓cDNA PCR扩增后琼脂糖电泳结果；
[0027]图3图D是患有MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的病人骨髓 cDNA与白血病小鼠外周血cDNA、白血病小鼠骨髓cDNA的测序对比。
具体实施方式
[0028]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0029]基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0030]下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的技术方案。
[0031]实施例1：构建MLL
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AF4融合基因阳性人源化的白血病小鼠模型
[0032](1)取MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓血3mL 加入等体积
的PBS稀释混匀，再缓慢加入淋巴细胞分离液的上层，采用密度梯度离心法分离出MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓单个核细胞；取MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的外周血10mL 加入等体积的PBS稀释混匀，再缓慢加入淋巴细胞分离液的上层，采用密度梯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MLL
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AF4融合基因阳性人源化动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括将MLL
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AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞注入免疫缺陷的动物体内。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，其中所述免疫缺陷的动物为重度免疫缺陷的动物。3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，其中用白消安对所述重度免疫缺陷的动物进行预处理。4.如权利要求1
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3中任一项所述的构建方法，其特征在于，其中所述骨髓单个核细胞经尾静脉注射给免疫缺陷的动物。5.如权利要求1
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4中任一项所述的构建方法，其特征在于，其中所述外周血单个核细胞经腹腔注射给免疫缺陷的动物。6.如权利要求1
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5中任一项所述的构建方法，其特征在于，其中所述免疫缺陷的动物为免疫缺陷的小鼠、大鼠或猕猴。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的构建方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨志刚，龙杰，文瑞婷，吴国才，李文德，刘文鑫，陈璋辉，
申请(专利权)人：杨志刚，
类型：发明
国别省市：