一种基于通用分选标签质粒的基因转染系统、方法及试剂盒技术方案

本发明专利技术涉及一种基于通用分选标签质粒的基因转染系统、方法及试剂盒。为了解决在转染阳性细胞分选中存在的必须在分选标签质粒上进行目的基因克隆构建的问题，本发明专利技术提供了一种使用通用分选标签质粒与目的基因质粒共转染的方法，通过细胞分选即可获得目的基因阳性的细胞。经本发明专利技术验证，上述使用通用分选标签质粒共转染的方式能够高效富集目的基因阳性细胞，显著提高基因敲低以及基因过表达的水平，获得与单质粒转染体系相当的效果。获得与单质粒转染体系相当的效果。获得与单质粒转染体系相当的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种基于通用分选标签质粒的基因转染系统、方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于DNA转染
，具体涉及一种基于通用分选标签质粒的基因转染系统、基因转染方法及试剂盒，还涉及一种提高基因传递效率的方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]在基因功能研究以及相关的应用领域，通常需要使用基因传递技术将目的基因或者载体导入到细胞中，过表达、敲低或敲除特定基因，或者对特定基因进行基因编辑，来研究其生物学功能，或者使用基因改造的细胞实现疾病治疗等目的。虽然基因传递研究取得了很大的进展，在多种细胞上实现了较高的转染效率，但是在难转染的细胞比如淋巴瘤/白血病细胞以及原代细胞中，较低的基因传递效率依然是亟需解决的关键问题。在基因递送效率难以进一步提高的情况下，通过分子标签分选和富集转染阳性细胞的方法是有效的间接提高基因递送效率的策略。现有的方法主要包括流式细胞荧光分选(FACS)，磁性细胞分选(M本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于通用分选标签质粒的基因转染系统，其特征在于，所述转染系统中包括通用分选标签质粒及含有目的基因的质粒；所述通用分选标签质粒的表达框中，具有膜定位信号肽、荧光蛋白及亲和分选标签的编码序列。2.如权利要求1所述基于通用分选标签质粒的基因转染系统，其特征在于，所述通用分选标签质粒中，所述膜定位信号肽包括但不限于BY55,DAF,CEAM7中的一种；所述跨膜结构域包括但不限于ITB3,ITA5,ITAV中的一种。3.如权利要求2所述基于通用分选标签质粒的基因转染系统，其特征在于，所述膜定位信号肽为膜外定位信号肽，所述膜外定位信号肽通过糖基磷脂酰肌醇分子锚定于细胞膜脂质双分子层的外层；或，所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白、mCherry，dsRed，RFP，YFP或BFP中的一种；进一步优选的，所述荧光蛋白为EGFP；或，所述亲和分选标签为CBP，MBP、HIS
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Tag蛋白标签，或Twin
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Strep
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tag、GST中的一种。4.如权利要求1
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3任一项所述基于通用分选标签质粒的基因转染系统，其特征在于，所述通用分选标签质粒中包括BY55跨膜结构域的膜外定位信号肽、绿色荧光蛋白和Twin
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Strep
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄启来，杨乐乐，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：