一种子痫前期疾病动物模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种子痫前期疾病动物模型，以Sirt1

【技术实现步骤摘要】
一种子痫前期疾病动物模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及动物模型构建
，具体涉及一种子痫前期疾病动物模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]子痫前期(Preeclampsia，PE)是妊娠期特有的多系统进展性疾病，主要表现为妊娠后半期或产后新发高血压和蛋白尿；或新发高血压和显著终末器官功能障碍，伴或不伴尿蛋白。常导致母儿不良妊娠结局及增加远期心血管疾病的发生风险，目前病因不明，尚无有效治疗手段。但因分娩后临床症状会消退，最新指南归因于胎盘及母体血管功能障碍。
[0003]理想的动物模型，应呈现疾病的临床特征。PE因特发于妊娠中晚期，表现为滋养层细胞浸润不足、螺旋动脉重铸障碍，伴发高血压、弥漫性血管内皮功能损伤，并进一步导致肾脏损伤、尿蛋白，及其他终末器官功能障碍。因致病因素未明，而全身累及病征较广，目前已知的模型均不能完全呈现PE的所有症状。目前常用的大鼠、小鼠模型有脂多糖诱导的炎症模型、RUPP术式减少子宫
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胎盘灌注压的血管收缩模型，以及可溶性fms样酪氨酸激酶1等诱导的抗血管生成模型等，往往只聚焦于血压和尿蛋白体征，并不能较好还原病程，也无法兼顾滋养细胞侵袭障碍和子痫前期特有的肾脏等终末脏器功能障碍，无法还原疾病的临床特征。且造模成本较高，操作较为繁琐，无论是药物剂量还是手术方式，都存在实验操作者的个体差异，进而影响造模成功率。
[0004]Sirt1是一种尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD
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)依赖的蛋白去乙酰化酶，是Sir2蛋白在哺乳动物中的同源体，属于哺乳动物Sirtuins蛋白家族。目前的研究认为Sirt1在细胞核和细胞质中均有分布。Sirt1通过使多种蛋白质的赖氨酸残基发生去乙酰化而发挥抗炎、抗氧化应激、抗衰老、激活T细胞免疫甚至线粒体产生等作用。
[0005]针对上述模式动物高昂的造模成本，繁琐的造模过程，以及不能完全复原的病理生理过程这一系列技术问题，本专利技术提供了一种新的动物模型，Sirt1
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全身敲除杂合子状态下即可还原疾病病理生理过程，解除妊娠状态或使用激动剂治疗可以恢复。此外，无需外界药物和术式干预，繁殖无需特殊饲料和特殊饲养环境，为子痫前期发病过程及机制的研究提供了全新的动物模型。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种子痫前期疾病动物模型及其构建方法和应用，以解决现有技术的不足。
[0007]本专利技术采用以下技术方案：
[0008]本专利技术第一方面提供了Sirt1基因在构建子痫前期疾病动物模型中的应用。
[0009]本专利技术第二方面提供了一种子痫前期疾病动物模型，以Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠为子痫前期疾病动物模型。
[0010]进一步地，所述Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠由如下步骤获得：将Sirt1
flox/flox
基
因编辑小鼠扩繁后与Dppa3
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IRES
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Cre小鼠杂交，并经由去Cre繁育。
[0011]本专利技术第三方面提供了一种子痫前期疾病动物模型的构建方法，包括如下步骤：将Sirt1
flox/flox
基因编辑小鼠扩繁后与Dppa3
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IRES
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Cre小鼠杂交，并经由去Cre繁育后，获得Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠即为构建的子痫前期疾病动物模型。
[0012]本专利技术第四方面提供了所述子痫前期疾病动物模型在研究子痫前期疾病的发病过程及机制中的应用。
[0013]本专利技术第五方面提供了所述子痫前期疾病动物模型在防治子痫前期疾病药物筛选和药效评价中的应用。
[0014]本专利技术第六方面提供了Sirt1基因在制备防治子痫前期疾病药物中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术提供了一种无需外界药物和术式干预，繁殖无需特殊饲料和特殊饲养环境，但又能比较完整还原子痫前期疾病发生的全新子痫前期疾病动物模型。
[0017]本专利技术方法通过部分敲除目标动物Sirt1基因表达，使目标动物表现出较为典型的子痫前期特征，自发形成妊娠晚期血压上升，分娩后恢复，且发现胎鼠基因与Sirt1
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孕鼠妊娠早晚期血压差值存在相关性；此外，在妊娠晚期发现Sirt1
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孕鼠胎盘功能层占比下降，提示胎盘滋养细胞侵袭、螺旋动脉重铸等功能障碍，并出现蛋白尿及肾脏病变；在该基因激动剂给药作用下，相关病理表现能得以恢复，提示疾病模型构建成功，并论证该基因确为子痫前期的致病基因之一。
[0018]本专利技术子痫前期疾病动物模型可用于帮助阐明子痫前期疾病的发病过程及机制，还可用于帮助防治子痫前期疾病药物筛选和药效评价。
附图说明
[0019]图1A为Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠构建示意图。
[0020]图1B为PCR琼脂糖凝胶电泳分析Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠子代(胎鼠，E18.5：妊娠18.5天)的基因型。图中M为DNA指示条带，WT为Sirt1
flox/flox
孕鼠鼠尾对照，KO敲除基因条带指示大小：500bp，HO：纯合子，HE：杂合子，WT野生基因条带指示大小：900bp。B33
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1、B33
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2、B33
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4为杂合子Sirt1
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，B33
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3、B33
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5为纯合子Sirt1
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/
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。
[0021]图1C为Sirt1
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组和Sirt1
flox/flox
组胎盘(E18.5)组织中Sirt1的免疫荧光。CK7标记滋养细胞，DAPI标识细胞核。可见Sirt1
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组胎盘中滋养细胞Sirt1表达显著下调，验证敲除效率。
[0022]图1D为Sirt1
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组和Sirt1
flox/flox
组胎鼠(E18.5)和胎盘(E18.5)的外观。可见Sirt1
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组的胎鼠和胎盘均小于Sirt1
flox/flox
组。
[0023]图1E为Sirt1
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组和Sirt1
flox/flox
组胚胎吸收率。Sirt1
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组虽有上升趋势，但无统计学差异。
[0024]图1F为Sirt1
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组和Sirt1
flox/flox
组胎盘(E18.5)重量。S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Sirt1基因在构建子痫前期疾病动物模型中的应用。2.一种子痫前期疾病动物模型，其特征在于，以Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠为子痫前期疾病动物模型。3.根据权利要求2所述的子痫前期疾病动物模型，其特征在于，所述Sirt1
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全身敲除杂合子孕鼠包括如下步骤获得：将Sirt1
flox/flox
基因编辑小鼠扩繁后与Dppa3
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IRES
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Cre小鼠杂交，并经由去Cre繁育。4.一种子痫前期疾病动物模型的构建方...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾蔚蓉，王诚洁，裴江南，刘真真，李明清，
申请(专利权)人：复旦大学附属妇产科医院，
类型：发明
国别省市：