一种可促进伪狂犬病毒增殖的猪源RIPK3基因缺失细胞株的构建方法及其产品和应用技术

本发明专利技术公开了一种可促进伪狂犬病毒增殖的猪源RIPK3基因缺失细胞株的构建方法及其产品和应用，涉及生物技术领域。构建该细胞株的载体的构建方法包括：gRNA1

【技术实现步骤摘要】
一种可促进伪狂犬病毒增殖的猪源RIPK3基因缺失细胞株的构建方法及其产品和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种可促进伪狂犬病毒增殖的猪源RIPK3基因缺失细胞株的构建方法及其产品和应用。

技术介绍

[0002]猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus，PRV)属于疱疹病毒科，α
‑
疱疹病毒亚科，具有143kb的双链线性DNA，编码70多种蛋白质。PRV的自然宿主是猪，但它可以感染大多数哺乳动物，包括猪、牛、马、啮齿动物和狗，对养殖业危害巨大。近年来，多次发现人类感染PRV的情况发生。PRV在猪外周神经系统的三叉神经节中可建立终身潜伏感染。在某些情况下，PRV可重新激活，继而导致PRV在猪场的反复流行，难以控制和根除。目前，猪伪狂犬病的防控以疫苗接种为重要手段，其中以PRV Bartha
‑
K61为代表。因此，提高PRVBartha
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K61病毒产量对疫苗生产具有重要意义。
[0003]传统意义上，细胞死亡分为调控型(凋亡，apoptosis)和非调本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可促进伪狂犬病毒增殖的猪源RIPK3基因缺失的CRISPR/Cas9双gRNA载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)gRNA1
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F和gRNA1
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R退火形成双链1，双链1再与经BbsⅠ酶切的CRISPR/Cas9载体pX459 pSpCas9
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2Apuro
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MCS连接，得到pX459
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gRNA1；(2)gRNA2
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F和gRNA2
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R退火形成双链2，双链2再与经BbsⅠ酶切的辅助载体EZ
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GuideXH连接，得到EZ
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gRNA2；(3)以HindIII和XhoI对获得的pX459
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gRNA1和EZ
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gRNA2分别进行双酶切，回收线性化酶切产物后连接，得到pX459
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gRNA1
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gRNA2，即为所述可促进伪狂犬病毒增殖的猪源RIPK3基因缺失的CRISPR/Cas9双gRNA载体；所述gRNA1
‑
F的序列为SEQ ID NO：1所示序...

【专利技术属性】
技术研发人员：勾红潮，李春玲，谢思豪，卞志标，翟少伦，蔡汝健，楚品品，蒋智勇，张昆丽，李艳，宋帅，杨冬霞，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：