一种具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法技术

本发明专利技术属于畜牧技术领域，具体公开了一种具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法，包括以下步骤：S1、采集土壤样品得到样品粉末；S2、获得菌种富集液；S3、扩大培养；S4

【技术实现步骤摘要】
一种具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法


[0001]本专利技术属于畜牧
，尤其涉及一种具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法。

技术介绍

[0002]群体感应(Quorum sensing，QS)又称为“自动诱导(autoinduction)”，或“细胞与细胞的交流(cell to cell communication)”，也被称为“细菌之声交响曲(sym phony of bacteria1)”，是细菌的数量达到一定密度后才能发生的感应现象，具体是细菌通过感知分泌环境中自诱导物浓度的变化来调整基因表达，调节微生物的群体行为，增强其在复杂环境中的生存能力，是细菌行为社会化的体现。细菌群体感应参与包括人类、动植物病原菌致病力在内的多种生物学功能的调节。
[0003]进入21世纪后，微生物群体感应系统的研究已成为微生物学领域的研究热点。群体感应系统与致病性的紧密关系，使其成为生物防治和治疗动植物病害的新突破口，如以病原细菌QS系统尤其是QS信号分子为靶标，干扰和破坏病原菌QS系统可能会有效地减弱病原菌的致病力，为解决目前因传统抗生素的滥用而日趋严重的细菌耐药性问题提供了新靶点。
[0004]酵母菌(Yeast)属真菌，呈圆形、卵形或椭圆形，内有细胞核、液泡和颗粒体物质，通常为出芽繁殖，广泛分布于自然界，尤其在葡萄及其他各种果品和蔬菜上更多，是重要的发酵素，能分解碳水化合物产生酒精和二氧化碳等。生产上也常采用面包酵母、饲料酵母、酒精酵母和葡萄酒酵母等。酵母菌株是土壤中微生物重要的组成部分，目前从土壤筛选到的酵母菌株，多用于分析理化性质及其传统的益生性，未见以群体感应为靶标，并从替抗的角度对酵母菌株的功能进一步开发和利用的相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法，以解决上述技术问题。
[0006]本专利技术的目的之一在于提供：具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法，包括以下步骤：
[0007]S1、采集土壤样品得到样品粉末；
[0008]S2、称取4
‑
6g样品粉末，加入终浓度为45
‑
55mg/L的链霉素，在20
‑
40℃150
‑
170r/min的摇床中培养1
‑
3h，获得菌种富集液；
[0009]S3、扩大培养：使S2得到的富集液中的酵母菌充分生长，获得用于酵母菌筛选的菌液；
[0010]S4
‑
S6、将菌液稀释后，进行菌种纯化和菌种发酵培养，得到发酵培养物；
[0011]S7、向发酵培养物中加入有机溶剂，超声粉碎后萃取得到酵母菌种粗提物；
[0012]S8、酵母菌种粗提物用甲醇重悬得到甲醇重悬粗提物；
[0013]S9、通过紫色色杆菌ATCC12472筛选甲醇重悬粗提物，获得对紫色色杆菌ATCC12472紫色素具有抑制效果的粘红酵母(Rhodotorula glutinis)。
[0014]优选地，S1中，采集土壤样品后，去除杂质后过40
‑
50目筛。
[0015]优选地，S3中，在摇床中培养12
‑
24h，得到菌液。
[0016]优选地，S4
‑
S6中，将菌液稀释呈10
‑5、10
‑6、10
‑7的菌悬液，并将菌悬液涂布在PDA琼脂培养基上培养12
‑
48h。
[0017]优选地，S7中，有机溶剂为乙酸乙酯。
[0018]优选地，S9中，利用指示菌平板法进行初筛，挑取前期划线培养的紫色色杆菌ATCC12472单菌落于LB肉汤培养基中振荡活化，得到活化后的菌液。
[0019]本专利技术的目的之二在于提供：具有群体感应抑制活性的粘红酵母菌株，为粘红酵母(Rhodotorula glutinis)ZY
‑1‑7‑
2021
‑
24，于2021年11月18日保藏于中国农业微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏号为ACCC21436。
[0020]本专利技术的原理和有益效果在于：
[0021](1)本专利技术在酵母菌株传统筛选方法的基础上，利用模式菌株紫色色杆菌ATCC12472，以其产生的紫色素的量为评价群体感应的指标，验证筛选到的酵母菌株的培养粗提物是否具有群体感应抑制活性，从而为筛选到具有群体感应抑制活性的菌株和能替抗活性物质奠定基础。
[0022](2)本专利技术以土壤中筛选的酵母菌株为基础，以群体感应为靶标筛选到具有群体感应抑制效果的菌株，平板培养观察后颜色为桔红色的酵母，后续经测序和鉴定为粘红酵母(Rhodotorula glutinis)。
[0023]现有技术中筛选得到的有具有群体感应抑制效果的多为海洋放线菌、乳酸菌等菌种，但是目前未见报道具有群体感应抑制效果的酵母菌及其培养方法。
[0024](3)本专利技术是发掘酵母菌来源具有群体感应抑制活性物质的有效方法。本专利技术首次基于群体感应来发掘具有群体感应抑制效果的的粘红酵母，其浓度为6.25、12.5、25、50mg/mL培养物对紫色色杆菌ATCC12472紫色素的抑制率分别为13.8％、31.2％、42.6％、53.1％。
附图说明
[0025]图1为筛选到粘红酵母在YPD琼脂培养基上培养48h后的菌落形态；
[0026]图2为6株酵母菌粗提物群体感应抑制平板筛选结果，其中JM
‑
6代表颜色为桔红色的酵母菌株，后续经测序和鉴定为粘红酵母(Rhodotorula glutinis)；
[0027]图3为不同浓度JM
‑
6酵母菌粗提物对紫色色杆菌ATCC12472生长的影响；
[0028]图4为不同浓度JM
‑
6酵母菌粗提物对紫色色杆菌ATCC2472紫色素产量的影响；
[0029]图5为筛选到具有群体感应抑制效果菌的镜检图；
[0030]图6为JM
‑
6菌株PCR扩增产物图；
[0031]图7为筛选到具有群体感应抑制效果的菌通过选取与此菌相似度最高的一部分序列，根据测序结果利用相关网站和软件绘制的此菌的系统发育树。
具体实施方式
[0032]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0033]实施例1：具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法
[0034]具体包括以下步骤：
[0035]S1、在石河子大学试验站葡萄园取土壤样品，去除杂质后过40
‑
50目筛，得到样品粉末；
[0036]除杂时，当采用大于50目的筛时，土壤样品的颗粒过于精细，筛选到菌的种类较少，当采用小于40目的筛时，土壤样品粉末中会存在较多的杂质和颗粒土块。
[0037]本实施例优选土壤样品去除杂质后过40目筛，不仅能够去除大颗粒土块和杂质的样品粉末，并且利用酵母菌分离培养本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法，其特征在于，包括以下步骤:S1、采集土壤样品得到样品粉末；S2、称取4
‑
6g样品粉末，加入终浓度为45
‑
55mg/L的链霉素，在20
‑
40℃150
‑
170r/min的摇床中培养1
‑
3h，获得菌种富集液；S3、扩大培养：使S2得到的富集液中的酵母菌充分生长，获得用于酵母菌筛选的菌液；S4
‑
S6、将菌液稀释后，进行菌种纯化和菌种发酵培养，得到发酵培养物；S7、向发酵培养物中加入有机溶剂，超声粉碎后萃取得到酵母菌种粗提物；S8、酵母菌种粗提物用甲醇重悬得到甲醇重悬粗提物；S9、通过紫色色杆菌ATCC12472筛选甲醇重悬粗提物，获得对紫色色杆菌ATCC12472紫色素具有抑制效果的粘红酵母(Rhodotorula glutinis)。2.根据权利要求1所述的具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法，其特征在于，S1中，采集土壤样品后，去除杂质后过40
‑
50目筛。3.根据权利要求1或2所述的具有群体感应抑制活性的酵母菌株培养方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂存喜，王海亮，张文举，吴妍妍，陈程，牛俊丽，齐亚银，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：