一种阿尔茨海默病动物模型、构建方法及应用技术

本发明专利技术属于动物模型构建技术领域，公开了一种阿尔茨海默病动物模型、构建方法及应用，通过利用嵌合小鼠/人淀粉样蛋白前体蛋白以及突变的人PSEN1基因，两者均在小鼠Prion启动子的控制下针对CNS神经元，构建成APP/PS1双转基因AD模型小鼠；运用CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种阿尔茨海默病动物模型、构建方法及应用


[0001]本专利技术属于动物模型构建
，尤其涉及一种阿尔茨海默病动物模型、构建方法及应用。

技术介绍

[0002]目前，阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease，AD)是一种以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的由多种病因引起的中枢神经系统退行性病变，然而，到目前为止，仍不能在早期阶段确诊AD，且该病的病因和发病机制仍未完全研究清楚。此外，它的发病与年龄密切相关，如今老龄化速度在加快，AD患病率也在逐渐增加，已成为危害人们健康的重大疾病。因此，深入揭示AD的发病机制，寻找有效而特异的治疗药物迫在眉睫。
[0003]动物模型，尤其是小鼠动物模型，是研究人类发病机制、筛选药物治疗靶点和开发治疗手段的主要工具。应用于构建AD动物模型的方法较为多样，且各具特点，其中转基因动物模型是目前研究AD较为理想且应用广泛的模型，能表征多个病理特点或较早出现的病理改变，表现与AD患者类似的临床症状，因此转基因动物模型具有非常广阔的研究及应用前景。如今有单转基因与多基因突变转基因动物模型：包括APP/PS1双转基因小鼠、APP/Tau双转基因小鼠、TAPP小鼠和APP/PS1/Tau三转基因小鼠。目前研究铁调素在AD中的作用均是通过体内或体外注射的方法，缺乏相应的动物模型。所以本
亟需解决如何获得一种更符合疾病病理特征，可为研究AD的发病机制和筛选药物提供疾病动物模型的技术问题。
[0004]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前研究铁调素在AD中的作用均是通过体内或体外注射的方法，缺乏相应的动物模型。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种阿尔茨海默病动物模型、构建方法及应用，尤其涉及一种Hepciden基因敲除的APP/PS1三转基因动物模型的构建方法及应用。
[0006]本专利技术是这样实现的，一种阿尔茨海默病动物模型的构建方法，所述阿尔茨海默病动物模型的构建方法包括以下步骤：
[0007]通过利用嵌合小鼠/人淀粉样蛋白前体蛋白以及突变的人PSEN1基因，两者均在小鼠Prion启动子的控制下针对CNS神经元，构建成APP/PS1双转基因AD模型小鼠；运用CRISPR
‑
Cas9技术将Hepcidin基因全身性敲除，从而构建APPswe/PS1dE9+HAMP
‑
/
‑
(+)三转基因动物模型。
[0008]进一步，所述阿尔茨海默病动物模型的构建方法还包括基于CRISPR
‑
Cas9系统设计靶向小鼠Hepciden基因的sgRNA。
[0009]进一步，所述小鼠/人淀粉样蛋白前体蛋白为Mo/HuAPP695swe。
[0010]进一步，所述人PSEN1基因为PS1
‑
dE9。
[0011]进一步，用于PCR鉴定的特异性引物包括：Hepciden
‑
F和Hepciden
‑
R，APP/PS1
‑
P1和APP/PS1
‑
P2，以及WT
‑
F1和WT
‑
R。
[0012]进一步，所述引物Hepciden
‑
F的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，所述APP/PS1的核苷酸序列为SEQ ID NO：2，所述WT的核苷酸序列为SEQ ID NO：3。
[0013]本专利技术的另一目的在于提供一种实施所述的阿尔茨海默病动物模型的构建方法构建得到的阿尔茨海默病动物模型。
[0014]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的阿尔茨海默病动物模型在分析阿尔茨海默病的发病机制中的应用。
[0015]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的阿尔茨海默病动物模型在筛选治疗阿尔茨海默病的药物中的应用。
[0016]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的阿尔茨海默病动物模型在非诊断方法和非治疗方法中的应用。
[0017]结合上述的所有技术方案，本专利技术所具备的优点及积极效果为：本专利技术提供的阿尔茨海默病动物模型的构建方法，通过在正常饮食喂养的成年APP/PS1小鼠，利用CRISPR
‑
Cas9技术将铁调素Hepcidin基因全身性敲除。本专利技术的构建提供了一种阿尔茨海默病动物模型，该模型稳定性强且稳定遗传，以及该动物模型在研究阿尔茨海默病的发病机制和在筛选治疗药物中的应用。本专利技术提供了一种Hepciden基因敲除的APP/PS1三转基因小鼠模型，可为研究AD的发病机制和筛选药物提供疾病动物模型的技术问题。
[0018]本专利技术提供了一种通过Hepciden基因敲除的APP/PS1三转基因小鼠模型模拟人AD疾病的方法，利用CRISPR
‑
Cas9基因敲除技术，敲除Hepciden基因；Hepciden基因敲除后的APP/PS1+Hepciden
‑
/
‑
三转基因小鼠均表现出明显的脑内老年斑沉积，铁离子聚集等多种人AD患者临床表现。本专利技术构建的模拟人AD疾病的小鼠模型，该模型稳定性强稳定遗传，与人类AD疾病表现类似，可为进一步研究AD发病机制以及基因治疗提供经济、简单、可靠的动物模型。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对本专利技术实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1是本专利技术实施例提供的阿尔茨海默病动物模型的构建方法流程图。
[0021]图2是本专利技术实施例提供的构建的Hepciden基因敲除的APP/PS1三转基因小鼠基因检测鉴定电泳图；其中，1、3、5、6为杂合APP/PS1+Hepciden
‑
/+三转基因小鼠，51、54、62、64为纯合APP/PS1+Hepciden
‑
/
‑
三转基因小鼠。
[0022]图3是本专利技术实施例提供的水迷宫实验结果示意图。
[0023]图4是本专利技术实施例提供的旷场实验结果示意图。
[0024]图5是本专利技术实施例提供的石墨炉原子吸收光谱技术检测小鼠脑铁含量的结果示意图。
[0025]图6是本专利技术实施例提供的免疫组化检测小鼠海马组织Aβ的表达示意图。
具体实施方式
[0026]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0027]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种阿尔茨海默病动物模型、构建方法及应用，下面结合附图对本专利技术作详细的描述。
[0028]如图1所示，本专利技术实施例提供的阿尔茨海默病动物模型的构建本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿尔茨海默病动物模型的构建方法，其特征在于，所述阿尔茨海默病动物模型的构建方法通过利用嵌合小鼠/人淀粉样蛋白前体蛋白以及突变的人PSEN1基因，两者均在小鼠Prion启动子的控制下针对CNS神经元，构建成APP/PS1双转基因AD模型小鼠；运用CRISPR
‑
Cas9技术将Hepcidin基因全身性敲除，杂交繁殖，从而构建APPswe/PS1dE9+HAMP
‑
/
‑
(+)三转基因动物模型。2.如权利要求1所述的阿尔茨海默病动物模型的构建方法，其特征在于，所述阿尔茨海默病动物模型的构建方法还包括基于CRISPR
‑
Cas9系统设计靶向小鼠Hepciden基因的sgRNA。3.如权利要求1所述的阿尔茨海默病动物模型的构建方法，其特征在于，所述小鼠/人淀粉样蛋白前体蛋白为Mo/HuAPP695swe。4.如权利要求1所述的阿尔茨海默病动物模型的构建方法，其特征在于，所述人PSEN1基因为PS1
‑
dE9。5.如权利要求1所述的阿尔茨海默病动物模型的构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：董贤慧，高维娟，贺小平，张天赐，孙宁宁，刘珊，李佳明，林一璨，王雅欣，张博，郭伊诺，马玉滢，
申请(专利权)人：河北中医学院，
类型：发明
国别省市：